植物病害试验与数据分析

1、云南农业大学植物保护学院王扬第五节 线虫类试验与报告线虫病病害概述根结线虫土壤虫量调查方法根结线虫病害调查方法根结线虫病抗病性测定试验设计与数据处理根结线虫病防治试验设计与数据处理根结线虫病产量损失预测线虫是一类低等无脊椎动物，部分种类能够寄生植物，造成产量损失或植物产品质量变劣，引起植物病害；线虫对植物的危害主要有：1. 线虫口针穿刺和线虫侵入引起的机械损伤，2. 食道腺分泌物对植物的致病作用；线虫危害的部位包括植物的根系、幼芽、茎秆、叶片、花、果实、种子等，其中绝大多数种类危害地下部，属于土传病害，几乎所有植物的根部都有线虫寄生；线虫病害发病进程缓慢，属于积年流行性病害，地上部症状通常不明

2、显，类似营养不良症状。根结线虫生活史根结线虫病是典型的积年流行性土传病害，土壤中土壤中的活跃态二龄幼虫是决定病害发生程度的重要因素；土壤虫量调查是根结线虫病害调查的基本内容，通过初始虫量的调查可以预测病害的发生程度，通过对作物整个生长季节中虫量变化的调查可以评估作物对根结线虫的抗性以及防治措施的效果。田间取样方法 根结线虫田间分布存在不均匀现象，因此土壤样品采集采取“Z”字型或棋盘式取样法，力求所获数据能够反映整个田块的情况。 在每个选定的取样点，用土壤取样器，取深度为0-20cm的土柱，同一田块的所有土样混合均与，合为一个样本，带回室内进行线虫分离。活跃态土壤根结线虫二龄幼虫分离法-浅盘法

3、每份土样，量取100ml土壤，移入覆盖滤纸的筛网上置于浅盘中加水浸没，静止24h。浸出液先后通过200目和500目筛网，收集500目筛面上的线虫，置于显微镜下观察计数。每样品重复三次，取平均值为样品虫量。ABCD土壤总虫量分离计数-密度梯度离心法 量取10ml土壤样品，转入50ml离心管，加入30水悬浮土壤，4000转/min离心1min，弃上清液，沉淀中加入45%蔗糖溶液再次悬浮，2000转/min离心1min，上清液过500目筛网，筛面上收集土壤中的各虫态线虫和卵，显微镜下观察计数。每样品重复三次，平均值为样品总虫量个体病情调查-根结指数调查 挖出完整根系，用清水洗净，估算带根结的根占整个

4、根系的百分比。根据根结指数划分病级： 0级：无根结 1级：轻微感染，仅有少量根结，根结百分率小于5% 2级：根结明显，根结百分率小于25 3级：根结百分率2650 4级：根结百分率5175 5级：根结百分率76以上群体病情调查 发病率= 100% 病情指数= 100发病株数调查株数调查总株数根结指数的最高级数该级别株数）（根结指数级数盆栽接种测定烟草对花生根结线虫抗性 1. 供试根结线虫接种源制备花生根结线虫（M. arenaria）采自云南牟定县，经单卵块纯化，通过种类鉴定，在感病的番茄品种Rutgers上扩大繁殖，收获病根，用次氯酸钠处理，获得卵悬浮液，显微镜下计数定量。 2. 待测烟株的

5、接种 各个烟草品种在播种前先用2%福尔马林溶液表面播种土为腐殖土细砂按体积比1:1混匀，湿热灭菌。烟苗长至56片叶时，移栽试验盆中，同时接种根结线虫，盆土为腐殖土 ：沙=1:2的灭菌土。根结线虫按3000卵/盆接种，设重复4盆，同时设不接卵对照，重复4盆，随机排列，接种后常规管理，浇水，施肥，适时喷药，防止其它病虫干扰。3. 病害调查及抗性评价 接种60天后将接种过的植株整株倒出，清水洗净根部。调查每烟株根部发病情况，根据病害症状描述，记载病情级别及单位根重的卵数，计算根结指数。平均根结指数0-1为免疫、1-2为高抗、2-3为中抗、3-4为中感、4-5为高感。4. 数据分析 应用软件SAS进行

6、数据分析，用Duncans方法对数据进行比较。原始数据烟草品种烟草品种根结指数根结指数重复1重复2重复3重复4重复5重复6南卡585535543074453534Coker48545454Coker319555555大黄调把454455变烟243334麻栗坡旱烟455354处理结果 采用Duncans多重比较，不同小写字母的数据代表处理之间差异显著(P0.05)烟草品种烟草品种根结指数根结指数抗性评价抗性评价南卡584.50.7ab高感30744.10.8b高感Coker484.70.5ab高感Coker3195.00a高感大黄调把4.70.5ab高感变烟3.20.6c中感麻栗坡旱烟4.30.

7、7ab高感大田自然发病测定烟草品种抗病性 1.试验地点的选择 选择土质、坡向均一，且有根结线虫病发病历史的田块，种植前彻底翻犁采集田中各区域的土样，分离土壤中的根结线虫二龄幼虫，确定田块中线虫分布均匀程度，并通过分子生物学方法确定土壤中根结线虫的种类及组成。 2. 小区设置 田块内划分出面积相等的18个小区，每个小区内按照标准种植规格起墒，小区间设置宽度为1m的隔离沟，将在无菌土培育的6个品种的烟苗移栽入小区内，每小区种植1个品种，每品种包含3个重复小区，各品种重复小区随机排布。 3. 病情调查与抗性评价 移栽后按常规方法管理，适时统一防治其他地上部病害，90天后进行病情调查，每小区随机选取2

8、0株烟株，尽可能完整挖出根系，清水洗净后调查根结指数，计算各小区的病情指数和发病率。平均病情指数25以下为高抗、25-50为中抗、50-75为中感、75以上为高感。 4. 数据分析 应用软件SAS进行数据分析，用Duncans方法对数据进行比较。药剂杀线虫活性的室内测定 1. 线虫的制备 收集根结线虫卵与滤纸上，移入培养皿中并保持湿润状态，置于25下培养2-3天，用清水冲洗滤纸，冲洗液过500目筛网，筛面上收集根结线虫二龄幼虫，显微镜下计数。 2. 药剂处理 取等量的线虫分别移入含有不同浓度的供试药剂的培养皿中，同时设置清水处理为对照。室温下静止12-48小时，显微镜下观察各处理中线虫的存活状

9、况，计数死虫和活虫的数量。计算各处理的校正死亡率。 校正死亡率=处理组死亡率-对照组死亡率 3. 药剂的致死中浓度的计算 获得的各浓度线虫下线虫的校正死亡率，代入公式y=a+bx，其中y为校正死亡率，x为药剂浓度，a和b为比例系数，求解线性方程 ，获得a和b的数值，获得线虫死亡率与药剂浓度的直线回归方程，计算y=50%时的x值，该数值即为药剂的致死中浓度，药剂的致死中浓度越低则药剂的防治效果越好。例 不同浓度的生物药剂A处理12小时线虫的校正死亡率经计算可以得到药剂浓度与线虫死亡率的回归方程y=43.96+0.066x，计算其致死中浓度为91.24ug/ml 药剂浓度药剂浓度10501050m

10、g/mlmg/ml525525ug/mlug/ml210210ug/mlug/ml105105ug/mlug/ml52.552.5ug/mlug/mlckck校正死亡率10010096.796.786.786.758.758.76.36.33.33.3大田药剂防治烟草根结线虫病试验 1. 试验田的选择 同大田抗病性测定 2. 小区设置 采取完全随机法设置小区，每个小区面积相等，按照设计要求将供试药剂施于各小区土壤中，再移栽入健康无病的烟苗，每种处理至少设置3个以上重复小区，同时设置无药剂处理的空白对照小区。烟草生长期间管理按烟草栽培管理进行，不使用其他的化学药剂。3. 病情调查 烟叶采收完毕后

11、立即进行病情调查，每小区随机挑选20株烟株完整挖出根系，调查根结指数，计数各小区病指数，最后计数出每种药剂的相对防效。相对防效= 100% 4. 数据处理 对试验结果进行方差分析，比较各药剂的防效差异，选出最优药剂。空白对照病情指数-处理区病情指数空白对照病情指数1. 试验目的 根结线虫病是积年流行性土传病害，土壤中的二龄幼虫初始虫量决定了后期发病的严重程度，因此可以研究土壤初试虫量与作物产量的相关性，来达到预测作物虫量损失的目的。2. 试验设计 采用大田微区试验法，选择根结线虫危害的田块，并用化学熏蒸剂消毒土壤，将50cm深，直径50cm的塑料圆筒埋入土中，内部填充消毒土，作为一个相对隔离的

12、微区。3. 微区设置 4. 接种方法 按几何级数设计14级根结线虫接种梯度（0、0.0625、0.125、0.25、0.5、1、2、4、8、16、32、64、128、256卵/ml土），准确称取含有所需虫量的病根段，与消毒土充分混匀作为接种土，填充于塑料圆筒内。移栽入健康烟苗。 5. 微区管理与数据采集 微区试验严格按照烤烟生产规程进行耕作、水肥、病虫害防治和采烤管理，记录各微区的烟株存活时间、烤烟叶重、均价和最终土壤虫量。 6. 数据处理 将所采集数据与Seinhorst线虫病害产量损失模型： y=m+（1m）z(piT) （式中pi为初始虫口密度；T为植物对线虫的的耐性阈值；y为相对产量；m为相对作物重量的最小值；z为比例系数 ）进行拟合 ,计算种群密度与烟草产量损失之间关系。初始虫口密度对烤烟产量影响初始虫口密度对烤烟产量影响 pi（卵/ml土）烤烟产量（g）烤烟相对产量0187.336.65810.0625186.247.0740.990.125189.012.9851.010.25186.430.49