产品无菌方法验证SOP

1、目 录1.0 目的 2.0 适用范围 3.0 职责4.0 仪器设备和试剂5.0 操作步骤6.0 结果解释7.0 结果记录及报告8.0 结果报告9.0 参考文献10.0其他 1.0目的对×××无菌产品的无菌试验方法进行验证，并实施产品无菌试验,确认产品是否无菌.2.0适用范围适用于×××公司的×××无菌产品.3.0职责3.1由×××公司提供无菌试验所需的样品,提供所有试验需要的仪器设备和试剂,并负责对仪器设备进行校正.3.2由×××生物技术有限公司

2、负责提供产品无菌试验方案,实施产品的无菌试验及其培养，并确认产品是否无菌.任何与方案有变化的都应提早通知×××公司负责人.4.0仪器设备和试剂4.1仪器设备4.1.1电子天平1台(量程1001000g, 精度0.1g)4.1.2磁力搅拌器1台4.1.3分注器1台4.1.4高压蒸汽灭菌器1台4.1.5恒温培养箱1台4.1.5低温恒温培养箱1台4.2试剂4.2.1液体硫乙醇酸盐培养基1瓶(TGC)4.2.2胰酪胨大豆蛋白液体培养基1瓶(TSB)4.2.3胰酪胨大豆蛋白琼脂培养基1瓶(TSA)4.2.4无菌生理盐水1瓶4.2.5杭州微球公司生产的培养基灵敏度指示剂，金黄

3、色葡萄球菌ATCC 65384.2.6杭州微球公司生产的培养基灵敏度指示剂，铜绿假单胞菌ATCC 90274.2.7杭州微球公司生产的培养基灵敏度指示剂，枯草芽孢杆菌ATCC 66334.2.8杭州微球公司生产的培养基灵敏度指示剂，白色念珠菌ATCC 102314.2.9杭州微球公司生产的培养基灵敏度指示剂，黑曲霉ATCC 164044.2.10杭州微球公司生产的培养基灵敏度指示剂，生孢梭菌ATCC 114374.2.11杭州微球公司生产的培养基灵敏度指示剂，大肠埃希菌ATCC 87394.3其它4.3.1三角瓶2个（1L ）4.3.2三角烧杯50个（250ml）4.3.3量筒1个(100ml

4、)4.3.4 试管25支(15mL)4.3.5剪刀2把4.3.6长镊子3把4.3.7记号笔1支4.3.8称量纸1包4.3.9打火机1个4.3.10铝箔1盒4.3.11过氧乙酸消毒液1瓶4.3.12一次性PE手套1包4.3.13无菌洁净服2套4.3.14酒精灯1盏4.3.15无菌平皿20个(9mm)4.3.16无菌漏斗(含无菌棉花)5.0操作步骤5.1取样 取三个批号的产品各10套,其中细菌无菌试验5套,真菌无菌试验5套.另取10套,其中6套作为试验方法验证用,剩余4套备用.5.2试剂配制5.2.1培养基配制5.2.1.1 TGC培养基根据试验需要,按每3gTGC培养基粉末加100ml蒸馏水的比

5、例溶于于三角烧瓶后，然后人工倒入150ml培养基于三角烧杯中，用铝箔盖上.然后将其放进高压蒸汽灭菌器，于121进行15分钟灭菌.冷却后将其保存在3035的恒温培养箱中24小时以上，在确认无菌后，供试验使用.每个三角烧杯的培养基量应确保接种产品的体积不大于培养基体积的10%.5.2.1.2 TSB培养基根据试验需要,按每3gTSB培养基粉末加100ml蒸馏水的比例溶于于三角烧瓶后，然后人工倒入150ml培养基于三角烧杯中，用铝箔盖上.其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基粉红色层(氧化层)不超过培养基深度的1/2.然后将其放入高压蒸汽灭菌器，于121进行15分钟灭菌.冷却后将其保存在303

6、5的恒温箱中24小时以上，在确认无菌后供试验用,并确定培养基粉红色层的高度不超过培养基深度的1/5,否则需100加热不超过20min使粉红色消失. 每个三角烧杯的培养基量应确保接种产品的体积不大于培养基体积的10%.5.2.1.3 TSA培养基 根据试验需要,按每4gTSA培养基粉末加100ml蒸馏水的比例溶于于三角烧瓶后，取3mLTSA培养基到15mL的试管内,盖上试管盖,共制备5支.剩余的在用铝箔盖上.然后将其放入高压蒸汽灭菌器，于121进行15分钟灭菌. 在其凝固之前将其保存在50的恒温箱中供试验用.在其凝固之前将5支有TSA的试管斜放,使TSA培养基在试管内形成斜面,冷却后凝固后将其保

7、存在3035的恒温箱中24小时以上，在确认无菌后供试验用.5.3培养基灵敏度试验5.3.1培养基灵敏度指示剂的稀释 按照培养基灵敏度指示剂说明书稀释使用.5.3.2接种试验微生物 无菌操作按下表分别接种0.1mL到装有相应培养基的试管中,每种菌种接两管.同时每种培养基各一管不接种菌悬液作为阴性对照.接种微生物名称培养基名称及接种管数TGC培养基TSB培养基TSASDA金黄色葡萄球菌22铜绿假单胞菌22枯草芽孢杆菌22生孢梭菌22大肠埃希菌22白色念珠菌22黑曲霉22阴性对照5.3.3培养 TGC培养基3035培养3天, TSB培养基2328培养5天.逐日观察记录结果.5.4无菌试验方法验证同时

8、也是培养基用量和高度验证试验,与产品无菌试验同时进行.5.4.1培养基灵敏度指示剂的稀释按5.3.1进行5.4.2产品无菌转移和菌悬液接种按5.5的方法将产品无菌转移到装有培养基的三角烧杯内,按下表分别接种菌悬液0.1mL至三角烧杯内.无产品和有产品的各接种一管, 同时每种培养基各一管不接种菌悬液作为阴性对照.接种微生物名称培养基名称及接种管数TGC培养基TSB培养基无产品(对照)有产品无产品(对照)有产品金黄色葡萄球菌11铜绿假单胞菌11枯草芽孢杆菌11生孢梭菌11大肠埃希菌11白色念珠菌11黑曲霉115.4.3培养 TGC培养基3035培养3天, TSB培养基2328培养5天.逐日观察记录

9、结果.5.5无菌试验方法-直接转移法5.5.1对超净工作台、手等进行消毒,戴上无菌手套.5.5.2点火焰，并在装有培养基的三角烧杯上用水笔记录试验日期,产品型号,批号.5.5.3对装有培养基的三角烧杯杯口进行火焰消毒，并用镊子拉松铝箔，但不打开,对打开松口处及杯口再进行火焰消毒.并将三角烧杯放在火焰附近.5.5.4对产品包装袋切口处用蘸有0.2%过氧乙酸擦拭消毒，再用经过火焰消毒的剪刀将其剪开.5.5.5在产品包装袋内用用剪刀将产品剪下,用镊子稍微打开三角烧杯上的铝箔,用另一把镊子将产品取出放到装有培养基的三角烧杯中.放下镊子,将三角烧杯杯口在火焰上消毒后盖上铝箔,并收紧再次过火焰消毒.5.5

10、.6重复以上步骤,直至完成所有产品的无菌试验.5.5.7同时两种培养基各设一管不加产品的阴性对照.5.5.7培养 TGC培养基3035培养14天, TSB培养基2328培养14天.逐日观察记录结果.6.0结果解释6.1培养基灵敏度试验6.1.1阴性对照无菌生长;接种菌悬液的培养基在规定时间内试验菌生长良好,则判定培养基灵敏度试验符合规定.6.1.2若阴性对照长菌,则试验无效6.1.3若接种菌悬液的任何一管培养基在规定时间内试验菌生长微弱、缓慢或不生长, 则判定培养基灵敏度试验 不符合规定,应另选培养基.6.2无菌试验的产品阳性对照6.2.1与对照相比,含产品的培养基在规定时间内试验菌生长良好,

11、则产品的该试验量在该试验条件下无抑菌作用或抑菌作用可以忽略不计.6.2.2与对照相比,若含产品的任何一个培养基在规定时间内试验菌生长微弱、缓慢或不生长,则产品的该试验量在该试验条件下有抑菌作用,需增加培养基的用量或加中和剂,消除产品的抑菌作用,并重新进行方法验证.6.3产品无菌试验6.3.1在规定的培养时间下,若含产品的培养基澄清无菌生长,则表明产品无菌.6.3.2在规定的培养时间下,若含产品的培养基浑浊并确定有菌生长,则表明产品有菌,除非能充分证明试验结果无效,即生长的微生物非产品所含.当符合下列至少一个条件时方可判试验结果无效:(1) 无菌试验所用的设备或环境的微生物监测的结果不符合无菌检查的要求;(2) 回顾无菌试验过程,发现有可能引起