2012级全日制研究生分生作业

1、基因诊断作业名词解释：基因诊断：又称分子诊断，即通过分子生物学和分子遗传学技术，直接检测遗传物质结构和表达是否异常，从而对疾病做出判断的方法。 实时荧光定量PCR :即实时监测PCR扩增产物并进行解析的方 法，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时 监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的 方法。问答：基因诊断常用到的方法有哪些？答：（1） DNA诊断：核酸分子杂交聚合酶链式反应（PCR） 限制性酶切图分析DNA测序DNA芯片技术。（2） RNA诊断： 反转录PCRNorthern印记杂交实时荧光定量 PCR表达谱 基因芯片。TaqMan技术如何设计引物和

2、探针？答：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针， 该探针为一寡核甘酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭 荧光基团。 探针完整时， 报告荧光基团发射的荧 光信号被淬灭荧 光基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'-邠切酶活性将探针酶降 解，使报告荧光基团和淬灭基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现 了荧光信号的积累与 PCR产物形成完全同步。如何对镰刀形细胞贫血和地中海贫血进行基因诊断？答：镰状细胞贫血的基因诊断原理在于它的血红蛋白中的 B珠蛋白 基因发生了突变， 导致（3链第6位谷氨酸变为缎氨酸。基于 ZT

3、的变换，改变了限制性内切酶的位点，因此在酶解 正常人DNA和 患者DNA后再用标记的B珠蛋白基因为探针做 Southern杂交时， 就会出现不同的DNA条带。B 654地中海贫血是指发生在（3珠蛋白基因第二外显子第 654位C T突变而引起的一种地中海贫血。该突变在IVS-II第654位上出现的单碱基取代产生了一个 新的GT二核甘酸，联同旁侧序列构成了一个新的5'端一场的剪切位点， 同时还激活了 IVSII第579 位处3'端隐匿的剪切位点，从而将 IVS- H nt579nt652之间一段 73bp的内含子 序列作为额外的外显子插入到外显子2和外显子3之间，产生了一场的B珠蛋

4、白mRNAo在异常剪切的mRNA中存 在一个提前的终止密码子，使翻译提前中止而产生截断的、不稳 定 的异常珠蛋白，导致了正常（3珠蛋白链合成减少。文献：甲状腺癌的分子诊断有哪些进展？ 答：甲状腺癌相关基因1、 染色体重排：RET/PTCS因突变与甲状腺乳头状癌（PTC的发 生关系密切。RET/PT霞因突变变现为染色体内 DNA的重排，重排后 的RET基因由不同启动子启动该基因的过度表达。有研究显示 RET/PTCt排在有辐射接触史的 PTC患者中常见，并且 RET/PTCt排 有关的PTC患者较少进展为PDTC或者ATC在未分化甲状腺癌中也 较少发现。2、 RA渝变：RAS编码的蛋白能够传递生

5、长信号，结合 GTP时为 活化状态，而结合GDP时为失活状态，正常状态下RAS蛋白与GDP 结合。参与MAPK途径的信号传导。激yS RAS的机制主要是点突变， 导致其GTPase活性下降，使其保持持续活化状态，激活下游MAPK 级联反应，导致细胞大量增殖而发生恶性转化。RAS突变在滤泡性甲 状腺癌、PDTC ATC患者中常见，而在PTC患者中较少见。3、BRAF基因突变和MAPK促分裂原活化蛋白激酶)信号转导途径： BRAF基因突变是在人体肿瘤中导致的 MAPK信号通路异常激活的主 要原因。BRAF突变的蛋白质产物中第600位的缴氨酸被谷氨酸替代， 该点突变可导致激活BRAF激酶，继而激活M

6、APK下游传导通路。该 基因突变在PTCffi PTC起源的ATC中常见。大量临床研究表明 BRAF 基因突变和PTC的侵袭、转移和复发有关，并且与PTC患者细胞摄碘 能力的的散失也有关联。4、 磷脂酰肌醇-3-激酶信号通路(PI3K/Akt pathways): P13K/Akt细胞信号通路与细胞的生长、增殖、生存及肿瘤发生有关。Akt有三种形式，Akt-1,Akt-2和Akt-3。激活的Akt磷酸化下游反应蛋白，并可 放大信号级联，促进细胞异常增殖和抑制凋亡。而PTEN可以使PIP3去磷酸化，从而阻断该信号通路。Akt-1,Akt-2在甲状腺癌中是最常见 及重要的。有报道，在甲状腺癌中发现

7、 PIK3CA的复制和放大，尤其 是FT3口 ATC止匕外，PIK3c颇变在ATC中特别常见，在已分化甲状 腺癌中少见但可以发生。PI3K通路中大量基因的改变，包括PIKC颇 变和放大，Ras突变和PTEN突变被发现有相对较高的患病率，尤其 是FTCffi ATC肿瘤。上述改变可同日t存在，还可以与 BRAF突变同时 在甲状腺肿瘤患者中发现，尤其是 ATC在81%ATC升发现可同时激 活MAP通道和PI3K通道的基因改变。针对多个信号通道，尤其是 MAP激酶和PI3K/Akt通道，在甲状腺癌中可能是一种有效和必要的 治疗策略。5、 PAX8-PPA吊的重排是染色体 t (2; 3) (q13;

8、 p25)异位的结果，不仅在甲状腺癌可发现，特别是FTC而且在滤泡状腺瘤中也有PAX8-PPAR的重排。它可导致FTC细胞失分化，从而转化为低分化 甲状腺癌(PDTC)在ATC的作用还不明确。6、 P53基因失活：P53基因点突变导致基因的失活，在ATC口 PDTC分别有约60嘛口 25%的发生率。并且，在同时存在分化良好和未分化 的成分的肿瘤组织中，P53基因突变也仅仅发生在未分化的肿瘤细胞。所以推测P53基因的失活发挥着使肿瘤细胞失分化(表型改变)，从 而导致PDT5口 ATC发生的作用。7、 甲状腺癌的表观遗传调控：在甲状腺癌中最显著的是 CpG岛的 DNA甲基化模式改变，如钠-碘同向转运体和促甲状腺素受体。DNMTs 引起的启动子的甲基化会引起基因沉默和甲状腺癌的进一步去分化。所以应用DNMT抑制剂可以起到是肿瘤再分化，从而对提高肿瘤对一 般的治疗方式，比如碘131的敏感性。另外组蛋白的转录后修饰的研 究近