大肠杆菌药敏试验简易方法重点

1、大肠杆菌药敏试验简略方法最近几年来，跟着养鸡业的迅猛展开，鸡大肠杆菌病的发病率和死亡率也不停增加，现已成为危害养鸡业特别是肉鸡最为重要的疾病之一，为细菌病之首。所以，广阔养鸡户谈之色变，没有比感得病毒病又继发大肠杆菌病更糟糕的了。正因为这样，抗生素获得了大批宽泛的应用，又因为大肠杆菌抗衡生素简单产生耐药性，所以大肠杆菌的耐药性问题日趋突出。怎样解决这个问题将是畜牧兽医工作者此后工作的要点。而就当前来说，经过抗菌药物敏感性试验药敏试验选择敏感药物对鸡群进行预防和治疗是降低大肠杆菌病发病率和死亡率的有效手段。标准的药敏试验纸片扩散法比较繁琐，要先进行细菌培育，再进行药敏试验，试验设施要求高，基层兽

2、医诊断机构很难做到，现介绍一种简略药敏试验方法纸片扩散法1 1。1 1 试验方法和步骤试验设施恒温培育箱 1 1 台、乏味灭菌箱 1 1 台、酒精灯 1 1 个、接种棒带接种环1 1 个接种环可用回形针自制、手术剪 1 1 把、镶子 1 1 个、一般营养琼脂 1 1 瓶、玻璃平皿直径 90mm90mm数个、烧杯500ml500ml1 1 个、玻璃棒 1 1 个、一般电炉 1 1 台、定性滤纸 1 1 盒、蒸储水适当、生理盐水适当、小玻璃瓶如链霉素瓶数个洗净晾干、钢笔 1 1 支、细针头数个、高压蒸汽灭菌锅可选1 1 个、一般天平 1 1 台、药勺 1 1 个、尺子 1 1 个。一般营养琼脂平皿

3、制备平皿消毒将玻璃平皿洗净，晾干。用乏味灭菌箱 120c120c 灭菌 1 1 小时；也可用酒精灯火焰消毒，将玻璃平皿内壁凑近火焰，同时慢慢转动平皿使之平均受热，待平皿内壁上水珠烤十并发烫为止。琼脂消毒营养琼脂与蒸储水或生理盐水以 3g3g：100ml100ml 的比率参加烧杯先加蒸储水，后加营养琼脂，用电炉加热同时用玻璃棒搅拌，使营养琼脂熔解平均。若有高压蒸汽灭菌锅可将熔解的琼脂液装入生理盐水瓶中不超出其容量的 2/32/3，瓶口留一通气孔一般用 1616 号针头刺入瓶盖，将瓶站立放入锅内，加热至 121121c c保持 1515 分钟即可； 如无高压锅可直接用电炉加热至沸腾后立刻将烧杯从炉

4、上拿下来， 待泡沫消了，再放到炉上，这样煮约 2020 分钟煮时不停搅拌。琼脂导入与保留将消毒好的琼脂趁热经过玻璃棒引入平皿也可直接倒入平皿，每皿约需 202025ml25ml 琼脂液，琼脂厚度约 3 34mm4mm, ,倒完盖上平皿，凉透放入冰箱2 28 8C C备用，一般保留不超出 1 1 周。药敏片制备简略方法是将滤纸片用打孔器或剪刀剪成小圆形直径约 6mm6mm或小正方形，用乏味灭菌箱灭菌备用。将适当药物放入小玻璃瓶中，用少许无菌蒸 f f 留水注射用水溶解稀释液态药物不稀释，而后放入滤纸片并浸润，再将小瓶中剩余的药液沥净，瓶壁贴上写有药名及批号的标签，而后将小瓶放入恒温箱3737C

5、C烘干备用。接种病原因为大肠杆菌在一般培育基上生长优秀，且病死鸡内脏大肠杆菌含菌量很高，所以能够直接用接种环雁取病死鸡内脏组织肝、心包、气囊等，而后平均涂布于琼脂表面，但注意不要划破琼脂。而后在平皿底壁中心及周围用钢笔写上药物名称一般一个平皿做五种药物，再用细针头雁取药片贴到琼脂上与所写药名的地点对应，最后放入恒温箱 37c37c 培育 18182020 小时察看结果结果判断抑菌圈直径与药物敏感性关系见表1、表2。表 1 1 简略药敏试验结果抑菌圈直径mmmm敏感性3030极敏感20203030高敏感15151919中敏感152020极敏感15152020高敏感10101414中敏感1010低

6、敏感0 0不敏感2 2 与标准方法不一样点消毒方法平皿、烧杯等玻璃器皿可用酒精灯火焰消毒。琼脂浓度琼脂粉与蒸谓水或生理盐水的比率可合适小些3g：100ml。平皿制作制作琼脂平皿时，如没有高压蒸汽灭菌锅，可直接将琼脂液煮沸消毒约 2020 分钟，煮沸不可以使琼脂液完整无菌细菌芽胞仍可存活，但因所涂病变组织含菌量高，增殖快，即便平皿上有少许细菌芽抱生殖慢也不会影响结果。做好的平皿要检查灭菌成效，可任选一平皿放恒温箱培育 24h24h, ,如无可见菌落生长那么合格，否那么应所有抛弃。病原接种因病死鸡有“三炎”病变内脏大肠杆菌含菌量高，所以可以省略细菌培育一步，直接蘸取病死鸡内脏组织平均涂布于琼脂表面

7、。药敏片制作抗大肠杆菌药多为复方制剂，所以使用哪个厂家的药就应用此药做药敏片，药粉可不按要求稀释只需能熔解即可，但要保证所选药物质量过关，药中成分含量足，所标量即为治疗量。3 3 判断结果时抑菌圈直径偏大原因药物浓度因为本试验药敏片制作是直接将滤纸片浸入液态药物或药粉熔解后的溶液，药物未按标准稀释，浓度高，所以抑菌圈一般偏大。琼脂浓度琼脂制作时琼脂液浓度比生产商介绍的浓度：100ml低。目的是为了增添琼脂的湿度，防备琼脂表面过于乏味不利于病料平均的涂布，同时因为浓度降低提升了琼脂的透明度，有益于结果的察看。但因为琼脂浓度降低会加速药物扩散所以抑菌圈直径也会偏大。4 4 药物选择方法一般原那么优

8、先选择抑菌圈大的，口服汲取好的药物，其余作为备用药品。药物扩散性一般状况下水剂药物抑菌圈大于粉剂，扩散性好的药物如水剂药物的抑菌圈大于扩散性差的药物如粘杆菌素、安普霉素等，所以有些药物如以含粘杆菌素、安普霉素、利福霉素等为主的复方制剂在药敏试验中假如抑菌圈大于 25mm25mm 应判为极敏，202025mm25mm 判为高敏。其余状况药物使用时，有些药物的抑菌圈较大但圈内有细菌生长，说明有一局部细菌不可以克制，这时可选没有杂菌的；假如其余药物抑菌圈太小，可使用带有杂菌的药物并配合使用一种抑菌圈相对较大的药物。5 5 影响药敏试验结果的要素药敏试验结果主要指抑菌圈的大小，影响抑菌圈大小的主要要素

9、包含：培育基营养琼脂的质量、浓度、厚度、pHpH 值；药敏片的药物浓度、pHpH 值；细菌接种量等。培育基培育基应选择质量有保证的生产厂家，琼脂的浓度和厚度可参照本试验。药敏片药物浓度本试验中自制药敏片的药物浓度近似于原药浓度。因为基层设施条件等限制，对商品药按说明进行正确稀释不易做到，简单出现偏差，同时也很麻烦并易污染细菌。所以可采纳液态药物不稀释，粉状药物加少许蒸 f f 留水稀释的方法制作药敏片，经过近几年的临床试验说明本方法除了能惹起抑菌圈偏大以外，未见其余显然差别。药敏片药敏片pHpH 值因为自制药敏片中药物浓度高，酸、碱性可能较强，pHpH 值范围相对较广，多半药物的 pHpH 值

10、在 5 58 8 之间，可能克制某些细菌的生长，但由于大肠杆菌的生长生殖对环境要求不高，其生长 pHpH 值为 5 58 833, ,所以药敏片的 pHpH 值对本试验影响很小。细菌接种量本试验接种病原采纳直接限取涂布的方法，省略了细菌培育和菌液培育。因为条件限制，基层部门假如进行繁琐的培育过程，简单惹起污染造成结果不正确，同时，感染大肠杆菌的新鲜病死鸡或濒临死亡的鸡内脏大肠杆菌含量较高，假如每次限取内脏的次数相等且涂布平均，那么每次药敏试验的细菌接种量可以为近似相等。其余测定磺胺类药物时，应采纳无蛋白脓琼脂平皿，因为蛋白脓能使磺胺失掉作用4 4。6 6 小易敏是在准敏片散法的基上，一些步行化、整以后的方法，主要用于防治大杆菌病敏感物的。因其拥有和易操作性，且床成效优秀，故而合适技条件单薄的基医部使用和推行。充：此法限于大略。( (100g100g?200KG200KG 是一般成品的水格。上做的敏片中的物度 100g100g?20KG20KG十倍，其余水格也这样也就是 100g100g 放入到 2020000ml000ml 水即可。操作的候用天平或许精细子称称取 1g1g 品加到 200ml200ml