运动性疲劳肾气虚大鼠睾丸超微结构和性激素改变及补肾益元中药的

1、史垦重麴堕堂苤查！塑！生！旦箜堑鲞箜呈塑垦蔓！坐坚盟！堕型兰塑！：踅！：！运动性疲劳肾气虚大鼠睾丸超微结构和性激素改变及补肾益元中药的作用石幼琪周志宏王奎刘晟刘建红欧明毫湖南省体育科学研究所（长沙）摘要目的：探讨运动性疲劳肾气虚的实质及补肾益气中药的作用机理。方法：以健康雄性二月龄大鼠为研究对象，随机分为安静对照组、运动实验组、运动肾气虚组和服药组（服用补肾益元中药），采用递增负荷游泳加悬吊应激的方案建立运动性疲劳肾气虚动物模型。实验后检测各组大鼠血清睾酮和促性腺激素含量，称量大鼠睾丸重量并观察睾丸的超微结构。结果：（）运动实验组和运动肾气虚组大鼠血清睾酮含量显著低于安静对照组（）；（）服药组

2、大鼠血清睾酮水平显著高于运动肾气虚组（）；（）电镜观察运动实验组和运动肾气虚组大鼠睾丸间质严重水肿（），细胞固缩，染色质边集，呈凋亡改变。而服药组大鼠睾丸间质水肿不明显，大多数细胞结构基本正常，线粒体嵴大多数清晰，趋于正常。结论：补肾益元中药能保护过度训练大鼠的睾丸间质细胞及细胞内线粒体结构以维持睾酮的正常分泌、促进内源性睾酮的再生，这种对睾丸组织结构的保护作用可能是延缓运动性疲劳肾气虚发生的机理之一。关键词运动性疲劳；肾气虚；睾丸；超微结构；性激素；中药为了探讨运动性疲劳肾气虚的实质及补肾益气中药的作用机理，本研究观察了运动性肾气虚动物相关内分泌指标和睾丸超微结构改变及补肾益气中药对其的影响

3、，为研究运动性肾气虚的发生及预防提供实验依据。材料与方法动物与分组健康雄性二月龄大鼠，体重±，由中南大学实验动物中心提供。所有大鼠在相同的环境下以相同饲料喂养。开始正式实验前，先进行为期周的适应性游泳，淘汰无法参加游泳运动的大鼠，然后随机分组进行正式实验。只大鼠随机分为组：安静对照组（不运动）、运动实验组（游泳运动）、运动肾气虚组（游泳运动悬吊应激）和服药组（游泳运动悬吊应激中药灌胃，剂量：体重），每组只。药物为超微补肾益元中药糖浆，主要成分为人参、女贞子、枸杞、锁阳、黄芪、仙鹤草、杜仲等。由湖南省中医药研究院附属医院制剂室制备，规格为生药糖浆。运动性疲劳肾气虚动物模型采用递增负荷游

4、泳加悬吊应激的方案建立运动性疲劳肾气虚动物模型，。游泳的玻璃缸长、宽、高，水温为，水深为，所有参与运动的大鼠以相同方式进行游泳训练，每周一至周六游泳六天，每天上午两次，共训练周。第一、二、三、四、五周每次游泳时间分别为、分钟，间隔时间均为分钟。从第三周开始，大鼠游泳时尾部负体重的铅丝，第四、五周增加到。运动肾气虚组和服药组前周依上述方案游泳，第周，上午仍继续负重游泳，下午给予悬吊应激。应激方法：将大鼠尾部距肛门处用胶布固定在长木条上，使其头向下悬吊一定时间。其下放置一缸水，使鼠鼻恰及水面，以迫使其处于抬头和四肢不断活动状态。用温度计测定应激前及悬吊期间不同时间的肛温。悬吊应激期间动物体温逐渐下

5、降，作为动物对应激反应和耐受情况的主要参考指标。每次悬吊时间小时，由于出现应激耐受，其后各天应激期间体温下降变慢，因此逐渐增加悬吊时间。各运动组大鼠在第五周的最后一天进行力竭实验。力竭的判断标准是：从大鼠下水开始记时，直到大鼠无力浮上，即将沉入水底停表记时，记录力竭运动时间旧。给药方案按剂量灌胃（按成人正常用药量换基金项目：湖南省科技厅年社会发展重点项目（编号：）资助通讯作者：石幼琪。：；：主垦重麴匿堂蓥查呈塑！生！旦箜堑鲞笙兰塑堡垒也！坐堕堕！丛竺兰堂！：堑！堕！：兰算，每毫升药液相当于克生药）。灌胃时间为游泳后小时。安静对照组大鼠灌相同体积的饮用水。动物取材及指标测试各运动组大鼠在最后一次

6、运动后次日分别处死，安静对照组同时处死。采用的戊巴比妥（）腹腔注射，麻醉后腹主动脉取血，静置后分离血清，一保存，用于血清睾酮（）和血清促性腺激素（）的测定。取大鼠右侧睾丸，电子天平称重。每组随机取只大鼠的右侧睾丸进行电镜标本的制备：以戊二醛溶液固定，常规包埋、切片，醋酸铀和硝酸铅双重染色。透射电镜观察。实验仪器血清激素测试仪器为美国宝特酶标仪。透射电镜观察仪器为日本产日立一，由中南大学湘雅医学院电镜室制片看片。统计学处理所有数据用统计软件处理，计量资料用茗±表示，组间两两比较采用单因素方差分析（），显著性差异水平为。结果实验后各组大鼠性腺轴指标的变化表显示，实验周后，运动实验组和运动

7、肾气虚组大鼠血清睾酮含量显著低于安静对照组（）；服药组大鼠血清睾酮水平显著高于运动肾气虚组（）。各组血清浓度及睾丸重量均无显著性差异。表实验后各组大鼠血清、及睾丸重量值注：，与安静对照组比较；，与运动肾气虚组比较。各组大鼠睾丸组织超微结构的变化（倍，图）图运动肾气虚组：间质水肿严重，间质细胞呈长梭形，胞质线粒体嵴大多丢失，甚至呈空泡变，核染色质图安静对照组：为正常睾丸细胞结构，细胞内线粒体结构清晰，内质网正常略有边集图服药组：间质水肿不明显，大多细胞结构基本正常，图运动实验组：细胞固缩，间质严重水肿（）染色边集，呈凋亡改变细胞内大多线粒体结构较清晰，但仍可见部分细胞 有染色质边集主垦垂塑匿堂蓥

8、查兰塑！生！旦箜堑鲞箜呈塑堡垒堕！墅堕！丛盟！丛型兰堂！：堑！堕！：讨论本研究参照运动性疲劳低血睾酮模型和应激致“肾虚”动物模型（现此模型已被列入卫生部“保健食品技术规范”作为改善性功能作用检验方法之一），采用递增负荷游泳加悬吊应激的方案建立运动性疲劳肾气虚动物模型。这种模型基于中医理论“恐伤肾”、“房劳伤肾”和运动性疲劳的特点，给予动物一种较长期强应激（悬吊）和大强度运动，使其较长期处于恐惧、紧张、过劳状态，产生类似人体“肾虚”的病理生理变化。本文采用此模型，观察到补肾益元方剂对运动性疲劳肾气虚大鼠相关指标有所改善，反证了动物模型是成功的。许多临床研究和动物实验表明，过度训练后出现的症状多类

9、似中医之肾阳、肾气虚弱表现及低血睾酮症状，补肾气、温肾阳的中药在抗运动性疲劳之血睾酮降低治疗中占主导。本研究结果显示运动肾气虚组经五周递增运动负荷加悬吊应激，血水平均较安静对照组显著降低，而服用补肾益元中药组血与安静对照组无显著差异，表明补肾益元中药能防止运动性低血睾酮和运动性肾气虚的发生。通过血液循环到达睾丸后，与间质细胞上的膜受体结合，促进合成与分，；当血水平下降时，其对垂体和下丘脑的抑制作用减弱，反馈性地引起、分泌增加，从而使血水平回调。由于在下丘脑、垂体、睾丸之间存在这种功能相关而又互相影响的关系，因而被称做下丘脑一垂体一性腺轴调控系统。本研究结果显示，运动实验组、运动肾气虚组和服药组

10、较安静对照组高，尤其是服药组升高较多，但无显著性差异，说明血下降时，下丘脑一垂体一性腺轴调控系统起了一定作用。郑陆等发现，大鼠睾丸重量与血清水平相关，提示有可能根据睾丸重量判断其合成并分泌能力的强弱。本研究中，各组睾丸的平均重量差异无显著意义，与文献报道不一致，可能是血清的增加不是通过睾丸间质细胞数量增多使睾丸重量增加，而是通过其他途径实现的。本研究结果表明，单纯连续大强度运动和运动加应激造成的运动性肾气虚大鼠的睾丸超微结构均有明显的破坏，尤以肾虚组为甚。应用补肾益元中药后，睾丸间质水肿明显减轻，趋于正常，细胞线粒体结构基本清晰，内质网及溶酶体改变也不明显。这些现象提示睾丸间质细胞、线粒体、染

11、色质结构的损伤使合成睾酮的能力及能量代谢受影响，是造成运动性低血睾酮和运动性肾气虚的外周机制之一，补肾益气中药能改善运动性低血睾酮症，并不是直接合成或补充睾酮，也不是影响性腺轴上游，而主要是通过保护睾丸间质细胞、线粒体及内质网的正常结构，使其充分发挥正常的分泌功能，促进内源性睾酮的分泌。提示睾丸组织超微结构的破坏是运动性肾气虚病理学证据之一。小结为期周的负重递增负荷游泳训练加悬吊应激后，大鼠出现运动性低血睾酮和睾丸组织超微结构明显破坏，可能是运动性疲劳肾气虚病机和病理学的证据之一。服用补肾益元中药，有提升大鼠血清睾酮水平的作用，可防止雄性大鼠运动性低血睾酮的发生。补肾益元中药能保护过度训练大鼠的睾丸间质细胞及细胞内线粒体结构以维持睾酮的正常分泌、促进内源性睾酮的分泌，这种对睾丸组织结构的保护作用可能是防治运动性疲劳肾气虚和低血睾酮发生的机理之一。参考文献包天桐应激致“肾虚”动物模型介绍药学学报，（）：徐晓阳，冯炜权，冯美云，等运动性低血睾酮大鼠某些功能的变化及补肾中药效果的观察天津体育学院学报，（）：钱风雷，曾凡辉补