皮肤NKT细胞淋巴瘤的临床病理及其与EB病毒关系的研究

1、    皮肤NK/T细胞淋巴瘤的临床病理及其 与EB病毒关系的研究        【摘要】目的探讨皮肤NK/T细胞淋巴瘤的临床病理特点、免疫表型及与EB病毒感染的关系。方法应用免疫组织化学染色，选用CD45RO、CD3、TIA1、CD20、KiB5、CD68和LMP1等抗体；用EBER1/2原位杂交检测EB病毒编码的小分子RNA。结果5例皮肤NK/T细胞淋巴瘤患者占同期皮肤恶性淋巴瘤的5.68；男4例，女1例，平均年龄34岁，主要表现为皮肤无症状肿块，2例有溃疡形成

2、；组织学特征为肿瘤在真皮和皮下脂肪内，易形成血管浸润性和破坏性病变，瘤细胞大小、形态各异；瘤细胞表达T细胞标记（5/5）和NK细胞或细胞毒性T细胞标记TIA1（4/4），EBER1/2（3/4）。结论皮肤NK/T细胞淋巴瘤具有临床病理独特性，与EB病毒感染有较强的相关性。【关键词】皮肤肿瘤淋巴瘤，NK/T细胞疱疹病毒4型，人Investigation of the Clinicopathologic Features of Cutaneous NK/T Cell Lymphoma and EpsteinBarr Virus InfectionWANG Lin(Department of Der

3、matology, First University Hospital, West China University of Medical Sciences, Chengdu 610041)LIU Weiping, LI Gandi， et al.【 Abstract】 Objective To study the clinicopathologic features and immunophenotype of cutaneous NK/T cell lymphoma and the association with Esptein Barr virus (EBV) infection. M

4、ethods Five cases of cutaneous NK/T cell lymphoma were studied. Histologic sections of embedded tissues were immunohistochemically stained with CD45RO, CD3 , TIA 1, CD20, Ki B5, CD68 and LMP1 antibodies, and in situ hybridization for EBV encoded small nuclear RNAs EBER1/2 was also carried out. Resul

5、ts Cutaneous NK/T cell lymphoma accounted for 5.68 in the cutaneous malignant lymphoma in the same period of observation. There were 4 male and 1 female patients, and the mean age was 34 years. The main clinical manifestations were asymptomatic nodules and masses, which were accompanied by ulcers in

6、 2 cases. Histologically, the tumors were mainly located in the dermis and subcutaneous adipose tissue, the infiltrated lymphoid cells were pleomorphic, and angiocentricity and angiodestruction were found in almost all cases. Immunohistochemical stain showed that five cases were T cell phenotype and

7、 the expression rate of TIA 1 was 100 (4/4). The EBV was present in three of four cases by in situ hybridization. Conclusions Cutaneous NK/T cell lymphoma presents with unique and diagnostic clinicopathologic features, and is strongly associated with EBV.【 Key words】 Skin neoplasms Lymphoma， NK/T ce

8、ll Herpesvirus 4, humanNK/T细胞淋巴瘤属于外周T细胞和自然杀伤（NK）细胞肿瘤的一种 几乎均发生于淋巴结外，其特征是瘤内有血管中心性和血管破坏性病变，瘤细胞表达NK细胞和T细胞标记，与EB病毒感染的相关性明显。该肿瘤又称血管中心性淋巴瘤（angiocentriclymphoma，ACL）1。Chan等2认为NK/T细胞淋巴瘤的名称较ACL更准确，因为血管中心性生长并非恒定，且也可出现在其它类型淋巴瘤中。为了探讨皮肤NK/T细胞淋巴瘤是否具有临床病理独特性，以及它与EB病毒有无关系，我们回顾了我院19811998年的5例皮肤NK/T细胞淋巴瘤，现报道如下。材料

9、和方法检索我院病理科和皮肤科19811998年病理档案资料，复习病史、HE切片，发现了5例皮肤NK/T细胞淋巴瘤，并进行信访。(一)免疫组化：在石蜡包埋组织4m切片上，检测肿瘤的CD45RO、CD3、CD20（L26）、KiB5、CD68、LMP1和TIA1（表1）。其中，CD45RO、CD20、KiB5、CD68用LSAB法，CD3、LMP1和TIA1用ABC法。作TIA1染色前用高压煮沸法进行了抗原修复处理。(二)原位杂交：选用FITC标记的针对EB病毒编码的小分子寡核苷酸探针EBER1/2（Dako公司，Y017），在石蜡切片上做原位杂交，再桥连碱性磷酸酶（AP）标记的抗FITC抗体（1

10、100，Dako公司），最后以NBT/BCIP为底物进行显色，光镜观察。以EBER1/2阳性的脾NK/T淋巴瘤的石蜡切片为阳性对照。EBER1/2原位杂交阳性信号为核呈紫蓝色细颗粒状。参照deBruin等3的方法进行观察。单细胞型为每中倍视野1个阳性细胞者；散在型为<25个者；簇集型为25100个者；弥漫型为>100个者。结果19811998年我院有皮肤淋巴瘤88例，其中皮肤NK/T细胞淋巴瘤5例，占5.68。(一)临床特点：5例中，男4例，女1例，年龄1462岁，平均年龄34岁。主要表现为躯干、四肢皮肤的单发性（2例）或多发性（3例）结节、肿块，最大皮损直径为10cm，2例有溃疡

11、形成。2例伴发热（体温不详）。1例全血细胞减少，骨髓中有异形细胞和大量吞噬细胞，1例血象正常，余3例情况不详。2例获随访结果者已分别存活12个月、36个月。(二)组织形态学改变及免疫表型：1例有亲表皮现象；4例真皮内有肿瘤者呈弥漫性（2例）、小片状（1例）或小血管周围浸润（1例）；4例切片内有脂肪组织者肿瘤替代脂肪组织呈弥漫性浸润（3例）或小叶性脂膜炎样浸润（1例）。肿瘤均有小片（1例）或大片（3例）凝固性坏死，1例坏死组织内有胆固醇结晶样裂隙（1）。5例均见瘤细胞在血管周围及管壁上浸润，管壁增厚如洋葱皮样，横切面似肾小球（2），管腔狭窄或闭塞，部分管壁有纤维素样坏死（3）；4例主要累及中血管

12、，1例累及小血管。瘤细胞大小不等，3例以中细胞、2例以大细胞为主；胞浆中等量，呈淡粉红色（1例）或空亮（4例）（4）；核形态不规则、扭曲，染色较深，有14个小核仁，核分裂象02/HP。1例肿瘤内有吞噬核碎屑的组织细胞。肿瘤内有散在的小淋巴细胞和嗜酸粒细胞，2例有残存的小汗腺。5例瘤细胞均显示CD45RO、CD3阳性（5、6），CD20、KiB5、CD68阴性；除1例因组织太小未做TIA1外，另4例瘤细胞均表达TIA1浆阳性（7）。(三)EBER1/2原位杂交和LMP1的表达：1例因组织太小未做EBER1/2，其余4例中3例有阳性杂交信号（8），弥漫型2例，散在型1例。5例LMP1均为阴性。表1

13、本研空所用抗体名称,来源,工作稀释度及特异性抗体CD编号来源工作稀释度特异性单克隆抗体UCHL1CD45RODako公司1：100T淋巴细胞L26CD20Dako公司1：100B淋巴细胞KB-5德国Kiel大学1：5000B淋巴细胞KP-1CD68Dako公司1：100组织细胞TIA-1Couler1：1000细胞毒组织细胞颗粒相关蛋白抗原LMP1Dako公司1：50EB病毒2型多克隆抗体抗CD3CD3Dako公司1：100T淋巴细胞     讨论 皮肤NK/T细胞淋巴瘤在亚洲并不少见，日本Iwatsuki等4报道该病占皮肤淋巴瘤及其相关疾病的6.15，

14、台北Su等5报道占皮肤T细胞淋巴瘤的20，本组病例占同期皮肤淋巴瘤的5.68。临床特点：NK/T细胞淋巴瘤约1/3始发于皮肤或皮肤可能为唯一受累器官6。Chan等2报道34例非鼻的NK/T细胞淋巴瘤中14例发生于皮肤，且易累及皮肤多部位。皮肤NK/T细胞淋巴瘤好发于中青年人，临床常表现为无症状、紫红色或肤色的结节和肿块，易形成溃疡，但皮损也可呈斑疹、丘疹6、环形斑块7、浸润性红斑、红斑或肿块上水疱等8，可伴发热、消瘦等症状。该肿瘤的预后文献报道不一。Chan等2报道的14例累及皮肤者10例获随访，其中9例于1个月至3年内死亡，而Beliaards等9报道的病例愈后较好，本组2例随访者已分别存活

15、1和3年。Su等5指出该肿瘤若病变局限，则为慢性过程，但扩散至其它器官常呈侵袭性病变，常伴快速的终末期噬血细胞综合征，本组有1例发病3个月即伴全血细胞减少和骨髓中大量吞噬细胞出现，提示伴噬血细胞综合征，但遗憾的是无随访结果。组织学特征及免疫表型：主要位于真皮和皮下脂肪组织内，瘤细胞易于聚集在血管周围或浸润血管壁，形成血管浸润性和破坏性病变，血管壁增厚，管腔狭窄或闭塞，常伴大片凝固性坏死；瘤细胞可为小、中、大细胞，以一种为主或为混合型，核不规则,染色质呈颗粒状2。本组病例符合此特征。Su等5推测由于瘤细胞表达特异的粘附分子或归巢受体（homingreceptor）,从而使其对血管内皮具有趋化性，

16、故使ACL的血管病变具有特征性。该肿瘤同时表达T细胞标记（CD3、CD2、CD45RO）和NK细胞（CD56、TIA1）标记2,8。TIA1是一种相对分子质量为15000的细胞毒颗粒相关蛋白，在NK细胞和细胞毒T淋巴瘤中表达10。本组5例均为T细胞表型，4/4表达TIA1，表明它们可能是NK/T细胞来源的肿瘤。鉴别诊断：皮肤血管炎：常表现为皮肤痛性结节和包块，临床经过良性；组织学上有血管炎和脂膜炎，但浸润的细胞无异形性，且在血管外浸润是诊断该病的一个要点5。皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤：二者均有异形瘤细胞和皮下脂肪血管病变，区别较难，但皮肤NK/T细胞淋巴瘤易早期累及多器官、系统11；瘤细胞更易聚

17、集成片，替代脂肪组织，而不是在脂肪边缘浸润，肿瘤常侵入真皮甚至表皮内，核碎屑常缺乏12。皮肤NK/T细胞淋巴瘤血管受累常是原发的且常远离瘤细胞密集浸润区，坏死是继发于血管损害的典型的凝固性坏死11。而皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤受累血管较小，常只侵犯皮下脂肪，呈叶性脂膜炎样改变，易于形成肉芽肿样损害，坏死常呈小片状，核碎屑易见12。    1肿瘤组织大片凝固性坏死，其内见胆固醇结晶样裂隙（HE×90）2血管壁增厚如洋葱皮样，横切面似肾小球，瘤细胞浸润血管壁，形成血管中心性损害（HE×175）3血管壁增厚，管腔狭窄，并有纤维素样坏死，篾壁上

18、有瘤细胞浸润（HE×175）4瘤细胞中等大，胞浆空亮；核形态不规则，扭曲，染色较深HE×1755瘤细胞显示CD45RO膜阳性（LSAB×350）6瘤细胞显示CD3浆阳性（ABC×350）7瘤细胞显示TIA1浆阳性（ABC×350）8部分瘤细胞显示EBER1/2核阳性（原位杂交×350）与EB病毒的关系：已证实鼻NK/T细胞淋巴瘤的EB病毒检出率几乎达100。Chan等2、Iwatsuki等4分别报道的14例、4例皮肤NK/T淋巴瘤EBER1/2均100阳性，Miyamoto等8、Su等5检测的EBER1/2阳性率分别为75（3/4）、

19、57.14（4/7），Su等5还发现侵入血管壁内的瘤细胞EBER1/2也阳性，本组病例EBER1/2阳性3例（3/4），表明皮肤NK/T细胞淋巴瘤与EB病毒也有明确的相关性。至于EB病毒是否为皮肤NK/T细胞淋巴瘤的病因，目前尚无足够的证据。卫生部科学研究基金资助项目(942176)王琳（华西医科大学附属第一医院皮肤性病科成都，610041）刘卫平（华西医科大学附属第一医院病理科）李甘地（华西医科大学附属第一医院病理科）李俸媛（华西医科大学附属第一医院病理科）李金范（华西医科大学附属第一医院病理科）周光平（华西医科大学附属第一医院皮肤性病科成都，610041）参 考 文 献 1， Jaffe

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21、ell marker CD56: a clinicopathologic study of 49 cases of an uncommon aggressive neoplasm. Blood, 1997, 89:4501 4513.3， de Bruin PC, Jiwa NM, Oudejans JJ, et al. Epstein Barr virus in primar gastrointestinal T cell lymphomas. Association with gluten sensitive enteropathy pathological features, and i

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