四环素类抗生素是分子中含有四个并联环

1、四环素类抗生素是分子中含有四个并联环 (其中一"个是苯环)并带有黄颜色的丁类广谱抗生素的总称，对各种革兰阳性细菌、除铜绿假单胞菌以外的革兰阴性细菌、螺旋体、文原体、立克次体和衣原体都有很好的抗菌活性。这类抗生素可与敏感菌的70S核糖体的30S亚基结合，从而抑制其蛋白质合成。任务一、发酵准备一、发酵罐的清洗1、发酵罐的结构 不锈钢搅拌罐主要有不锈钢壳体、夹套、搅拌装置、通风及空气分布管、挡板、接种孔、多个点击插孔、多个流加孔以及各个相关管道的连接口组成。2、发酵罐的清洗 从接种孔加入70L左右的清水，启动搅拌，转速为100r/min左右，用蒸汽加热清水至121左右，搅拌30min左右，

2、以此清洗发酵罐。清洗完毕，利用空气压力排出洗水，并用空气吹干发酵罐。 二、发酵设备检查检查项目： 管路连接 阀门 密闭性 仪表校正三、发酵设备灭菌1、消毒与灭菌在发酵工业中的应用 消毒：指用物理和化学方法杀死物料、容器、器具内外的病原微生物。一般只能杀死营养细胞而不能杀死细菌芽孢。 灭菌：用物理或化学方法杀死或除去环境中所有微生物，包括营养细胞、细菌芽孢。消灭杂菌和防止杂菌污染。2、灭菌方法： 干热灭菌、湿热灭菌、物理灭菌（射线、微波等）、化学灭菌（各种化学药品）；3、发酵罐灭菌（空消）灭菌压力：0.1470.18MPa，4560min。注意事项： 空消后，先用无菌空气保压，灭菌的培养基、相关

3、物料输入罐内后，打开冷却系统进行冷却。4、附属设备的灭菌分空气过滤器：发酵罐灭菌之前灭菌，灭菌后空气吹干备用。补料系统：补料管路：与补料罐同时灭菌，保温时间1小时。消沫剂系统：蒸汽压力0.15MPa，保温30分钟。消沫剂管路：与补料罐同时灭菌，保温时间1小时。移种管路：蒸汽压力0.300.45MPa，保温时间1小时任务二 种子制备一、培养基配制1、孢子培养基（g/L） 小麦麸皮 35 琼脂 20 MgSO4 0.1 KH2PO4 0.2 (NH4)2HPO4 0.3 蒸馏水 pH自然2、种子培养基（g/L） 黄豆饼粉 20 淀粉 40 酵母粉 5 蛋白胨 5 MgSO4 0.25 KH2PO4

4、 0.2 (NH4)2SO4 3 CaCO3 43、发酵培养基（g/L） 黄豆饼粉 40 淀粉 100 酵母粉 2.5 蛋白胨 15 MgSO4 0.25 CaCO3 4 (NH4)2SO4 3 a-淀粉酶（105U/mL） 0.1mL二、培养基灭菌1、分批灭菌 将配制好的培养基输入发酵罐内，直接用蒸汽加热，达到灭菌要求的温度和压力后维持一定的时间，再冷却至发酵要求的温度，称为分批发酵或实罐灭菌。培养基的预热 培养基先加热到8090，然后再导入蒸汽升温到120180。 目的：1）防止直接导入蒸汽时由于培养基与蒸汽的温度过大而产生大量的冷凝水使培养基稀释 2）防止直接导入蒸汽所造成的泡沫急剧上升

5、而引起的物料外溢。培养基灭菌 从各路通入蒸汽（进气口、排料口、取样口），温度升到120130，保温30min分批灭菌的注意事项 各路蒸汽进口要畅通，防止短路逆流；罐内液体翻动要剧烈，以使罐内物料达到均一的灭菌温度。 排气量不宜过大，以节约蒸汽。 灭菌将要结束时，应立即引入无菌空气以保持罐压，然后开夹套或蛇管冷却，以避免罐压迅速下降产生负压而吸入外界空气，或引起发酵罐破坏。 在引入无菌空气前，罐内压力必须低于过滤器压力，否则培养基将倒流入过滤器。三、孢子制备1、接种 无菌条件，接种斜面。2、培养 将接种后的试管放入恒温箱内，37培养5d。四、种子培养种子扩大培养流程图1、2-保藏种子 3-斜面

6、4-摇瓶 5-茄子瓶 6-固体培养 7、8-种子罐 9-发酵罐1、任务：获得大量的活力强的种子，以便在发酵罐的发酵培养过程中尽可能地缩短迟滞期。2、培养类型实验室种子培养的方法：液体培养法（三角瓶摇床振荡或转式培养）；固体培养法生产车间种子培养的方法 液体深层培养：目前几乎所有的好气发酵均采用此法任务三、发酵生产一、发酵参数控制1、温度的控制发酵温度的测量 感温元件装在金属套管内，插入发酵液中在线测量。发酵温度的控制 夹套 （10M3以下） 盘管（蛇管） （10M3以上）2、pH的控制（1）调整培养基的组分 在培养基配方中考虑到维持pH的需要。例如加入CaCO3，使用缓冲液等。（2）在发酵过程

7、中进行控制 添加CaCO3 氨水流加法 尿素流加法 （3）通过补料调pH（4）当补料与调pH发生矛盾时，加酸碱调pH3、泡沫的控制化学消泡 天然油脂；常用的有玉米油、米糠油、豆油、棉子油、鱼油及猪油等。 高碳醇、脂肪酸和酯类；聚二醇具有消沫效果持久的特点，尤其适用于霉菌发酵。 聚醚类；在生产上应用较多的是聚氧丙烯甘油和聚氧乙烯氧丙烯甘油(又称泡敌)。4、氧的控制 在通风发酵中，必须连续地通入无菌空气，以维持菌体的生长代谢和产物合成。因此发酵液中溶解氧的大小是发酵过程控制的一个重要参数。在发酵过程中连续测定发酵液中溶解氧的浓度的变化，可随时掌握发酵过程的供氧、需氧情况，为准确判断设备的通气效果提

8、供可靠数据，以便有效控制发酵过程，为实现发酵过程的自动化控制创造条件。控制发酵液中溶解氧的工艺手段 （1）改变通气速率(增大通风量)（2）改变搅拌速度（3）改变发酵液的理化性质 二、接种1、从实验室摇瓶或孢子悬浮液容器接种2、从种子罐接种三、补料控制补料的内容（1）补充微生物能源和碳源（2）补充菌体所需要的氮源（3）加入某些微生物生长或合成所需要的微量元素或无机盐补料的原则（1）根据菌体本身的遗传特性、生长代谢规律（2）根据生产需要四、取样取样目的 通过定时取样获得培养过程的状态参数，以观察发酵的进行。取样方法 打开取样管，弃去残留发酵液，收集新鲜发酵液。取样结束，取样管口通入蒸汽5min，灭

9、菌。任务四 发酵结束一、发酵液的处理1、菌体的分离方法（1）离心分离 管式高速离心机、碟片式离心机（2）过滤 真空过滤机、板框过滤机2、细胞破碎 常用破碎方法 机械法：珠磨法、高压匀浆法、超声波破碎法、X-press法等 非机械法：酶溶法、化学渗透法、冻融法、干燥法等机械破碎法 特点：处理量大、破碎效率高、速度快； 原理：对物料的挤压和剪切作用； 主要方法： 高压匀浆 珠磨 超声波破碎非机械法（1）酶溶法：（2）化学法 利用化学试剂溶解细胞壁或抽提细胞中某些组分的方法 酸碱来调节溶液的pH 有机溶剂：甲苯 表面活性剂：都是两性化合物，分子中有一个亲水基团和一个疏水基团，在适当的pH值和离子强度下，他们聚集在一起形成微胶束，使膜的通透性改变或