新生儿溶血病检测操作SOP

1、新生儿溶血病检测操作SOP一、产前诊断1夫妇血型检测（微柱凝胶检测法：ABO、Rh（D）血型定型检测卡）1.1将红细胞稀释至1%红细胞生理盐水悬液；1. 2撕开微胶卡的封膜，于正立管蓝A、黄B、灰D.Control微柱管反应腔中加入氓待检RBC 生理盐水悬液务50ul：于反定管白色A、B、0、自身管分别对应加入1.0% Al. B、0型试 剂红细胞和待检红细胞生理盐水悬液50 ul,再分别加入待检血浆（血清）50 ul：1. 3将检测卡室温反应M10 min,取出，置离心机lOOOr/min 2min» 1800r/min 3 min离心;1.4取岀，判泄结果（凝集强度判断详见结果判

2、立示图）。按下表检验结果判定ABO、RhD血型：检验结果ABO. RhD血型判定二 A黄B灰DControl（待检RBC）A1B0Control（血浆与自身RBC+一+或一一+一一A 型 RhD （+或一十+或-一-一-B 型 RhD （+或一-+或-一+-一0 型 RhD （+或+或-一-AB 型 RhD （+或-）2. 孕妇抗体效价的测定（微柱凝胶检测法：抗人球蛋白检测卡）21孕妇IgG （抗A/抗B）效价2. 1.1取待检血淸和2-Me（二兢基乙醇）应用液各0.2ml,充分混匀，37°C水浴2小时（以充 分破坏血淸中的IgM类抗体）。2. 1. 2取4支干净试管排于试管架上：将

3、第一管加入50微升中和血淸和1. 6亳升低离子介 质（原液为1:1稀释，此时稀释倍数为原液的64倍）。第24管中分别加入400微升低离子介质；从第一管中吸出400微升的液体加入第 二管，混匀，在从第二管吸岀400微升加入第三管混匀，依次倍比稀释。取抗人球蛋白检测卡，撕去铝箔，在4管中个依次加入倍比稀释好的火活血淸50微 升和1%的标准红细胞（或父亲红细胞）低离子介质（LIM）悬液50微升。2. 1. 5将加好样的检测卡入生科孵育器中孵冇15分钟。2. 1. 6将孵育好的检测卡放入生科离心机中离心5分钟（1000r/min 2 min, 1800r/min 3 min）, （离心必须在加样后30

4、分钟内进行）2. 1.7取岀，判左结果（凝集强度判断详见结果判定示图）临床参考值：孕妇IgG （抗A/抗B）效价W64。2.2孕妇1或（抗。）效价测定2. 2.1确泄孕妇为RhD阴性，丈夫为RhD阳性。2. 2.2取待检血淸和2-Me（二兢基乙醇）应用液各0.2ml,充分混匀，37°C水浴2小时（孕妇 血淸与0型RhD阳性红细胞反应盐水法为阳性需要火活，阴性不需要火活）。2. 2. 3取4支干净试管排于试管架上：将第一管加入50微升中和血淸和400毫升低离子介 质（火活血淸为1:1稀释，此时稀释倍数为原液的16倍；如不火活为8倍）。2. 2. 4第2-4管中分别加入400微升低离子介

5、质；从第一管中吸岀400微升的液体加入第 二管，混匀，在从第二管吸岀400微升加入第三管混匀，依次倍比稀释。2. 2. 5取抗人球蛋白检测卡，撕去铝箔，在4管中个依次加入倍比稀释好的血淸50微升和1% 的标准红细胞（或父亲红细胞）低离子介质（LIM）悬液50微升。2. 2. 6将加好样的检测卡入生科孵育器中孵冇15分钟。2. 2. 7将孵育好的检测卡放入生科离心机中离心5分钟（1000r/min 2 min» 1800r/min 3 min）,（离心必须在加样后30分钟内进行）2. 2.8取岀，判左结果（凝集强度判断详见结果判泄示图）临床参考值：孕妇IgG（抗D）效价W16,其血型不

6、合的胎儿溶血病一般较；IgG（抗D）效价W 64时，其血型不合胎儿死胎率增高。3. 孕妇不规则抗体筛査（微柱凝胶检测法：抗人球蛋白检测卡）3.1取抗人球蛋白检测卡，撕去铝箔，在3管中个依次加入孕妇血淸（血浆）50微升和1% 的筛选细胞低离子介质（LIM）悬液50微升。3. 2将加好样的检测卡入生科孵冇器中孵育15分钟。3. 3将孵育好的检测卡放入生科离心机中离心5分钟（1000r/min 2 min, 1800r/min 3 min）,（离心必须在加样后30分钟内进行）3.4取出.判上结果（凝集强度判断详见结果判立示图）二、新生儿溶血病血型血清学诊断（三项）1. 患儿红细胞直接抗人球蛋白试验（

7、微柱凝胶检测法：抗人球蛋白检测卡）1.1取患儿血液，离心，洗涤，取压积红细胞用生理盐水配制成1%的红细胞悬液。1.2在抗人球蛋白检测卡上标注患儿的姓名或者编号，撕开卡上的铝箔。1. 3将50微升1 %红细胞悬液加入到相应的孔中。1. 4 离心 5 分钟（1000r/min 2 min, 1800r/min 3 min）。15取出.判泄结果（凝集强度判断详见结果判立示图）。2. 患儿红细胞的放散试验（微柱凝胶检测法：抗人球蛋白检测卡）采集患儿的血液标本，按照所检抗体的不同，使用不同的方法的到放散液（具体操作见附件）。2. 1取出试剂卡，检测前确保试剂卡及样品完全平衡至室温并标记，撕开试剂卡上的铝

8、箔带, 仅無露试验所需使用的反应腔2.2将50 ML 1% A、B、0红细胞LIH悬液加入相应的反应腔中。2. 3向相应的反应腔中加入100 PL的放散液。2.4观察反应腔内的反应物是否混匀，如需要，轻禅微柱。2.5将加好样的检测卡入生科孵育器中孵育15分钟。2. 6将孵冇好的检测卡放入生科离心机中离心5分钟（lOOOr/'min 2 min, 1800r/min 3 min）。2. 7取岀，判泄结果（凝集强度判断详见结果判定示图）热放散法：取1ML体积的压积血用盐水至少洗涤三次，最后一次尽量取净，然后和等量或半 量的生理盐水混匀，置于56°C孵育10分钟，期间摇动数次，迅速

9、取出3500r/min离心2-3 分钟，立即取上淸。即热放散液。酸放散：详细见酸放散试剂盒说明书。结果判读AcBeOc指示细胞+游离的抗A抗体+游离的抗B抗体+游离的抗A抗B抗体00+游离的ABO以外抗体无游离抗体3. 游离抗体试验（微柱凝胶检测法：抗人球蛋白检测卡）。游离试验是新生儿出生后7天内，辅助诊断新生儿溶血病的试验。单纯游离试验阳性, 不能诊断IgG抗体已经致敏新生儿红细胞。3. 1取出试剂卡，使用前确保试剂卡完全平衡到室温。3.2分别向反应柱内加入50ul 1%A、B、0红细胞LIM悬液。3.3最后向反应柱内加入100 ul婴儿血淸或血浆。注，加样时，枪头请勿触碰微柱管壁。3.4观察柱中的反应物各组分是否混匀，必要时轻弹几下微柱充分，使反应物混匀。3. 5将加好样的检测卡入生科孵育器中孵育15分钟。3. 6将孵ff好的检测卡放入生科离心机中离心5分钟(lOOOr/'min 2 min, 1800r/min 3 min)。2. 7取出，判泄结果(凝集强度判断详见结果判立示图)。结果判读AcBeOc指示细胞游离的抗A抗体+游离的抗B抗体+游离的抗A抗B抗体00+游离的ABO以外抗体无游离抗体4. 新生儿