杭州市区公共场所空调冷却水中嗜肺军团菌的调查和分析

1、中国卫生检验杂志2006年3月第16卷第3期 C h i nese Jou rnal ofH ea l th Laboratory Technol ogy , M ar 2006; Vol 16 No 3281论著杭州市区公共场所空调冷却水中嗜肺军团菌的调查和分析斯国静, 俞 骅, 王一泓, 吴小辉, 杨介钻(杭州市疾病预防控制中心, 浙江杭州 310006摘要 目的:了解杭州市公共场所大型中央空调冷却水中嗜肺军团菌的污染情况及主要血清型。方法:于2005年9月10月, 采集杭州市13家商场和宾馆、2家医院和1家福利中心等中央空调冷却塔冷却水29件, 应用GV PC 、BCYE 、BCY 培养

2、基进行嗜肺军团菌分离培养、进行血清分型及种特异性PCR 鉴定。结果:冷却塔冷却水中嗜肺军团菌的污染率达到44 83%(13/29,共分离到嗜肺军团菌16株(有2份水样中同时检出二个血清型以上菌株, 其中一份有L p1、Lp2、Lp3三个血清型, 另一份有L p3及未定型二个血清型 , 血清型以LP 1为主达37 50%(6/16。结论:杭州市公共场所大型中央空调冷却水中嗜肺军团菌检出率较高, 对市民健康构成了威胁。关键词 公共场所; 嗜肺军团菌; 冷却塔水; 调查中图分类号 R 126 4 文献标识码 A 文章编号 1004-8685(2006 03-0281-02Investigation

3、and analysis of Leg ionella pneu m ophila in water of air conditioner in H ang zhou ! s public placesS i Guo jing , Yu H ua , W ang Y i hong , W u X i ao hui , Yang J ie zuan(H ang z hou P rov i nc i a l Center for D i sease Contro l and Prevention , H angzhou 310006, Ch i naAbstract O bjective :To

4、i nvestigate the proble m o f Legionella pneu m op hila i n conta m i nated w ate r of centra l a ir conditioners located in public p l aces o fH ang zhou , w ater of coo li ng to w ers i n th i rteen ma rketplaces , t wo hosp itals and one w a lfare home co l lected fro m Sep to O ct 2005 M ethods

5、:The sa m ples were cu lti vated by GVPC , BCYE and BC Y m ed i a and i dentif y i ng by PCR and serum typ i ng R esults :T he pos itive rate w as 44 83%(13/29and si x teen L egionella pneu m oph ila we re separa ted(t wo wa ter sa m p l es conta i n i ng different sero t ypes , one w ith Lp1, Lp2,

6、L p3, t he other w it h L p3and t wo un j udgeable type. Conclusion :Lp1is the pr i m a ry Legionell a pneu m ophil a type w it h 37 5%(6/16 D ue to such a h i gh positi v e rate , t he resu lts turned out t hat Legio nella p neumop hila has becom e a dange rous fac t o r to hea lth o f c itizen i n

7、 H ang zhou K ey words Pub li c places ; Leg i onella pneu m oph ila ; Cooli ng tow er w ater ; Investigati on 随着国民经济的迅猛发展和人们生活水平的日益提高, 目前杭州市包括商场、宾馆、饭店及医院等在内的大量公共场所均已广泛使用各种空调系统, 然而此为城市文明病#军团病的出现提供了条件。对1999年2000年杭州市部分人群的血清调查发现人群中已可能存在着军团菌感染1。大部分军团病是由嗜肺军团菌血清群1、4和6引起的。我们于2005年9月10月上旬采集杭州市部分商场、宾馆、医院和福利中

8、心等空调冷却水进行嗜肺军团菌检测, 以了解嗜肺军团菌的存在情况及其血清群。现将结果报告如下。1 材料与方法1 1 监测点监测点为杭州市区16家集中送气公共场所的中央空调冷却塔, 其中:商场和宾馆13家、医院2家、福利中心1家。1 2 采样时间及数量采样时间为2005年9月10月上旬, 每一监测点采集冷作者简介 斯国静(1956-, 女, 副主任技师, 主要从事卫生细菌检验及研究。却水500m , l 并立即送检。共计16家单位采集冷却水29件。1 3 材料GVPC 、BC Y E 、BC Y 成品平板培养基购自上海祥和公司, 嗜肺军团菌种特异性PCR 检测试剂盒由上海宝生科技发展有限公司生产,

9、 嗜肺军团菌诊断分型血清由日本生研生产(包括1-6群 。1 4 检验方法1 4 1 分离培养 方法参照卫生部%公共场所集中空调通风系统卫生规范&(2004 。取500m l 空调冷却水先用1000r /min 离心3m i n , 其上清液约400m l 用孔径0 45 m 滤膜抽滤集菌后将滤膜剪碎并用5m l 原水样洗脱, 然后取1m l 洗脱液入无菌试管加等量的1 2m o l/L酸缓冲液混匀静置15m i n , 再用0 1NKOH 调p H 至7 0, 吸0 2m l 接种到GVPC 琼脂平板, 于36和5%CO 2环境中培养414d , 每天观察平板上菌落生长情况, 发现可疑

10、菌落及时挑取转种BCYE 、BCY 及血琼脂平板进行生长鉴定试验, 对在BCYE 平板上生长在BCY 及血平板上不长的菌株进行塗片染色镜检, 同时做氧化酶及触酶试验。 2 (:刮E 菌落282中国卫生检验杂志2006年3月第16卷第3期 Ch i n ese Journ al ofH ealth Laborat ory Tec hno l ogy , M ar 2006; V ol 16 No 3到EP 管中(管中预先加400 l 蒸馏水, 12000r/mi n 离心5m i n 弃上清, 每管再加100 l 蒸馏水振荡混匀, 100煮沸15m in , 然后经10000r /min 离心2

11、m i n , 取上清液为DNA 模板。(2 引物由生产试剂公司提供。(3 PCR 扩增:循环条件设置:预变性945m i n , 然后按9430s 、5530s 、7260s 循环30次, 最后72延长至3m i n 。(4 琼脂糖凝胶电泳。(5 结果:450bp 长度条带为嗜肺军团菌。1 4 3 血清学鉴定 用嗜肺军团菌诊断血清L p1-Lp6作玻片凝集试验进行分型鉴定。2 结果在16家单位大型中央空调系统的29份冷却塔水中, 受嗜肺军团菌污染的有13份冷却塔水, 阳性率达44 83%(13/29(见表1 。在此13份冷却塔水中共检出16株嗜肺军团菌(同一水样中检出二个血清型以上混合污染的

12、水样有二份, 其中一份水样检出Lp1、L p2、L p3三个血清型, 另一份水样中检出L p3及一株未定型菌株二个血清型 (见表1, 其氧化酶均为阴性, 触酶试验均为阳性, 嗜肺军团菌种特异性PCR 阳性(部分军团菌PCR 鉴定图谱见图1 。从血清学分型情况看, 16株嗜肺军团菌的血清型分别为L p1型6株, 占检出数的37 5%(6/16,L p2型1株占检出数的6 25%(1/16,L p3型4株占25 00%(4/16, 未能分型(L p7-L p14型 占31 25%(5/16 。同一水样检出二个以上血清型的比例为总检出数的15 38%(2/13。表1 16家单位冷却塔水嗜肺军团菌的检

13、出情况嗜肺军团菌单位类型冷却塔数冷却塔水样数(份4194229检出份数263213检出率(%Lp1商场宾馆医院福利中心合计21121165031 587510044 83-2226Lp2-1-1Lp3-22-4Lp4-0Lp5-0Lp6-0 未分型23-5各血清群株数家医院采集的4件样品就有3件检测到嗜肺军团菌, 其阳性率更是高达75 00%(3/4。医院人群流动量大, 且病人的抵抗力都比较差, 属于易感人群, 一旦发生军团菌污染暴发其后果不可设想。要有效控制军团菌病的发生, 杜绝暴发, 作者认为应加强图1 部分嗜肺军团菌PCR 鉴定结果A N:待鉴定军团菌菌株; O :在BCY 和BCYER

14、 琼脂平板上都生长的菌株; R :阳性对照; Q:霍乱弧菌作为阴性对照; P :蒸馏水对照以下几方面的管理措施:(应加强对集中送气的中央空调系统监督管理, 定期冷却塔水进行检测, 掌握水体卫生状况, 定期按时对冷却塔进行清洗消毒, 更换水质, 除去适应军团菌生长的环境, 阻断其赖以生长繁殖的途经。对空调冷却系统的水路和气路在设计上也提出了更高及更为合理要求, 一则应尽可能避免这二路间的交叉污染, 另一则应考虙能有效进行消毒处理。+加强对军团菌有关知识的宣传, 提高人们对军团菌病有关知识的了解, 提高防范意识。参考文献1邓晶, 陈康凯, 黄诚孝, 等 杭州市人群嗜肺军团菌感染状况调查J 浙江预防

15、医学, 2003, 15(6:1-22冯文如, 马林, 刘汉湘, 等 广州地区水体环境军团菌污染分布调查J 公共卫生, 2005, 5(1:147-1483朱佩云, 陈悦, 沈健民, 等 上海部分地铁站空调冷却塔团菌污染状况调查J 环境与职业医学, 2002, 19(5:313-3144江思, 马林, 冯文如, 等 医院军团菌污染状况及其防制对策J疾病监测, 2005, 20(7:347-3495王中民, 杨国芬, 谭崇阳, 等 军团菌双重PCR 检测方法的建立及应用J 中国卫生检验杂志, 2005, 15(3:297-299(收稿日期:2006-01-043 讨论本次调查的16家单位采集的29份冷却塔水嗜肺军团菌污染的情况显示, 受嗜肺军团菌污染的水塔达到13份, 其阳性率高达44 83%。其高检出率与国内其他城市的调查情况2类似。从血清分型鉴定结果来看, 以L p1-L p3型为主要菌型占到总数的68 75%(11/16,同一水样检出二个以上菌型混合感染的样本占到15 38%(2/16, 不同型别的军团菌其致病性不同已得到了认同5。军团菌普遍存在于空调冷却水中, 其最