2.1微生物的实验室培养导学案

1、专题二 课题1微生物的实验室培养使用班级 姓名小组【复习目标】1 .了解培养基、消毒、灭菌等基础知识；2 .理解无菌技术的操作。【自主预习】一 口关苴、J口乔 91 .概念：人们按照微生物对营养物质 的不同需求，配制出的供其生长繁殖 的营养基质O2 .种类：按照培养基的物理性质划分(1) 液体.培养基:配制成的 液体一 状态的基质。(2) _体_培养基：在汕 培养基中加入 凝固剂_,如琼脂后，配制成 的 固体状态的基质,是实验室中最常用的培养基之一，微生物在其上面生长，可形成肉眼可见 的邕费 。3 .组成成分：各种培养基的具体配方不同_，但一般都有主、碳源、_M源、无机盐 ，此外培养基还需要满

2、足微生物生长对 PH一 特殊营养物质 以及 氧气的需求。二、无菌技术获得纯净培养物的关键是 防止外来杂菌的入侵。1 .消毒是指使用较为温和 的物理方法或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽抱 和 抱子)。实验室常用的消毒方法有 煮沸消毒法 、 巴氏消毒法 、化学药剂消毒法 。2 .灭菌是指使用 K 的理化因素杀死 物体内外所有 的微生物，包 才舌 芽抱 和抱王_。常用的灭菌方法有灼烧灭菌 、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 。3 .实验操作中避免杂菌的污染，主要包括四方面的内容：(1)对实验操作的空间 、操作者的衣着和手 进行清洁和消毒。(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和

3、 培养基 等进行灭菌。(3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 酒精灯火焰 附近进 行。(4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。4.在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物污染 。使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境。三、分离纯化大肠杆菌本实验使用的培养基为 牛肉膏蛋白陈培养基。进行大肠杆菌的纯化培养，可分为制备培养基和 纯化大肠杆菌两个阶段。1. 制备培养基的一般步骤为： 日”一、称量、_溶化_、_灭菌_、_倒平 板。2. 纯化大肠杆菌：微生物接种最常用的方法是_¥板划线法 口一强释涂布法O(1)平板划线法

4、通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线 的操作，将 聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。(2)稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的 梯度稀释,然后将不同稀释 度的菌液分布涂布 到琼脂固体培养基的表面，进行培养。3. 菌落的概念： 由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。4. 结果分析：(1)如果接种了大肠杆菌的培养基上生长的菌落颜色、形状、大小基本一致，说明 接种符合要求;(2)若培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中有杂菌未消化;(3)未接种大肠杆菌的空白对照的培养基在培养过程中若长出菌落，则说明培养基灭菌不彻底，实验失败。四、菌种保存1 .对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。

5、(1)过程：首先将菌种接种到试管的 固体斜面培养基上,合适温度下培养，菌 落长成后，放于4 C 冰箱中保藏，每隔 36个月，都要将菌种从旧的培养基上转移到新的培养基上。(2)缺点：保存时间 筮,菌种容易被 亘里或产生变异。2 .对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法，将培养的菌液与等体积灭菌后的甘油混匀于 -20 C 的冷藏箱内保存。【知识拓展】1 .消毒与灭菌的区别消毒是一种采用较温和的理化因素,仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病 原菌，而对被消毒的物体基本无害的措施。例如一些常用的对皮肤、水果、饮用水进行药剂 消毒的方法；对啤酒、牛奶、果汁和酱油等进行消毒处理的巴氏消毒法，等

6、等。灭菌是采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能 力的措施。例如各种高温灭菌措施等。2 .微生物的营养类型异养微生物生命活动所需要的能源，主要靠有机物氧化分解释放能量，碳源是异养 微生物的主要能源物质，碳源对异养微生物来说，不仅可为机体提供构成细胞物质，而且为 机体提供完成整个生理活动所需能量些异养微生物也可以光能作为能源，例如红螺菌， 在环境中没有有机物的条件下，它可以利用光能，把环境中的CO合成为自身有机物； 在有有机物存在的条件下，可以利用有机物进行生长，其代谢类型为兼性营养型细菌。自养微生物和异养微生物类型的划分，主要依靠能否以CO2作为牛长的主要或唯一碳源

7、,而不是决定于氮源。例如异养微生物最常用的氮源是无机氮源中的钱盐和硝圈盐。3 .生长因子：某些微生物正常生长 .代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子， 如某些氨基酸、碱基、维生素等。4 .培养基的配制原则：目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮J匕4 ： 1时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为3 ： 1时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。pH要适宜：细菌培养基 pH中性或偏碱性，霉菌培31?呈酸性。【当堂练习】1 .用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时（）可以用相同的培

8、养基 都需要使用接种针进行接种都需要在火焰旁进行接种 都可以用来计数活菌A.B. C .D.2 .下列有关微生物培养与应用的说法正确的是（）A.天然培养基是指直接取自自然界不需加工的培养基B.接种前需对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手等进行严格的灭菌处理C.大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段D.分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源和碳源3 .下列对灭菌和消毒的理解不正确的是（）A.灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽抱和抱子B.消毒和灭菌实质上是完全相同的C.接种环用灼烧法灭菌D.常用灭菌方法有灼烧灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法4 .用来判断

9、选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是（）A.未接种的选择培养基B .未接种的牛肉膏蛋白月东培养基C.接种了的牛肉膏蛋白月东培养基D .接种了的选择培养基5 .下列关于微生物的分离和培养的有关叙述，错误的是（）A.微生物培养前，需对培养基进行消毒B.分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度C.测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法D.分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源6 .三个培养皿中分别加入 10 mL不同的培养基，然后接种相同的大肠杆菌样液。培养36h后，计算菌落数，结果如下表。下列选项正确的是（）培养皿培养基成分落数I琼脂、葡萄糖35n琼脂、葡萄糖、生长因子2

10、50m琼脂、生长因子0A.该实验采用的是液体培养基B.该实验采用平板划线法接种C. I和川对照，说明大肠杆菌的生长不需要生长因子D. n和川对照，说明大肠杆菌的生长需要葡萄糖7 .制备牛肉膏蛋白月东固体培养基的步骤是A.计算、称量、倒平板、溶化、灭菌C.计算、称量、溶化、灭菌、倒平板8 .有关倒平板的操作错误的是A.将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 C.将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上 9.有关平板划线操作正确的是（）B .计算、称量、溶化、倒平板、灭菌D .计算、称量、灭菌、溶化、倒平板）B .使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰D .等待平板冷却凝固后需要倒过来放置）A.使用已灭菌的接种环、

11、培养皿，操作过程中不再灭菌B.打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞C.将沾有菌种的接种环迅速伸人平板内，划三至五条平行线即可D.最后将平板倒置，放人培养箱中培养10 .平板冷却凝后要将平板倒置，其意义是（A利于大肠杆菌的接种B防止杂菌污染 C利于培养的冷却 D防止皿盖冷却水倒流入培笑苴乔911 .下列有关培养基的叙述正确的是（）A .培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B.培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C .固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D.微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌12.有关稀释涂布平板法，叙述错误的是（）A.首先将菌液进

12、行一系列的梯度稀释B .然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面C.再放在适宜条件下培养D .结果都可在培养基表面形成单个的国洛13 .将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37c恒温箱的目的是()A.对比观察培养基有没有被微生物利用B .对比分析培养基是否被杂菌污染C.没必要放人未接种的培养基D .为了下次接种时再使用14关微生物营养物质的叙述中，正确的是B.凡碳源都提供能量D.无机氮源也能提供能量)花生粉饼A.是碳源的物质不可能同时是氮源C.除水以外的无机物只提供无机盐15 .作为自养生物唯一碳源的是(A糖类B石油 C二氧化碳D16 .大肠杆菌的代谢类型是()A自养需氧 B

13、 异氧严格厌氧C异养需氧 D 异养兼性厌氧17 .下列物质中，不能用作酵母菌碳源的是()A含碳有机物B 蛋白陈 C 含碳无机物D 花生粉饼等天然物质18 .下表是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的培养基配方。请回答：试剂牛肉膏蛋白月东NaCl琼脂水用量5 g10 g5g20 g1000mL(1)培养基的类型有很多，但培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。上述培养基配方中能充当碳源的成分是牛肉膏和蛋白脐 。培养基配制完成以后，一般还要调节pH,并对培养基进行灭菌处理。该培养基从物理性质上分类属于固体培养基。(2)分离纯化微生物最常使用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。(3)假设培养结束后，

14、发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是什么(列举两项)稀释倍数不够，菌液的浓度太高；划线时，划完第一次没有灭菌即接着划第二次；培 养过程中灭菌不严格，受到了其他微生物的污染。逸临界基11号培养基1113培养星19 . (2009 上海卷)氯苯化合物是重要的有机 化工原料，因其不易降解，会污染环境。某研究小组 依照下图所示的实验方案，筛选出能高效降解氯苯的 微生物SP1菌。培养基配方如表。表培养基的组成液体蛋牛氯苯氯化硝酸无机-H-*八、培养基白月东肉膏钠俊盐(无碳)储水I号10gg55mg5g一一L1n号一一50mg5g3g适量L1出号一一20-80mg5g3g适量L1(1)配制n号固体培养基

15、时，除添加n号液体;增养基成分外,还应添加1%勺一琼脂O(2)培养基配制时，灭菌与调pH的先后顺序是 先调pH,后灭菌。(3)从用途上来说，I号培养基和n号培养基分别属于 基本(通用)培养基和选择 培养基。在n号培养基中，为SP1菌提供氮源的成分是硝酸镂。(4)在营养缺乏或环境恶劣时，SP1的菌体变成一个圆形的休眠体，这种休眠体被称为芽抱。20 .为了检测饮用水中是否含有某种细菌，配制如下培养基：成分乳糖蔗糖磷酸氢钾伊红丫美蓝蒸储水PH含量5g5g2g1000g(1)该培养基所含的碳源和氮源分别是 (2)该培养基除含碳源、氮源外，还有需要的营养物质有 。(3)该细菌在同化作用上的代谢类型是 。(4)该培养基用来鉴别的细菌是()A霉菌B 大肠杆菌 C 酵母菌 D 乳酸菌21 . 19世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造业曾一度遭受毁灭性的打击。在生产过程中，出现了葡萄酒变酸、变味的怪事。(1)根据你所掌握的知识分析导致生产失败的根源是什么(2)由此得出研究和应用微生物的前提是防止 .22 .在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板 还能用来培养微生物吗为什么23在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线20 .（ 1