Wnt信号传导通路在塞来昔布抗结肠癌生长中的作用

1、Wnt信号传导通路在塞来昔布抗结肠癌生长中的作用         10-09-14 11:29:00     编辑：studa20                 作者：赵士彭 蔡建辉 赵发 徐德龙 卞红磊 张燕 桂林  【摘要】  目的 研究Wnt信号传导通路在塞来昔布抗结肠癌生长中的作用。方法

2、将人结肠癌HT29细胞注射于裸鼠背部皮下建立移植瘤模型，16 d后，将裸鼠随机分为对照组、低、中和高剂量塞来昔布组（25、50和100 mg·kg-1·d-1），对照组灌胃给予灭菌蒸馏水，各塞来昔布组给予相应剂量的塞来昔布。给药35 d后，以免疫组织化学方法检测瘤组织COX2蛋白表达，以TUNEL方法检测细胞凋亡，以Western印迹方法检测凋亡抑制蛋白生存素（survivin）和连接素（catenin）蛋白的表达。结果 低、中和高剂量塞来昔布组的抑瘤率分别为34.94%、39.20%和59.20%，与对照组比较，塞来昔布各组移植瘤体积明显缩小(P0.05)，各组COX2、

3、survivin和catenin蛋白表达水平均明显降低（均P0.05）。塞来昔布对肿瘤生长、细胞凋亡、COX2和survivin表达的影响程度随用药剂量的增加而增强。结论 不同剂量的塞来昔布均能明显抑制结肠癌移植瘤的生长，其抑制作用呈明显的剂量依赖性，这种作用是通过COX2依赖或非依赖途径对Wnt信号通路的抑制来诱导细胞凋亡实现的。低剂量塞来昔布是临床治疗的较好选择。 【关键词】  结肠癌；环氧化酶2抑制剂；survivin；连接素；细胞凋亡    【Abstract】  Objective  To  study the e

4、ffect of Wnt signal pathway on celecoxib against colon cancer.Methods  Human colon cancer HT29 cells were injected into the BALB/c nude mice back subcutaneously to establish transplantable tumor model.After 16 days，mice were randomly divided into control group and，low，middle and high dose celec

5、oxib groups (25,50 and 100 mg·kg-1·d-1).Mice were given sterilized distilled water and different doses of celecoxib in control and different celecoxib groups respectively.The expression of COX2 protein was measured by immunohistochemistry method，apoptotic cell was detected by TUNEL，and apo

6、ptosis inhibition protein survivin and catenin protein were examined by Western blot in carcinomic tissue.Results  The inhibition rate of low，middle and high dose of celecoxib was 34.94%，39.20% and 59.20% respectively.Compared with control group，the volumes of transplantable tumor of three dose

7、 of celecoxib groups were all small(all P0.05),and the expressions of COX2，survivin,and catenin were low (all P0.05).The effect of celecoxib on tumor growth，cell apoptosis，and the expressions of COX2 and survivin turned large with the increasing of dose.Conclusions  Celecoxib can suppress tumou

8、r growth in different dose and the inhibition effect has obvious dosedependence，which come true by inhibiting Wnt signal pathway dependent or independent on COX2 and inducing cell apoptosis.Low doses of celecoxib is a better choice for the clinical treatment.    【Key words】  Colo

9、n cancer；COX2 inhibitor；Survivin；catenin；Cell apoptosis    非甾体抗炎药(NSAIDs)和昔布类选择性环氧化酶2(COX2)抑制剂可抑制COX2的活性，使人类患结肠癌的危险性下降40%50%1。目前对COX2抑制剂抗结肠癌生长的作用机制未完全明确。Wnt信号传导通路中的多个成员在结肠癌癌变过程中出现异常改变2，研究认为COX2抑制剂舒林酸可通过抑制Wnt通路诱导肝癌细胞凋亡3，并可抑制结肠癌细胞抗凋亡蛋白生存素(survivin)的表达。COX2在瘤组织中的表达与Wnt信号传导通路中的关键因子连接素(cat

10、enin)存在相关性。但COX2抑制剂在体内如何影响Wnt信号传导通路中的信号传递未见报道。本实验通过建立人结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型，以不同剂量选择性COX2抑制剂塞来昔布对裸鼠结肠癌模型分组进行干预治疗,研究塞来昔布对人结肠癌裸鼠移植瘤生长、细胞凋亡及Wnt信号通路中凋亡抑制蛋白survivin和catenin表达的影响。    1  材料与方法    1.1  细胞培养及裸鼠皮下移植瘤模型的建立    1.1.1  实验动物  45周龄BALB/c雌性裸小鼠40

11、只，体重2024 g（中国医学科学院北京动物研究所），实验动物合格证编号：SCXK20050013。于无特定病原体环境饲养。    1.1.2  细胞培养  小牛血清（杭州四季青公司）；胰蛋白酶和一次性培养瓶（美国Hyclon公司）；人结肠癌细胞株HT29和D/F12培养基（中国协和医科大学基础医学院基础医学细胞中心）。使用含10%新生牛血清、 100 U/ml青霉素和100 U/ml链霉素的D/F12培养基，培养HT29细胞于37含5%CO2培养箱中，适时消化传代。    1.1.3  模型建立及分组干

12、预治疗  处于对数生长期的HT29细胞，以0.25%的胰酶、0.02%EDTA液进行消化，以血细胞计数板进行计数后用不含血清的D/F12培养基稀释，细胞密度为1.25×107/ml，每只裸鼠皮肤消毒后以1 ml注射器分别于颈背部皮下注射0.2 m1细胞悬液，接种细胞2×106/只。定期观察小鼠精神、饮食及排便等情况，游标卡尺测量肿瘤结节的长径(a)、短径(b)，按公式V=ab2/2，估算肿瘤近似体积。待移植瘤平均直径约5 mm后(细胞种植后第16天)，将裸鼠随机分为对照组、塞来昔布低、中和高剂量组（25、50和100 mg·kg-1·d-1），每组10只。塞来昔布（辉瑞制药有限公司）采用灌胃给药，对照组灌胃给予灭菌蒸馏水。给药35 d后，测量肿瘤体积，计算抑瘤率，处死动物留取肿瘤组织，部分置于4%多聚甲醛溶液中固定，常规包埋切片。部分置于液氮中冻存备用。