牛论文牛卵母细胞应激诱导金属硫蛋白基因凋亡

1、牛论文：应激诱导对牛卵母细胞成熟和凋亡的影响及金属硫蛋白基因的初步研究【中文摘要】细胞凋亡是细胞清除由于自身或外界环境不良环境影响产生的不良细胞的主要途径之一。体外培养的卵母细胞易受一些环境及外源刺激,如氧化剂,机械刺激,重金属,生物类的毒素,紫外线等产生一系列的刺激性反应,包括细胞转导路径,基因的表达和蛋白的合成,细胞的分裂增殖及凋亡,甚至是坏死;金属硫蛋白对细胞有抗氧化清除自由基的功效,对细胞的凋亡起抑制作用。由于环境的影响,细胞会不可避免的受到外界不良环境的影响,所以通过体外培养卵母细胞,外源性的添加应激诱导的因素从而进一步探讨其对卵母细胞发育和凋亡的影响,从而可以趋利避害,提高卵母细胞

2、的成熟率,有利于体外受精,提高早期胚胎的发育率和附植率,降低不孕不育的比率或胚胎畸变率及流产率。本研究以牛卵母细胞为试验材料,应用共聚焦显微镜、Annexin V-FITC/PI双染试验、Fluo3/AM和RH123染色、RT-PCR的方法,初步研究CdCl_2、紫外线及H_2O_2对卵母细胞体外成熟及凋亡的影响及构建金属硫蛋白基因的过表达载体得出以下结论:1.本实验首次研究CdCl_2对牛卵母细胞体外成熟及凋亡的影响。实验表明,CdCl_2对卵母细胞的毒性作用呈剂量效应,随着其浓度的.【英文摘要】Cell apoptosis is one of the main ways for early

3、 embryonic cells to remove bad cells which produced by its adverse or external environment. Oocytes in vitro is easily affected by some of the environmental and exogenous stimuli, such as oxidants, mechanical stimulation, heavy metals, biological toxins, ultraviolet ,which produce a series of irrita

4、tion, including cell transduction path, gene expression and protein synthesis, cell division and and proliferation,cell apoptosis, or even necrosis; Metallothionein.【关键词】牛 卵母细胞 应激诱导 金属硫蛋白基因 凋亡【英文关键词】bovine oocyte Stress-induced metallothionein gene apoptosis【索购全文】联系Q1：138113721 Q2：139938848 同时提供论文写作

5、一对一辅导和论文发表服务.保过包发【目录】应激诱导对牛卵母细胞成熟和凋亡的影响及金属硫蛋白基因的初步研究摘要6-7 Abstract7-8第一章 文献综述14-231.1 细胞凋亡概述14-201.1.1 诱导细胞凋亡的因素151.1.2 细胞凋亡的分子机制15-181.1.3 卵母细胞的凋亡18-201.1.4 细胞凋亡的检测方法201.2 氯化镉(CdC1_2)对雌性生殖细胞凋亡的影响20-211.3 紫外线对雌性生殖细胞的影响211.4 活性氧（ROS）对生殖细胞凋亡的影响21-221.5 金属硫蛋白221.6 本研究的内容和意义22-23第二章 氯化镉对牛卵母细胞体外成熟及凋亡的影响2

6、3-362.1 试验材料23-252.1.1 主要仪器设备23-242.1.2 主要试剂及配制24-252.2 试验方法25-272.2.1 卵母细胞的采集252.2.2 卵母细胞的体外成熟252.2.3 卵母细胞的体外成熟的鉴定252.2.4 不同浓度CdC1_2 处理的成熟卵母细胞早期凋亡检测252.2.5 不同浓度CdC1_2 处理的成熟卵母细胞Ca(2+)分布及相对荧光强度检测252.2.6 不同浓度CdC1_2 处理的成熟卵母细胞线粒体膜电位检测252.2.7 RT-PCR 检测Bcl-2 和Bax 基因的相对表达25-272.2.8 数据分析272.3 结果与分析27-342.3.

7、1 不同浓度的CdC1_2 对卵母细胞成熟及凋亡的影响27-292.3.2 不同浓度的CdC1_2 处理的成熟卵母细胞的Ca(2+)分布及相对荧光强度的检测29-312.3.3 不同浓度的CdC1_2 处理的成熟卵母细胞线粒体膜电位的检测31-332.3.4 RT-PCR 检测Bcl-2 和Bax 基因的相对表达33-342.4 讨论34-36第三章 紫外线对牛卵母细胞体外成熟及凋亡的影响36-463.1 试验材料363.1.1 主要仪器设备363.1.2 主要试剂及配制363.2 试验方法36-373.2.1 卵母细胞的采集、体外培养成熟363.2.2 紫外线对卵母细胞照射不同的时间后对其早

8、期凋亡的检测363.2.3 紫外线对卵母细胞照射不同的时间后对其Ca(2+)强度的检测363.2.4 紫外线对卵母细胞照射不同的时间后对其线粒体膜电位的检测363.2.5 紫外线对卵母细胞照射不同的时间后对其相关凋亡基因的检测36-373.2.6 数据分析373.3 结果与分析37-443.3.1 紫外线对卵母细胞成熟及凋亡的影响37-393.3.2 紫外线照射卵母细胞不同时间后其Ca(2+)分布及相对荧光强度的检测39-413.3.3 紫外线照射卵母细胞不同时间后其线粒体膜电位的检测41-433.3.4 紫外线照射卵母细胞不同时间后卵母细胞中Bcl-2 和Bax 基因的相对表达.43-443

9、.4 讨论44-46第四章 H_20_2对牛卵母细胞体外成熟及凋亡的影响46-594.1 试验材料46-474.1.1 主要仪器设备464.1.2 主要试剂及配制46-474.2 试验方法47-484.2.1 卵母细胞的采集、体外培养成熟474.2.2 不同浓度H_20_2 处理的卵母细胞的早期凋亡的检测474.2.3 不同浓度H_20_2 处理的卵母细胞的TUNEL 染色474.2.4 不同浓度H_20_2 处理的卵母细胞的Ca(2+)强度的检测474.2.5 不同浓度H_20_2 处理的卵母细胞的线粒体膜电位的检测474.2.6 不同浓度H_20_2 处理的卵母细胞中的Bcl-2 和Bax

10、 基因的相对表达474.2.7 数据分析47-484.3 结果与分析48-574.3.1 不同浓度H_20_2 处理的卵母细胞的早期凋亡的检测48-504.3.2 不同浓度的H_20_2 处理的成熟卵母细胞的TUNEL 染色50-524.3.3 不同浓度的H_20_2 处理的成熟卵母细胞的Ca(2+)分布及相对荧光强度的检测.52-544.3.4 不同浓度的H_20_2 处理的成熟卵母细胞线粒体膜电位的检测54-564.3.5 RT-PCR 检测H_20_2 处理的成熟卵母细胞中Bcl-2 和Bax 基因的相对表达56-574.4 讨论57-59第五章 牛金属硫蛋白（MT）基因的初步研究59-695.1 试验材料59-605.1.1 试验材料595.1.2 主要仪器及设备595.1.3 主要软件及生物学数据库59-605.1.4 主要试剂605.2 试验方法60-645.2.1 MT 基因CDS 区的克隆60-635.2.2 MT 基因CDS 区真核载体的构