复正胶囊对脑缺血复灌注致大鼠行为学障碍及脑内自由基水平的影响

1、    复正胶囊对脑缺血复灌注致大鼠 行为学障碍及脑内自由基水平的影响*        关键词复正胶囊行为学障碍氧自由基中分类号R285.5 复正胶囊是我们依据多年的临床实践经验，针对脑梗死后并发痴呆的病机特点，以益气活血通络为主，兼以补肾化痰之药物共同组成，临床观察表明，该药对多发脑梗死痴呆有较好的疗效1。为了进一步证实其治疗作用，本文初步观察其对脑缺血复灌注致大鼠行为学障碍及其脑内自由基水平的影响，现报道如下。1材料与方法1.1实验动物选用1214月龄、体重35

2、7±37g雄性Wistar大鼠120只，由湖北医学科学研究院实验动物中心提供。1.2药物来源及制备复正胶囊由补阳还五汤化裁组成，广西中医学院第一附属医院制剂室生产(每粒含生药1.5g)。用时配成0.3g/ml悬液。西药喜得镇(Hydergine)，天津华津制药厂生产。用时配成0.3mg/ml悬液。1.3动物模型的建立2购回大鼠饲养3天后，观察无异常即进行造模，3%戊巴比妥钠按1mg/kg体重腹腔注射麻醉，固定于大鼠夹板上，暴露椎动脉，结扎并点灼阻闭，然后暴露双侧颈动脉，用动脉夹夹闭5分钟，开放1小时，反复3次，术毕缝合切口，待醒后放回笼中饲养，于第7天进行行为学筛选，共有40只入选。

3、行为学障碍检测标准3：(1)手术前后达到暗环境被动顺避试验内容(即5min内仍呆在明室而不进入暗室)所需的电击次数(P0.05)。(2)手术前后游迷宫进入盲端错误次数(P0.05)。1.4动物分组及治疗方法将入选大鼠随机分为4组：模型组、西药组、复正胶囊大剂量组、复正胶囊(以下简称为中药)小剂量组，每组10只，另取同批正常大鼠10只作空白对照组，10只作假手术组(即单做颈中线切开，不做缺血灌注损伤)，中药大、小剂量组用复正胶囊悬液分别按10ml/kg体重和5ml/kg体重量灌胃，每日2次，连续21天，西药组用喜得镇悬液，模型组、空白组、假手术组均用生理盐水分别按10ml/kg体重量灌胃，次数及

4、疗程同中药组。1.5行为学的检测参照文献4采用避暗法和水迷宫法。各组于用药后第20天上午开始训练，经过学习训练已达到暗环境被动回避试验内容的大鼠，于24小时后再次进行避暗试验，测定是将动物放入明箱，记录大鼠自放入明箱到钻洞进入暗箱的潜伏期，5min内进入暗箱的错误次数。5min内未钻洞者，潜伏期按300s计算。水迷宫试验分别于用药后第7天，第14天和第21天进行，训练时将大鼠从长臂端尾对叉口轻轻放入水中，以其在15s内直接抵达平台为正确反应，大鼠抵达平台后休息15s再重复训练，每天训练10次，记录其进入盲端错误次数以及平均游泳时间。1.6LPO和SOD测定取上述各组大鼠脑组织，精确称重，以pH

5、7.0的PBS缓冲液制成10%的匀浆液，以3000r/min离心10min，取上清测定LPO，然后用乙醇-氯仿提取匀浆液中SOD待测。LPO采用硫代巴比妥酸(TBA)法5测定组织中脂质过氧化反应的最终产物丙二醛(MDA)含量。SOD采用邻苯三酚-硝基四氮唑蓝法(即Pyrogallol-NBT法)6测定。1.7统计方法所有资料均采用<"T4501 (861 bytes)" src="/med/cano/201003/20100324163118937" 15 12>±s表示，两组间均数比较采用t检验。2结果2.1避暗试验结果表明用药各

6、组大鼠在训练阶段和复习阶段进入暗箱的潜伏期均长于模型组(P0.05)，5min内进入暗箱错误次数亦显著低于模型组(P0.01)，其中中药大剂量组2个项目均优于中药小剂量和西药组(P0.05)，提示中药复正胶囊有较好的改善学习记忆力的作用。结果见表1。表1药物对拟痴呆大鼠学习记忆力的影响(避暗试验)<"T4501 (861 bytes)" src="/med/cano/201003/20100324163118937" 15 12>±s组别动物数训练阶段复习阶段潜伏期(s)5min错误次数潜伏期(s)5min错误次数空白组10178.

7、56±20.502.13±0.64201.30±19.540.90±0.35假手术组10143.67±18.782.98±0.71197.67±18.301.02±0.64模型组887.56±18.377.89±1.20105.72±15.876.73±0.72西药组9138.34±20.324.93±1.07152.63±16.204.05±0.34中药大剂量组9183.54±18.713.15±0.86221.5

8、0±20.702.17±0.20中药小剂量组8127.98±13.675.27±0.97149.67±18.984.56±0.18     注：治疗期间大鼠死亡数6只。与模型组比较：潜伏期P0.05，5min错误次数P0.01，分别与西药组和中药小剂量组比 较：P0.05 2.2水迷宫试验结果表明用药各组大鼠游迷宫所需时间及进入盲端错误次数均低于模型组，于第7天进入盲端错误次数比较仅中药大剂量组有统计学意义(P0.05)，其余2组则无统计学意义(P0.05)；所需时间3组均无统计学意义(P0.0

9、5)。于第14天西药组2项均无统计学意义(P0.05)，而中药大、小剂量组则显著低于模型组，有统计学意义(P0.01和P0.05)。于第21天3组2项均显著低于模型组且有统计学意义(P0.01和P0.05)，其中中药大剂量组优于西药组和中药小剂量组(P0.05)。同样提示复正胶囊有提高学习记忆力的作用。结果分别见表2和表3。表2药物对拟痴呆大鼠学习记忆力的影响(游迷宫所需时间S)<"T4501 (861 bytes)" src="/med/cano/201003/20100324163118937" 15 12>±s组别动物数第7天

10、第14天第21天空白组1020.50±3.2719.87±2.8318.00±2.78假手术组1023.17±3.1821.56±4.0719.78±2.34模型组867.53±7.8053.64±6.8751.67±3.56西药组947.64±6.2143.67±5.8035.27±1.86中药大剂量组945.72±3.2437.80±2.7021.68±3.70中药小剂量组849.87±3.6740.56±3.9032.1

11、2±2.13     注：与模型组比较：P0.01P0.05；与西药组和中药小剂量组比较：P0.05 表3药物对拟痴呆大鼠学习记忆力影响(游迷宫错误次数)<"T4501 (861 bytes)" src="/med/cano/201003/20100324163118937" 15 12>±s组别动物数第7天第14天第21天空白组100.98±0.370.87±0.270.70±0.23假手术组101.27±1.021.15±1.02

12、0.99±0.63模型组86.57±1.286.07±1.205.33±1.07西药组95.48±1.285.27±0.973.87±1.03中药大剂量组93.87±0.983.56±1.271.83±0.46中药小剂量组84.68±1.704.06±0.873.40±0.87     注：与模型组比较：P0.01P0.05；与西药组及中药小剂量组比较：P0.052.3LPO和SOD结果见表4。 表4药物对拟痴呆大鼠脑组织LP

13、O和SOD的影响(<"T4501 (861 bytes)" src="/med/cano/201003/20100324163118937" 15 12>±s)组别动物数LPO(mol/g.wt)SOD(/mg.pr)空白组10256.78±11.877.58±1.04假手术组10278.63±11.306.98±1.02模型组8397.27±15.604.01±1.11西药组9368.97±13.475.89±0.98中药大剂量组9263.56

14、7;11.076.07±1.33中药小剂量组8345.62±12.384.99±1.04     注：与造模组比较：P0.01，P0.05由表4可知，行为学障碍大鼠脑内LPO水平升高，而SOD含量降低，与空白组比较有非常显著性差异(P0.01)，表明造模后脑内自由基水平升高，经用药后各组均得到不同程度的改善，而中药大剂量组则较明显，与模型组比较有非常显著性差异(P0.01)，中药小剂量组则稍差，与模型组比较仍有显著性差异(P0.05)，西药组LPO虽有一定降低，但无统计学意义(P0.05)，SOD含量升高与模型组比较有显著性

15、差异(P0.05)。 3讨论脑血管性痴呆是由于脑血管疾病造成脑部缺血导致神经元的损伤、死亡而引起，如果缺血复灌注后损伤可进一步加重其发生的可能，临床上主要发生于多次脑梗死，故又可称为多发脑梗死性痴呆(multi-infarct dementia MID)。目前尚无成熟的血管性痴呆动物模型，但通过脑缺血复灌注致行为学障碍动物，基本符合血管性痴呆发病过程，有相似的病理改变，是研究血管性痴呆的必要手段。本文实验表明，脑缺血复灌注致行为学障碍大鼠学习记忆力明显下降，脑内LPO升高，SOD下降，与空白组比较均有非常显著性差异(P0.01)，经过治疗后，各项指标均得到不同程度的改善，提示复正胶囊具有显著地

16、改善学习记忆力的作用，同时有降低自由基损害的作用。对于脑血管性痴呆的发病机理目前尚未彻底阐明，主要认为与脑缺血后神经递质和神经肽的改变、兴奋性氨基酸的神经毒性作用、细胞内Ca2+超载、自由基损害等有关7。自由基对智能的损害主要由于自由基对细胞及细胞膜上不饱和脂肪酸的破坏和过氧化及MDA产生。动物实验表明，实验性脑缺血动物的学习记忆下降，脑血流减少，脑内葡萄糖利用率下降，ATP生成减少，乳酸含量增加，脑组织中脂质过氧化产物(如MDA)含量增加，MDA是自由基对生物细胞膜损伤的主要代谢产物，它能交链蛋白质、脂类、核酸及糖类，致使生物膜变性和破坏，由于DNA发生突变，交链等影响了信息传递、转录和复制

17、，导致蛋白质合成能力下降或合成蛋白质功能紊乱，从而表现出记忆力和智力下降。本实验结果，复正胶囊有提高SOD活力、降低LPO水平，提示其改善学习记忆的治疗作用可能是通过减轻自由基的损害而实现。作者单位：黄立武蓝青强广西中医学院第一附属医院(南宁市园湖路2号530023)张茂林湖北中医学院(武汉武昌云架桥110号430061)参考文献1 黄立武，蓝青强，董少龙.复正胶囊治疗多发脑梗死性痴呆的临床观察.广西中医药.1999，22(5)：142 朱愉，多秀瀛.实验动物的疾病模型.天津：天津科技翻译出版公司，1997.3003 王晋源，陈会友，郑清莲.中药复方治疗血管性痴呆的实验研究.现代中药.1998，(2)：314 陈奇.中药药理实验方法.北京：人民卫生出版社出版，1994.1985 Rurgby J. Lipid Peroaidatio