南京工业大学硕士论文答辩兼容模式

1、南京工业大学硕士论文答辩兼容模式目目录录孟鲁司特钠颗粒的质量研究孟鲁司特钠颗粒的质量研究123456一、文献综述一、文献综述一、文献综述一、文献综述研究背景研究背景0203全球哮喘患者约3亿人，中国患者约3000万，约一半是儿童。 04我国空气污染越发严重，哮喘患者经受更大的身体和精神折磨。哮喘是一种以可逆性气流受限为特征的气道疾病。发作原因有遗传和环境两方面；如果治疗不及时、不规范，很可能致命。孟鲁司特钠是一种对儿童哮喘有很好疗效的药物，由美国 Merck 公司开发生产，目前剂型为片剂、咀嚼片和颗粒剂。01孟鲁司特钠作为较强效的特异性半胱氨酰白三烯受体拮抗剂，通过阻断白三烯的致炎作用，控制哮

2、喘发作。 对各种类型的哮喘均有疗效，不良反应少，耐受性和依从性强。每种药物都有其独特的临床治疗优势，同时也伴有不同的临床不良反应。 受体受体激动剂激动剂（急性首（急性首选药）选药）抗生素抗生素类（通类（通用药）用药）糖皮质糖皮质激素激素（最快（最快最有效）最有效）一、文献综述一、文献综述哮喘治疗药物哮喘治疗药物一、文献综述一、文献综述立体依据立体依据二、有关物质研究二、有关物质研究二、有关物质研究二、有关物质研究- -方法来源方法来源方法来源方法来源方法比较方法比较结果结果BP 标准(原料)3个方法一致，杂质谱广在BP 标准的基础上，结合进口注册标准的优点进行优化，控制4个降解杂质 USP 标

3、准(原料)EP 标准(原料)进口注册标准(颗粒剂)针对颗粒剂色谱条件色谱条件进口注册标准（颗粒剂）进口注册标准（颗粒剂）BP标准（原料）标准（原料）色谱柱苯基己基键合硅胶柱苯基硅烷基色谱柱(4.6 mm 50 mm,1.8 m)流动相流动相A为0.20% (v/v) 三氟乙酸水溶液，流动相B为甲醇：乙腈（3:2）混合溶液，梯度洗脱。流动相A为0.15% (v/v) 三氟乙酸水溶液，流动相B为0.15% (v/v) 三氟乙酸乙腈溶液，梯度洗脱。检测波长/nm255238柱温5030流速mL/min1.51.2进样量/L2010供试液浓度/mg/mL0.241.0二、有关物质研究二、有关物质研究-

4、 -方法优化方法优化优化项目优化项目优化过程优化过程结果结果色谱柱苯基柱苯基己基柱苯基柱 检测波长/nm255238238进样浓度mg/mL1.2、1.0 、0.80 、0.48 和0.240.80 溶媒甲醇：水（3：1）甲醇：水（9：1）甲醇：水（3：1）梯度洗脱程序流动相为 乙腈-水-三氟乙酸系统进行以下优化如下表梯梯度度状况状况结结果果1杂质B与HPC-LF分离度不符合要求X2杂质B与HPC-LF分离度不符合要求X3杂质G与孟鲁司特钠及相邻杂质分离度也不符合要求X4杂质G与孟鲁司特钠及相邻杂质分离度也不符合要求X5杂质G与孟鲁司特钠及相邻杂质分离度也不符合要求X测定其他杂质梯度测定其他杂

5、质梯度测定杂质测定杂质B梯度梯度时间/min流动相A/%流动相B/%时间/min流动相A/%流动相B/%0653506040365353604016544616495160544635495160.01208035.01208070208045208070.01653545.016040806535556040 色谱条件：Agilent ZORX SB-pheny (4.6 mm150 mm,5m)色谱柱，流动相为乙腈-水-三氟乙酸系统，检测波长238 nm；柱温30；进样量20L。其他杂质检测系统流速1.2 mL/min；杂质B检测系统流速1.0 mL/min。二、有关物质研究二、有关物质研

6、究- -方法确认方法确认 测定法 避光操作，取本品，加溶媒稀释，超声并振摇30 min，放冷稀释至刻度，离心取上清液既得供试液溶液。杂质对照品加溶媒溶解配制成相应限度的溶液。按外标法以峰面积计算4种杂质的含量；其他杂质按自身对照法计算含量。限度应符合预先设计的要求。 依下方法配制系统适用性溶液，进行系统适用性试验，结果应满足下述要求。依下方法配制系统适用性溶液，进行系统适用性试验，结果应满足下述要求。 称取孟鲁司特钠原料适量，加入过氧化氢4 L（氧化降解），紫外光灯下15 min（光照降解），再加入杂质F储备液和杂质B储备液，最后配制成约含孟鲁司特钠0.8mg/ml的溶液。 杂质C、杂质G、杂

7、质F和杂质B的相对于主峰的相对保留时间约为0.5、0.9、1.1和1.8，杂质G与孟鲁司特峰的分离度不低于2.5，孟鲁司特峰和杂质F峰之间的分离度不低于1.5，主峰的理论板数不低于5000。二、有关物质研究二、有关物质研究- -方法确认方法确认- -系统适用性试验系统适用性试验检测其他杂质系统检测其他杂质系统空白溶媒空白辅料系统溶液供试品溶液空白溶媒和空白辅料对测定杂质C、杂质G、杂质F无干扰，结果符合系统适用性试验要求。二、有关物质研究二、有关物质研究- -方法确认方法确认- -系统适用性试验系统适用性试验检测杂质检测杂质B系统系统空白溶媒空白辅料系统溶液供试品溶液空白溶媒对测定杂质B无干扰

8、，空白辅料峰与杂质B良好分离，结果符合系统适用性试验要求。二、有关物质研究二、有关物质研究- -方法确认方法确认- -系统适用性试验系统适用性试验专属性专属性破坏项目杂质C/%杂质G/%杂质F/%未知杂质1/%未知杂质2/%杂质B/%总杂/%未破坏原料0.052 -0.012 0.061 制剂0.33 0.053 -0.031 0.40 酸破坏原料0.079 -0.61 0.24 0.087 1.0 制剂0.27 0.042 -1.07 0.53 0.11 2.0 碱破坏原料0.088 0.039 -3.15 3.97 0.048 7.3 制剂0.25 0.032 -0.02 0.07 0.0

9、71 0.45 氧化破坏原料7.2 -0.014 7.2 制剂3.1 -0.021 3.1 高温破坏原料0.059 0.071 -0.13 制剂0.59 -0.034 0.059 0.054 0.74 光照破坏原料0.33 5.5 -0.032 -0.014 5.9 制剂0.49 4.4 -0.039 -0.030 5.0 -代表未检测到在下列各破坏条件下，各杂质峰均能得到很好地分离。二、有关物质研究二、有关物质研究- -方法学验证方法学验证线性和范围试验线性和范围试验杂质C在定量限限度120%（0.13-10 g/mL）范围内，r=0.9991；杂质F在定量限限度200%（0.16-1.7

10、g/mL）范围内，r=0.9995；杂质G在定量限限度200%（0.028-1.6 g/mL）范围内，r=0.9993。杂质B在定量限限度150%（0.091-4.0 g/mL）范围内，r=0.9995。各杂质限度均在所测定线性范围内且线性系数均大于0.999，线性良好。二、有关物质研究二、有关物质研究- -方法学验证方法学验证检测限检测限杂质杂质B为为0.62 ng，杂质杂质C为为0.84 ng，杂质，杂质F 为为0.22 ng，杂质，杂质G为为0.19 ng杂质B杂质C杂质F杂质G二、有关物质研究二、有关物质研究- -方法学验证方法学验证杂质G定量限定量限杂质杂质B 为为 1.9 ng，杂

11、质杂质C为为 2.5 ng，杂质，杂质F 为为 0.65 ng，杂质，杂质G为为 0.60 ng。杂质B杂质C杂质F杂质G二、有关物质研究二、有关物质研究- -方法学验证方法学验证精密度精密度重复性试验重复性试验(n=6)检查项目含量平均值/%RSD/%结果杂质C0.324.0杂质F0.142.3杂质G 0.104.6杂质B0.152.1中间精密度试验中间精密度试验(n=12)检查项目含量平均值/%RSD/%结果杂质C0.3510.0杂质F0.145.2杂质G 0.105.7杂质B0.144.4重复性各杂质RSD均小于4.0%，中间精密度各杂质RSD均小于10.%，结果符合要求。二、有关物质研

12、究二、有关物质研究- -方法学验证方法学验证回收率回收率杂质杂质C回收率回收率样品原含量/g加入量/g测得量/g回收率/ %平均值/%RSD/ %18.2039.34 55.54 94.9 98.32.918.2039.3454.84 93.1 18.2039.3456.41 97.1 18.2078.6896.46 99.5 18.2078.68 95.69 98.5 18.2078.6895.86 98.7 18.20118.0 136.8 101 18.20118.0136.3100 18.20118.0138.9 102 杂质杂质F回收率回收率样品原含量/g加入量/g测得量/g回收率/

13、 %平均值/%RSD/ %0.003.91 3.62 92.7 98.34.00.003.914.42 95.8 0.003.913.66 93.7 0.007.82 7.80 99.7 0.007.82 7.58 96.9 0.007.82 7.65 97.9 0.0011.7 12.1 103 0.0011.7 11.9 102 0.0011.7 12.1 103 杂质杂质G回收率回收率样品原含量/g加入量/g测得量/g回收率/ %平均值/%RSD/ %3.95 4.96 8.4095.0 99.74.03.954.969.07109 3.954.968.5798.4 3.959.92 1

14、3.7101 3.95 9.92 13.599.0 3.959.92 13.7101 3.9514.9 17.895.1 99.1 杂质杂质B回收率回收率样品原含量/g加入量/g测得量/g回收率/ %平均值/%RSD/ %3.07 12.3614.9796.3 100.74.03.07 12.3616.60110 3.0712.3615.0596.9 3.0724.72 28.47103 3.0724.7228.04101 3.07 24.72 28.20102 3.0737.08 39.4298.1 98.1 各杂质回收率平均值均在98%-102%范围内，RSD均小于4.0%，符合要求。二、

15、有关物质研究二、有关物质研究- -方法学验证方法学验证溶液稳定性溶液稳定性各杂质RSD均小于3.0%，在18h内溶液稳定。溶液稳定性试验溶液稳定性试验(n=6) 18h检查项目RSD/%结果杂质C2.7杂质F1.7杂质G1.1杂质B1.5二、有关物质研究二、有关物质研究- -方法学验证方法学验证二、有关物质研究二、有关物质研究- -方法学验证方法学验证耐用性耐用性考察项目和结果如下表，主峰理论塔板数均不小于5000，拖尾因子，各色谱峰的分离度，均符合要求，耐用性良好。 研究项目主峰保留时间主峰对称因子主峰理论板数柱温25 26.4340.231326930 (原条件)26.0120.23133

16、3435 25.4730.2413045流速1.0 ml/min28.5270.2130991.2 ml/min(原条件)26.0120.23133341.4 ml/min23.9530.2211873波长233nm26.0120.2313168238nm（原条件）26.0120.2313334243nm26.0120.2313334三氟乙酸浓度0.12%26.0340.16152540.15%(原条件)26.0120.23133340.18%25.1040.1714354安捷伦（原条件）26.0120.2313334结论结论 如表所示，方法学验证结果均符合要求，本法可以用于测定孟鲁司特钠颗粒

17、中有关物质。二、有关物质研究二、有关物质研究- -方法学验证方法学验证验证项目验证项目结果结果专属性线性和范围检测限定量限精密度溶液稳定性准确度耐用性 取1批参比制剂和3批中试样品进行检测，结果符合要求且自制样品和对照样品无明显差异。批号批号杂质杂质C/%杂质杂质F/% 杂质杂质G/%杂质杂质B/%未知杂质未知杂质/%总杂总杂/%15070010.23-0.0380.026-0.3015070020.24-0.0360.027-0.3015070030.22-0.0360.025-0.2800004181480.31-0.0180.085-0.41二、有关物质研究二、有关物质研究- -样品检测

18、样品检测三、溶出度方法研究三、溶出度方法研究三、溶出度方法研究三、溶出度方法研究- -方法建立方法建立方法来源方法来源优化项目优化项目结果结果进口注册标准检测波长的选择最大吸收波长389nm原料在四种溶出介质中的溶解状态pH4.5、pH6.8和溶解无差异，pH1.2中降解为杂质B，合并计算滤膜吸附试验有吸附，取样10mL,过滤弃去5mL即可 经过上表方法优化，最后确定的溶出度检测方法为： 苯基柱，流动相为乙腈-水-三氟乙酸系统（50:50:0.2），流速为1.0 mL/min，柱温为50 ，检测波长为389 nm，理论板数按孟鲁司特峰计算应不低于2000。 测定法，避光操作，以900 mL 0

19、.5%十二烷基硫酸钠溶液为溶出介质，转速为50 r/min，经15 min 取样10 mL滤过，弃去初滤液5 mL，续滤液作为供试品溶液。取对照品溶液溶解配制为浓度约为 4g/mL的溶液。按外标法以峰面积计算，计算出每袋的溶出量。限度应为标示量的80%，应符合规定。三、溶出度方法研究三、溶出度方法研究- -方法学验证方法学验证验证项目验证项目结果结果专属性空白溶媒和空白辅料对测定无干扰线性和范围溶出度限量在测定的线性范围内，（0.096g/mL6.7g/mL）,线性系数大于0.9999，线性良好。回收率平均回收率为100%， RSD为1.4%小于2.0%溶液稳定性36 h内RSD为小于2.0%

20、，稳定性良好耐用性在设定的色谱条件条件下，主峰理论板数均符合要求。结论结论 如表所示，方法学验证结果均符合要求，本法可以用于检测孟鲁司特钠颗粒的溶出度。参比制剂与自制样品体外溶出曲线参比制剂与自制样品体外溶出曲线参比制剂平均溶出度时间/min5101520304560水介质平均值/%99.5101102102102-pH6.8（n=（n=12）平均值/%101103103103104-pH4.5（n=（n=12）平均值/%67.772.2 74.7 77.5 82.0 86.3 90.1pH1.2（n=（n=12）平均值/%62.574.0 81.7 86.7 93.2 98.7101自制样品

21、平均溶出度时间/min5101520304560水介质平均值/% 92.8 92.9 93.1 93.1 92.9-pH6.8（n=（n=12）平均值/%91.6 92.3 92.7 92.5 92.9-pH4.5（n=（n=12）平均值/%58.8 66.3 71.3 75.0 79.5 83.8 89.8pH1.2（n=（n=12）平均值/%53.4 75.3 82.1 87.2 91.3 93.8 97.1三、溶出度方法研究三、溶出度方法研究- -溶出曲线溶出曲线参比制剂与自制样品体外溶出曲线比较参比制剂与自制样品体外溶出曲线比较用f2法比较参比制剂与自制样品在pH4.5和pH1.2溶出

22、介质中的溶出度，比较结果f2均不小于50，可判断为相似。取样点溶出介质f210min、20min、30min、45min、60minpH=4.57110min、15min、30minpH=1.291 在水介质和pH6.8介质中参比制剂和自制样品的溶出度在15min内均达到85%以上，故不进行相似性比较。而在pH1.2和pH4.5介质中，溶出度在15min内均未达到85%以上（50 r/min时）故比较相似性。三、溶出度方法研究三、溶出度方法研究- -溶出曲线溶出曲线批号批号溶出度溶出度/%123456平均值150700193.688.691.792.895.797.993.4150700292

23、.689.193.197.895.891.293.3150700393.095.392.994.093.794.093.8000041814899.599.198.894.399.410198.7三、溶出度方法研究三、溶出度方法研究- -样品检测样品检测 取1批参比制剂和3批中试样品进行检测，结果符合要求且自制样品和对照样品无明显差异。四、含量测定方法研究四、含量测定方法研究四、含量测定方法研究四、含量测定方法研究- -方法建立方法建立方法来源方法来源优化项目优化项目结果结果进口注册标准中含量测定方法和含量均匀度方法进样浓度的考察24g/mL溶媒的选择甲醇：水（3;1）滤膜吸附试验有吸附，取样10mL,过滤弃去5mL即可样品提取方法的比较振摇5min 经过上表方法优化，最后确定的溶出度检测方法为： 色谱条件同溶出度。 测定法，避光操作，取本品15袋的量加溶媒适量，振摇5 min，再加溶媒稀释至刻度，摇匀，再稀释10倍，取10mL弃去初滤液5 mL，续滤液即为供试品溶液。对照品溶液为加溶媒溶解配制24 g/mL的溶液。按外标法以峰面积计算含量。四、含量测定方法研究四、含量测定方法研究- -方法学验证方法学验证验证项目验证项目结果结果专属性空白溶媒和空白辅料对测定无干扰线