凯普21种基因型HPV分型与其它比较

1、凯普HPV分型产品与市场其它HPV检测产品的比较 凯普HPV21种基因型分型检测试剂盒介绍 与美国杂交捕获试验（HC-2）的比较 与深圳亚能HPV分型检测试剂盒的比较人乳头状瘤病毒核酸扩增分型检测试剂盒人乳头状瘤病毒核酸扩增分型检测试剂盒 简称：简称：HPVHPV基因分型检测试剂盒基因分型检测试剂盒 应用：妇女子宫颈癌的早期筛查应用：妇女子宫颈癌的早期筛查 尖锐湿疣辅助诊断尖锐湿疣辅助诊断HYBRIMAXHYBRIMAX医用核酸分子快速杂交仪医用核酸分子快速杂交仪 凯普核酸分子快速杂交仪拥有二项美国专利凯普核酸分子快速杂交仪拥有二项美国专利(美国专利号美国专利号 5 741 647，6 020

2、 187 )和一项中国和一项中国专利专利(中国专利号中国专利号 02102795.1) 。粤食药监械粤食药监械(准准)字字2007第第2400216号号 。 以全新的导流杂交理念将传统以全新的导流杂交理念将传统DNADNA、RNARNA和蛋白和蛋白 杂交需几小时到数天的杂交时间缩短为几分钟到杂交需几小时到数天的杂交时间缩短为几分钟到十几分钟内完成，为低密度基因芯片的最佳工作十几分钟内完成，为低密度基因芯片的最佳工作平台。平台。金属反应室金属反应室金属多孔板金属多孔板塑料薄膜塑料薄膜杂交膜杂交膜硅胶圈硅胶圈反应分隔室反应分隔室压扣盖压扣盖机器外壳机器外壳反应室反应室HYBRIMAXHYBRIMA

3、X医用核酸分子快速杂交仪医用核酸分子快速杂交仪导流杂交原理导流杂交法与传统杂交法比较动力学比较动力学比较传统杂交法传统杂交法导流杂交法导流杂交法杂交时间1小时10分钟在杂交膜上的反应方式目的DNA只能与杂交膜表面探针进行杂交反应目的DNA可与杂交膜表面及孔径中的探针进行杂交反应，立体式杂交杂交背景(膜片背景颜色）高（深）低(浅)交叉污染多次开关管盖,完全手工操作，需要向外倾倒液体，易污染；有同一容器内洗涤过程，容易交叉污染实验全过程在隔离的反应室内完成，通过外部负压吸引，分子不易向外扩散，不易交叉污染。无效复性高低杂交效率低高 凯普HPV21种基因型分型检测试剂盒介绍 与美国杂交捕获试验（HC

4、-2）的比较 与深圳亚能HPV分型检测试剂盒的比较试验原理试验原理凯普凯普HPV分型分型 HC-2*分型分型分型分型不分型不分型检测基因型检测基因型21种基因型种基因型 13高危型高危型检测成本检测成本成本低成本低试剂成本试剂成本仪器成本仪器成本内对照内对照成本高成本高试剂成本试剂成本仪器成本仪器成本6个对照个对照仪器平台仪器平台可扩展性强可扩展性强可扩展性差可扩展性差HPV检测方法比较检测方法比较凯普凯普HPV基因分基因分型检测试剂盒型检测试剂盒HC-II96.61%98.48%95.74%87.61%来源:临床考核报告来源：内部研究资料来源：内部研究资料&. limitations

5、 of the procedure DIGENE high-risk HPV DNA Test hybrid capture-II,P24 来源：来源：limitations of the procedure DIGENE high-risk HPV DNA Test hybrid capture- II,P24 &. Mario Poljak, Irena J. Marin, Katja Seme, Hybrid Capture II HPV Test detects at least 15 human papillomavirus genotypes not included in

6、 its current high-risk probe cocktail. Adriana Vince Journal of Clinical Virology 25 (2002) 89-97 1. PCR法检测HPV不准确，容易出现污染。 多家医院的临床基因扩增实验室已经得到国家临检中心和省临检中心认证，有相应的硬件配置和管理软件规范。 多种PCR检测试剂已经得到国家药监局认证，PCR方法已得到临床医生的广泛认可。 HC-方法是采用分子杂交+化学发光使信号放大的原理，无需基因扩增。但HC-检测系统采用专利的全长8000bp的RNA探针及专利的抗DNA-RNA抗体。容易造成交叉反应和假阳性。

7、2. PCR方法的交叉污染和假阳性。 样本间的交叉污染在任何一项检测中都需要避免。不是PCR方法所特有。 通过PCR保证了检测的灵敏度，引物和探针的碱基特异配对，充分保证了检测的特异性。 3. 分型的意义。 随着研究的进展，对不同高危型HPV的致癌风险的研究不断深入；新的高危型HPV不断增加。4. HC-2是定量或半定量的试剂吗？HC-2 的说明书已明确表述其检测为定性检测，定量或半定量的概念是经销公司在市场推广过程中的概念。如其为定量或半定量，那么它的结果可以给出HPV的载量或载量范围吗？HC-2的结果判读类似于抗体夹心法ELISA，其OD值的比值与样本分子的量没有很好的线性关系，所以不能给

8、出定量的值。同样，凯普HPV分型试验的膜杂交点的灰度也不能很好的反映病毒的载量，所以不能用灰度的深浅推断HPV的载量。目前对病毒载量的测定通常使用荧光定量PCR的方法。对宫颈脱落细胞样本中HPV定量要做到对细胞和病毒同时定量才有意义。 凯普HPV21种基因型分型检测试剂盒介绍 与美国杂交捕获试验（HC-2）的比较 与深圳亚能HPV分型检测试剂盒的比较实验原理步骤：步骤： 杂交进行时杂交进行时样本的单链样本的单链DNA与薄膜上的探针结合与薄膜上的探针结合 样本样本DNA带有生物素的标记带有生物素的标记 然后然后把酶加到结合物上，酶会与生物素结合把酶加到结合物上，酶会与生物素结合 再加入底物溶液，

9、酶便能催化颜色物的形成，从而显示杂交的产生再加入底物溶液，酶便能催化颜色物的形成，从而显示杂交的产生探針单链DNA（生物素标记）酶底物薄膜实验步骤实验步骤DNA提取（凯普提取（凯普&亚能）亚能）临床样本临床样本宫颈脱落细胞宫颈脱落细胞离心，获得细胞离心，获得细胞裂解细胞，裂解细胞，释放释放DNA样本样本DNA实验步骤实验步骤PCR过程（凯普过程（凯普&亚能）亚能）样样本本DNA加样加样PCR MIX凯普凯普(40循环）循环） 亚能亚能(40循环）循环） 95 9min 95 10min 95 20s 94 30s55 30s 42 90s 72 30s 72 30s72 5mi

10、n 72 5min凯普凯普 亚能亚能实验步骤实验步骤杂交过程（凯普杂交过程（凯普&亚能）亚能）PCR产物产物热变性热变性沸水中加热沸水中加热10 min 95 5min 冰上冰上2min杂交杂交45 10min51 1 h过夜过夜 实验步骤实验步骤杂交过程（凯普杂交过程（凯普&亚能）亚能）凯普凯普 亚能亚能洗膜，去除洗膜，去除未杂交的未杂交的PCR产物产物在同一管在同一管子内子内:洗多洗多张膜张膜-交叉交叉污染；洗污染；洗1张膜张膜-耗费耗费试剂。试剂。45 800ul 3次次51 40ml 15 min 1次 酶标酶标酶与膜上目酶与膜上目标分子结合标分子结合室温轻摇浸泡室温轻

11、摇浸泡30 min 封阻封阻5min；酶标；酶标25 3.5min 实验步骤实验步骤杂交过程（凯普杂交过程（凯普&亚能）亚能）凯普凯普 亚能亚能洗膜，去除洗膜，去除未结合的酶标液未结合的酶标液 800ul 4次次显色显色膜上的酶与膜上的酶与底物反应底物反应36 3-5min A液室温轻摇洗液室温轻摇洗2次，每次次，每次5 min。用用C液室温洗膜液室温洗膜12 min 现配显色液，避光显色现配显色液，避光显色10 min 实验结果（凯普实验结果（凯普&亚能）亚能）凯普凯普 亚能亚能阴性结果阴性结果阳性结果阳性结果无效结果无效结果阴性对照阴性对照阳性对照阳性对照阳性结果阳性结果H

12、PV分型试剂（凯普亚能）凯普（导流杂交法）凯普（导流杂交法）亚能（常规膜杂交法）亚能（常规膜杂交法）专利情况专利情况2 2项美国项美国/1/1项中国专利项中国专利无无操作原理操作原理导流杂交法导流杂交法传统杂交法传统杂交法操作时间操作时间4 4小时左右小时左右 1 1天左右天左右操作特点操作特点1.杂交试剂直接可以使用杂交试剂直接可以使用2.杂交操作仅开盖一次，每个样杂交操作仅开盖一次，每个样本放在不同的分隔室中，将产本放在不同的分隔室中，将产物间的交叉污染降到最低；物间的交叉污染降到最低；1.杂交试剂需在杂交时配置杂交试剂需在杂交时配置2.操作过程中需进行多次开操作过程中需进行多次开盖盖,

13、,洗膜等操作在同一管洗膜等操作在同一管子里进行，子里进行，容易发生产物容易发生产物间交叉污染；间交叉污染；实验质控实验质控完善的内对照：设有完善的内对照：设有PCRPCR及杂交对及杂交对照，以确保对照，以确保对PCRPCR及杂交过程及杂交过程全面控制；避免因系统误差导全面控制；避免因系统误差导致的漏检。致的漏检。无无PCRPCR内对照点内对照点, ,容易漏诊出容易漏诊出现假阴性现象；需要阳性现假阴性现象；需要阳性阴性外对照质控。阴性外对照质控。HPVHPV基因型基因型2121种种（20种种+CP8304）；其中；其中CP8304为中国人群感染比较为中国人群感染比较常见的基因型，约占总常见的基因

14、型，约占总HPV感染的感染的5%左右左右2323种种（20种种+73，83，MM4）；其中；其中73，83，MM4在中国人群中感染在中国人群中感染很少见很少见灵敏度较低的灵敏度较低的基因型基因型HPV35HPV35，4343的灵敏度稍差，但中国的灵敏度稍差，但中国人群感染率较低。人群感染率较低。HPV52,53HPV52,53(1，2)的检测灵敏度的检测灵敏度较差。较差。HPV52HPV52是中国人常是中国人常见感染的高危基因型见感染的高危基因型(1,3,4)。其他方面的比较（凯普其他方面的比较（凯普 & 亚能）亚能）凯普凯普亚能亚能学术支持学术支持全国范围的专家团队，多家全国范围的专家团队，多家有影响力的医院。有影响