临床微生物大讲堂结核分枝杆菌检测之问题集锦

1、1.【多耐】李晓英成都臭氧消毒可以杀死结核菌吗回答：想法很好，但是我没有查到相关的文献支持臭氧可以杀死结核菌。2.【多耐】卢先雷成都五院4%NaOH消化离心法现在还用吗？回答：此法国内现在还在使用，课件里介绍的方法是tw使用的。3.【中敏】张江峰河南省医院（58313037）21:19:28首先感谢范老师的精彩演讲，针对潜伏性结核病的早期诊断，相比较来说哪些检测适合？对于MTB和NTM,用MPT64抗原检测能直接区分？回答：谢谢老师的认可。目前潜伏性结核感染（LTBI）的早期诊断，比较好的方法还是IGRAs,但要结合临床表现及影像学资料联合判断，排除有活动性结核的可能。TST也可以作为LTBI

2、的检测手段， 但是不能区分BCG接种导致的假阳性干扰。 利用MPT64抗原检测结核分枝杆菌培养液可以区分MTB和NTM,但要注意某些BCG型别的假阴性，不可以鉴别LTBI和活动性TB。4.【低耐】周晓红广州请问上述培养方法对于NTM能培养出来吗？回答：无论是固体培养（L-J）还是MGIT960都是可以培养MTB和NTM的。5.【高耐】李惠敏上海2015-8-1121:18:502A生物安全柜不可以用于结核实验室吗回答：如果用来结核菌涂片检测是完全可以的，但是做药敏（高浓度菌液或纯菌）的话建议还是使用B2级别的100%#排式BSC,同时配备负压环境，做好生物安全防护。6.【中敏】王欣抚顺第四医院

3、辽宁（2366658092）21:19:58液体培养阳性的标本如果转做固体培养基呢？除了液转固的方法还有其他的好的方法吗？回答：首先，液体培养阳性，抗酸染色证实为抗酸杆菌，即可报告临床分枝杆菌培养阳性，不需要转种固体培养基。液体培养阳性的标本是可以转种固体培养基，但是周期比较长。目前培养方法只有液体培养是最为理想的方法，能做结核培养的商业化系统主要是BDMGIT960、TREK两种，也是FDA批准通过的两种系统（仅此两种）。其他的血培养系统也是可以进行结核血培养的。7.【高耐】陆军硼江衢州IGRAs阳性肯定是潜伏性结核感染吗？回答：首先要明确一点的是，任何一种方法都有其局限性，不可能敏感性和特

4、异性都达到100%IGRSs也不例外，只不过假阴性的比率非常的低而已。8.【低耐】黄金伟温医附五院临床工作中发现T-SPOT远没有宣传的好回答：IGRAs不能区别LTBI和活动性TB,此法比较适合用于发达国家，TB的发病率在发达国家要相对的低很多，使用IGRAs主要是用来筛查LTBI,进行干预治疗以实现消灭结核的目的。我国是TB大国，按照全球1/3感染的比例算，那我国的LTBI可是个惊人的数字，所以会有很多IGRAs阳性的正常人。临床在诊断活动性TB的时候不能单凭此检测结果就下结论，需要结合临床症状和影像学检查综合考虑。因此，IGRAs只能辅助性的诊断活动性TB。9.【低耐】王山梅河南省医20

5、15-8-1121:21:30非常感谢，请问NTM的生物安全要求是否等同MTB,也就是普通实验室是否可以处理NTM回答：NTM的致病性要远远的低于MTB,所以一般实验室是可以处理NTM的， 但毒力低也不可以轻视， 最好还是在BSC内操作。10.【高耐】李惠敏上海(260141310)21:18:502A生物安全柜不可以用于结核实验室吗？只做涂片和染色。回答：A2级的生物安全柜做染色和涂片足矣。11.【泛耐】邙俊广西Y-干扰素释放试验能否区分NTM和结核？回答：IGRAs是可以区分NTM的，虽然在一些NTM中也有表达ESAT6和CFP10的，比如堪萨斯、转黄、海分枝、斯赛格分支杆菌等，但可以导致

6、人体发生免疫反应的只有堪萨斯，而堪萨斯在临床很少发生感染，所以可以认为IGRAs是高度特异的。12.烤片机65C,30分钟能灭活结核杆菌吗？回答：烤片机65c也可以起到杀菌作用。13.【多耐】曾吉-武汉T-spot假阴性有多高？有数据吗？回答：WHO发布的指南中，IGRAs诊断活动性TB的阳性率在73%-83%也就是说，有将近1/4的活动性TB被漏检。14.【中敏】张江峰河南省医院(58313037)21:22:51针对MPT64抗原检测其灵敏度如何？该检测方法是否存在假阳性的结果？有哪些影响因素引起假阳性？回答：大多数文献报道MPT64抗原的灵敏性在95%H上，特异性在98以上。也有文献的报

7、道结果低于上述比率。任何一个方法都会存在假阳性或假阴性。文献中报道的假阳性，更多的是出现在培养管污染的情况，正常培养阴性的管子偶尔也会出现假阳性，但几率较低，具体是什么原因导致的，原因不明确。如果培养管中的菌量较低，亦或是遇到BCG的4个亚株(MPT64缺失)会出现假阴性。总之，尽量不要使用培养污染的管子进行MPT64的鉴定，会降低检测的效力。15.【多耐】鲁炳怀北京pcr检测结核如何评价？如何和痰涂片结核？回答：评价首先需要确立一个评价标准，寻找一个参比方法，通常是以培养结果作为标准，将PCR检测结果和痰涂片结果同培养结果进行比较，痰涂片也可以和PCR结果进行比较。16.【高耐】闫立静廊坊浓

8、缩法会不会有污染回答：保证浓缩法使用的溶剂是可靠的，做好阴性和阳性对照，严格按照操作规程操作是没有问题的。17.【多耐】彭娟-吉首2015-8-1121:24:35范老师你好，我们在做天骑科技夹层杯试验，你有对夹层杯法的评价吗？回答：抱歉，您说的这个夹层杯我没有使用过，不好做出评价。18.【高耐】刘拥荣宁乡县老师好，我想问一下，我们用的是彭氏杯检测，平日里都在生物安全柜里操作，老师说房间也需要保持负压，这样的要求对基层来说有点高回答：我在课件里讲的是如果操作药敏，强烈建议有负压环境，因为在药敏过程中，会制备高浓度的MTB菌液，会产生大量的气溶胶，再好的BSC也不能完全保证不会有气溶胶外泄，所以

9、最好有负压环境，保证气流的定量流动。但如果只是做抗酸涂片和培养的话，没有负压是可以的，但要做好个人防护。19.【高耐】江鸿乐黄山2015-8-1121:25:04比较高压哪个比较方便一点？回答：高压的效果是毋庸置疑的，高压后操作是绝对安全的，但是需要较长的时间。次氯酸钠浓缩法虽然可以杀死MTB,但肯定是没有高压的结果可靠，不能保证所有的MTB都被杀死，但已大大降低了生物风险。操作起来会比较省时方便。20.【低耐】余蓉许昌谢谢老师的精彩讲解，范老师在课件中提到的tw涂片的方法，是现在用彭氏杯法的结核杆菌集菌法吗？回答：我没有使用过老师说的彭氏杯法，但我想最终达到的目的都是一样的，富集菌落提高阳性

10、率。21.【高耐】邓起秀？广西钦州2015-8-1121:25:27谢谢范老师精彩演讲，1、请问胸水有什么好的方法固定，平时染色到一半就掉完，到最后镜检就什么都没有了？2、抗酸染色方法有热染和冷染，请问阳性率哪个高，热染抗酸杆菌永不褪色，冷然容易褪色，平时工作我们应该用那种方法比较好？3、如果肺结核病人吃药大概一年，临床症状消失，痰涂片阴性，拍片提示还是肺结核，请问这时候是以实验室检验结果为主还是以拍片结果为主，还需要继续治疗吗？回答：1.1.首先一点是涂片不要太厚，最好用NaOH消化处理，离心后再涂片，玻片要脱脂。钱雪琴老师的做法：将胸水中的凝块絮状物吸到另外一只离心管，剩余标本离心沉淀，去

11、上清，将沉淀物与之前的凝块合在一起，用2倍体积2%-4%NaOH消化半小时，用3-4倍PBS或蒸储水中和，离心，弃上清，取一滴涂成10mm*20mm大小。消化时以絮状物和凝块完全消失溶解为宜，要漩涡震荡。胸水离心后，如果不消化处理，要避免染色时脱落，涂片做到尽可能薄，最好紫外线照射2个小时，也是可以的.2.阳性率我没有做过比较，但效果应该是一样的，只是放久了冷染会褪色。至于使用哪种方法，要综合多方面的因素，如果您所在的省份需要阳性MTB涂片保存时间很久，平时标本量不多，那可以使用热染法，反之使用冷染比较好。3.结核多数会形成空洞的钙化灶，至于是活动性TB还是治愈后存留的空洞，这个就不好说了，要

12、看阅片的临床医生的能力，抗结核治疗一年已经基本可以治愈，前提是在准确药敏结果指导下治疗。涂片转阴，没有临床症状并持续2-3个月，基本可以认为是治愈了。22.【敏感】李晶晶-临汾(943759975)21:26:04胸水结核菌图片一定需要离心吗？是不是根据胸水性质而定？回答：胸水结核菌涂片最好是离心消化后再涂片，因为胸水中的菌载量通常是比较低的，染色时易脱落，需要离心富集菌再进行检测。胸水量50-100ml为宜。23.【低耐】黄金伟温医附五院(261118840)21:26:06个人认为建议国内取消T-SPOT检测，增加涂片检查，加强尤其脑脊液，心包积液，腹腔积液的离心及标准化检测回答：取消T-

13、SPOT肯定是不可能的，只是要合理使用。涂片毕竟也有局限性，结核的诊断本就是复杂困难的，需要联合多种方法检测。24.【敏感】杜帅先武汉协和结核TSPOT检测，有时候会碰到阳性阴性对照，以及A,B抗原斑点都有很多点，复查也一样。尤其是风湿科和消化科的病人常见。请问老师们碰到这种情况怎么解释？回答：T-SPOT检测结果判读是数细胞点数，如果遇到一些患者，特别是风湿科的患者，或者是免疫性疾病的,患者，其体内T细胞释放的干扰素-丫的量会偏高，即本底偏高，致使阳性对照和阴性对照都出现较多的斑点，造成结果判读的困难。25.【高耐】陈志坚-广西(429327988)21:26:29范老师，想问：(1)有一病

14、人去年上半年查出结核，痰涂片也找到抗酸杆菌治疗后好转，今年8月初，又出现咯血，CT看到新的结节状，但痰涂片找不到结核菌，为什么呢？(2)结核菌有没有排菌期？谢谢回答：1.结核病治愈后是非常容易复发的，因为肺泡巨噬细胞很难将MTB完全清除。还有就是有可能该患者又被传染而发病。有TB的症状但涂片阴性是常见的情况，TB涂片阳性要有一定的前提条件：首先，该患者必须是开放性TB,MTB在患者咳嗽的过程中才能随痰液排出；菌量也是一个重要条件，涂片的敏感性或是检测下限在5000cfu/ml,如果低于此水平，涂片是检测不出的。另外，每次咳痰也不一定都是从病灶咳出的，因为每次咳痰的力度不同，痰液有可能从不同部位

15、的肺段排出，就会出现时阳时阴的情况。26.【泛耐】周惠娟-陕西请问胸水，有什么好的方法固定，平时染色到一半就掉完，到最后镜检就什么都没有了回答：请参见问题21.27.【高耐】江鸿乐黄山老师你好，我们医院现在是高压之后离心涂片，然后镜检，比较次氯酸钠法离心涂片，它们的优缺点是什么？回答：高压后离心，标本没有达到真正的浓缩，会有很多沉淀，耗时长，优点是安全。次氯酸钠法消化痰比较彻底，缺点是离心前不加水稀释，染色时痰膜易脱落。建议：离心前用蒸储水稀释或不稀释，但要在沉淀中加1:15的血浆1滴。(钱雪琴老师做法)28.【高耐】杨乐园-上海市一宝山分院我和吴庆老师问题一样MPB64和MPT64是指一种东

16、西么？我们现在用的结核抗原检测培养物是MTB还是NTM用的就是检测MPB64。回答：MPT64又叫MPB64,叫法不同。29.【MDR】卢先雷成都五院如何看待痰涂片抗酸杆菌阳性中的NTM的问题？回答：NTM近年来的发病率程上升趋势，但多数是肺外的NTM感染。NTM抗酸涂片很难通过镜下就将其同MTB区分开，这需要经验非常之丰富的阅片人员，但也不能保证结果完全正确，所以最好不要通过镜检来区分NTM和MTB。30.【MDR】卢先雷成都五院2015-08-1121:30:02NTM的比例大概占多少比例？回答：2000年全国第四次流调的结果是NTM总感染率为11%2010年第五次全国流调的结果为22.9

17、%,10年翻了一倍。31.【R】周川平陕西2015-08-1121:31:48次氯酸钠法离心涂片和氢氧化钠处理后离心，它们的优缺点是什么？回答：次氯酸钠处理：1 .安全，2 .对痰的消化比较彻底3 .非特异性物质增加，对镜检有干扰4 .不易处理胸腹水、脓、脑脊液和明显的血性穿刺液NAOH处理：1 .菌是活菌，存在生物危险，2 .消化痰和尿的能力不如次氯酸钠3 .非特异性物质少，镜检背景干净，4 .对常见标本均能消化处理32 .【中敏】周志敏许昌高压灭菌与次氯酸钠处理相比较哪个效果更好？回答：次氯酸钠好。参照问题27。33.【敏感】张江峰河南省医院谢谢老师的回答，还有问题，Xpert检测方法，是

18、一个盒子检测一种耐药吗？对利福平耐药检测是针对RRDR耐药决定区设计探针，那就检测不出非RRDR的利福平耐药检测？回答：Xpert只能检测利福平耐药。其设计的探针也只能检测对利福平是否耐药。因对利福平耐药的MTB,95%也又INH耐药，所以认为对利福平耐药的MTB基本就是MDR。34 .【MDR】卢先雷成都五院2015-08-1121:33:25快速生长NTM与缓慢生长NTM的药敏结果差异？回答：快生长的NTM常见有偶发分枝杆菌复合群、龟分枝杆菌/脓肿分枝杆菌、转黄分枝杆菌、齿垢分枝杆菌，其他的基本为慢生长NTM。慢速生长的NTM药敏通常使用MGIT960TBeXiST检测，快速生长的NTM使

19、用CLSIM24-A2中的MIC法。NTM治疗通常比较困难，往往需要几个月的治疗周期，且结果不理想。快生长NTM应该做药敏的药物有：阿米卡星、头抱西丁、环丙沙星、克拉霉素、多西环素（或米诺环素）、亚胺培南、利奈口坐胺、莫西沙星、复方新诺明、妥布霉素。慢生长的NTM,在CLAIM24-A2中有列出海分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌病和鸟分枝杆菌复合群的药敏规则，都是不一样的。有一些NTM的药敏规则尚未标准化。引自CLSIM24-A235 .【S】马琼河南省医2015-08-1121:33:57实验室对NTM的药敏试验有什么好的方法？回答：NTM的药敏我没有做过，个人认为还是参照CLSI-M24-A2的要

20、求来操作吧。36 .【高耐】陆军？浙江衢州消化多长时间？回答：消化15分钟，时间要严格控制，不可过长，否则MTB会发生菌体降解。37 .【敏感】黄晓霞陕西2015-8-1121:33:295烟氯酸钠溶液是84液吗回答：需要看包装上的说明，有效氯的浓度是多少，进行换算。可以用消毒片配置。最好是现用现配，能够保证有效氯的浓度。38 .【低耐】林莎长春胸水图片，多少视野查到多少抗酸阳性菌算是阳性？胸水和痰液要求一样吗？回答：胸水涂片等同于痰涂片，找到3条以上。抗酸染色300视野，荧光染色50视野。39 .【高耐】刘拥荣宁乡县一定要在负压房间吗？回答：请参见问题18.40 .【高耐】张艳山西太原钱老师

21、消化后加水多少回答：加消化试剂不超过15ml,再加水至50ml.41 .【低耐】杨茹秦皇岛以上讲的几种方法，都不能明确的区分是潜伏期结核还是活动期结核，是吗？回答：免疫学方法都无法区分LTBI还是活动性TB。42 .【中敏】付先锋四川遂宁老师们请问，谁知道多重耐药菌的耐药趋势图怎么做回答：这个可以用Excel表格或是专业的绘图软件。43 .【敏感】柳丽娟福建传染我们准备做结核培养，可是没有负压实验室，只配了B2安全柜和通风柜，需注意什么？回答：B2安全柜是100%#排的，培养和涂片其实都是差不多的，不会产生高浓度含MTB的气溶胶，只要做好个人防护，如佩戴N95口罩，穿一次性反穿衣等，是可以实现

22、自我防护的。只有在做药敏的时候，强烈建议配有负压环境。44 .【高耐】张艳山西太原(834935027)21:37:43xpert如何收费回答：这个每个省的收费标准不一样，上海目前还没有收费标准，但计划是申请950-1000/次。比较贵。45 .【敏感】柳丽娟福建传染有人用过银科的药敏试剂吗？回答：我没有用过，您可以在群里面问问其他的老师。46 .【敏感】孙学慧承德市中心医院浓缩集菌后还有必要再紫外线照射吗回答：如果使用5%次氯酸钠的话没有必要。如果使用NaOH,最好要照紫外，在生物安全柜中烤片也行。47 .【低耐】杨茹秦皇岛固体培养基一般4周报阳，做药敏要取2周的菌苔，怎样做到？回答：从固体

23、培养基上生长肉眼可见的菌落开始算起，14天内用于药敏检测，如超过这个期限菌龄较久，会影响药敏结果，特别是口比嗪酰胺的药敏。48 .【敏感】张江峰河南省医院老师好，您介绍了许多针对MTB的检测技术，针又NTM菌株的鉴定，是否也有相对应的检测方法呢？回答：针对NTM的检测也有很多检测手段，比如HAINGenoTypeMycobacteriumCM/AS,北京博奥公司的诊断芯片等。49 .【低耐】梁莉宿州我们是用84浸泡再离心取沉渣图片！84对结果有影响么？回答：84消毒液的有效氯浓度大概在5.5%-6.5%浓度有点偏高，如果不稀释的话作用时间要相应的缩短，但杀菌的效果需要做实验来验证。50 .【低耐】侯辰蕊-山西请问现在市面国产结核PCR试剂所测序列都一样吗豉们Z核PCR阳性与涂片不是很一致，？回答：目前国产PCR试剂盒我没有使用过，但都应是MTB的保守序列，比如rpoB,热休克蛋白65基因等。PCR结果与涂片结果不一致是正常的，因为痰液里存在一些PCR反应酶抑制剂，有时会导致假阴性。有时因为阅片的原因(漏检)涂片会假阴性，等等，都会导致两种方法的结果不一致。51 .【敏感】孙学慧承德市中心医院胸腹水、脑脊液，可以也用次氯酸钠