度他雄胺含量检测方法验证方案

1、1 目的确保度他雄胺含量检测方法准确可靠。2 范围度他雄胺成品含量检测方法方法学的验证。3 验证小组成员及职责成 员姓 名部 门职 务工作分工负责人刘晓红分管质量副总批准验证方案审核陈山岭QAQA科长负责对方案及报告进行型式审核组长邓福英QCQC科长组织协调和实施验证工作组员组员4 验证依据ICH Q2 QC-SMP0145 验证内容5.1 验证可接受标准项目指标方法专属性稀释剂空白实验不干扰供试品测试潜在杂质加入实验主峰与相邻杂质峰间分离度大于1.5系统适用性盐酸厄洛替尼主峰理论塔板数大于3000盐酸厄洛替尼主峰峰面积相对标准偏差2%回收率回收率在99.0%101.0%之间验证范围内的线性测

2、定相关系数大于0.999重复性2.0%中间精密度(相对标准偏差2.0%准确度回收率99.0%101.0%溶液稳定性RSD2.0%5.2.1 色谱条件仪器：高效液相色谱仪色谱柱：ZORBAX SB-CN，4.6×250mm，5m流动相：正己烷：异丙醇=95：5柱流速：1.5ml/min 检测波长：240nm进样量：20l 柱 温：40 5.2.2 实验用溶剂及供试品名称批号含量/级别来源正己烷异丙醇杂质A杂质C度他雄胺度他雄胺对照品5.2.3 溶液的配制5.2.3.1 流动相的配制正己烷：异丙醇=95：55.2.3.2 供试品溶液的配制供试品溶液的配制：取供试品约25mg，精密称定，置

3、50ml量瓶中，加5ml异丙醇超声使溶解，再加正己烷稀释至刻度，摇匀，即得。（平行配制两份）对照溶液配制：取对照品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加5ml异丙醇超声使溶解使溶解，再加正己烷稀释至刻度，摇匀，即得。（平行配制两份）5.2.4 测定方法测定法：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液20l，注入高效液相色谱仪，理论塔板数按度他雄胺峰计算应不低于3000，按外标法以峰面积计算供试品中度他雄胺的含量。含量计算公式：式中： As供试品溶液中主峰峰响应值；Cs供试品质量，mg；Ar对照品溶液中主峰峰响应值；Cr对照品质量，mg；W供试品的水分+残留溶剂，；Ps对照品的含量，。验证过程不考

4、虑水分和残留溶剂。结果判断：若含量（按无水物）在98.0%102.0%之间，则判为符合规定。5.3 专属性成品含量检测方法验证和有关物质检测方法验证色谱系统相同，专属性见度他雄胺有关物质检测验证。5.4 系统适应性5.4.1 目的确认用该仪器系统运行含量测试方法的验证是否符合要求。5.4.2 操作步骤精密称取度他雄胺对照品约25mg，置50ml量瓶中，加5ml异丙醇超声使溶解，再加正己烷稀释至刻度，摇匀，平行配制两份分别为对照品R1溶液和对照品R2溶液。取对照品R1溶液连续进样6次，记录色谱图，计算主峰面积的RSD%，及主峰理论塔板数；取对照品R2溶液连续进样2次，记录色谱图，与对照品R1溶液

5、计算回收率。5.4.3 测试结果表1 系统适应性测试数据名称进样次数主峰保留时间（分钟）主峰峰面积主峰理论塔板数对照品R1溶液123456平均RSD%对照品R2溶液12平均回收率5.4.4 结论5.5 线性（50%150%）5.5.1 目的确定在验证范围内，供试品浓度与峰面积之间的线性关系。5.5.2 操作步骤5.5.2.1 精密称取本品对照品 250mg，置50ml量瓶中，加异丙醇超声使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取该溶液各2.5ml、3.75ml、5.0ml、6.25ml、7.5ml分别置50ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，依次制成线性溶液（相对标准浓度50%、75%、100%、125%

6、、150%）。分别取上述溶液各20l进样，每份溶液平行测定2次，记录色谱图，计算每个浓度点的峰面积平均值。以样品浓度对相应平均峰面积做线性回归，计算回归方程及相应的线性回归系数。回归方程：Y=KX+b。5.5.3 测试结果表2 盐酸厄洛替尼线性测试数据编号12345相对浓度50%75%100%125%150%浓度（µg/ml）峰面积12平均值回归方程相关系数r5.5.4 结论5.6 重复性5.6.1 目的确定对于相同供试品多次称样测定结果的重现程度。5.6.2 操作步骤对照品溶液A：精密称取本品对照品约25mg置50ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。对照品溶液B：精密

7、称取本品对照品约25mg置50ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。80%样品溶液配制：取本品约20mg，精密称定，置50ml量瓶中，加5ml异丙醇超声使溶解，再加正己烷稀释至刻度，摇匀，即得（平行配制3份）。100%样品溶液配制：取本品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加5ml异丙醇超声使溶解，再加正己烷稀释至刻度，摇匀，即得（平行配制3份）。120%样品溶液配制：取本品约30mg，精密称定，置50ml量瓶中，加5ml异丙醇超声使溶解，再加正己烷稀释至刻度，摇匀，即得（平行配制3份）。取对照品溶液A、对照品溶液B及各样品溶液进样，记录色谱图，计算含量及RSD。5.6.3测试

8、结果表3 重复性测试数据对照品溶液1 浓度 （g/ml）进样次数峰面积123456峰面积平均值峰面积RSD%对照品溶液2 浓度 （g/ml）进样次数峰面积回收率12峰面积平均值单位浓度峰面积平均单位浓度峰面积样品溶液相对浓度称样量（mg）浓度（g/ml）峰面积含量（%）RSD（%）平均值（%）RSD（%）80%100%120%5.6.4 结论5.7 中间精密度5.7.1 目的为考察随机变动因素对精密度的影响。5.7.2 操作步骤不同时间不同检验人员分别按照标准称量的80%、100%和120%配制供试品测试溶液及100%对照溶液（2份）。每个浓度的供试品溶液各配制3份，计算每份供试品溶液中含量值

9、及RSD%。5.7.3 测试结果表4 中间精密度测试数据对照品溶液1 浓度 （g/ml）进样次数峰面积123456峰面积平均值峰面积RSD%对照品溶液2 浓度 （g/ml）进样次数峰面积回收率12峰面积平均值单位浓度峰面积平均单位浓度峰面积样品溶液相对浓度称样量（mg）浓度（g/ml）峰面积含量（%）RSD（%）平均值（%）RSD（%）80%100%120%表5 两人数据汇总操作者含量（%）平均值RSD%5.7.4 结论5.8 方法准确度5.8.1 目的5.8.2 操作步骤对照溶液：配制100%对照溶液2份，进样。加标前样品溶液的配制：精密称取度他雄胺样品25mg，置50ml量瓶中，加5ml异

10、丙醇超声使溶解，再加正己烷稀释至刻度，摇匀；再取此溶液2.0ml，置20ml量瓶中，平行移取10份。加标溶液的配制：精密称定度他雄胺对照品250mg，置50ml量瓶中，加异丙醇超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。供试液的配制：分别移取加标溶液1.6ml、2.0ml、2.4ml各3份加入加标前样品溶液中，用稀释剂稀释至刻度，另外剩余一份直接用稀释剂稀释至刻度。测定方法：将上述对照品溶液和供试液注入液相色谱仪，记录色谱图，计算样品的加标回收率，实际检出量= 5.8.3 测试结果表6 方法准确度测定结果对照品溶液1 浓度 （g/ml）进样次数峰面积123456峰面积平均值单位峰响应值峰面积RSD%第

11、二份标准品： g/ml进样次数峰面积回收率%12平均值-单位峰响应值平均单位峰响应值p 加标前峰面积p 相对浓度80%100%120%p 加入标准理论量（g/ml）p 加标后峰面积p 加入标准峰面积p 实际回收量（g/ml）p 回收率%p RSD%p 所有值RSD%p 平均值5.8.4 结论5.9 溶液稳定性5.9.1 目的确认溶液的稳定性情况。5.9.2 操作步骤取本品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加5ml异丙醇超声使溶解，再加正己烷稀释至刻度，摇匀。分别在不同时间点进样20µl，记录色谱图。5.9.3 测试结果表7 溶液稳定性测试数据时间（h）平均值RSD（）峰面积5.9.4 结论5.10 偏差讨论验证小