《中和抗体测定》PPT课件

1、中和抗体实验中和抗体实验2021-12-15SDEPI :liyan7516163毒分别技术四 中和抗体测定u目的u评价人群中抗脊灰病毒的免疫形状。u评价OPV的有效性和免疫效果。u适用范围u人群脊髓灰质炎中和抗体效价的测定。u免疫胜利率的监测。病毒分别技术四 中和抗体测定u必备资料u待检血清灭活处置u稀释液MMu细胞悬液510104/mlu规范血清WHO CDC/EPIu规范病毒Sabin u 滴度106.0CCID50/mlu必备资料u96孔微量板u微量可调式移液器u无菌吸尖/无菌吸管u无菌1.5ml离心管/试管u封板胶带uCO2孵箱病毒分别技术四 中和抗体测

2、定u待检血清稀释1 41 1024u每份待检血清的稀释在型板的第1排进展。u0.15ml稀释液，参与 0.05ml的血清，吹吸均匀后，将这个稀释度的血清向下一个稀释度移0.05ml，至最高稀释孔吹吸均匀后，弃去0.05ml。u 在微量板上进展，板子标志和稀释详见附录1型板型板 血清血清1血清血清2血清血清3血清血清4血清对照血清对照1414 血清稀释血清稀释1414 116116 164164 12561256 1102411024 血清对照血清对照1414 血清稀释血清稀释1414 116116 164164 12561256 1102411024 血清血清5血清血清6血清血清7血清血清8病

3、毒分别技术四 中和抗体测定稀释度稀释度 1 1：4 14 1：16 116 1：64 164 1：256 1256 1：10241024稀释液稀释液 0.15 0.15 0.15 0.15 0.150.15 0.15 0.15 0.15 0.15 血血 清清 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 废废0.050.05 移入它孔移入它孔 （每孔（每孔5 5） 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 n待检血清稀释方法例如：病毒分别技术四 中和抗体测定u待检血清稀释u用排枪向第2排

4、孔及、型板的相应稀释度的两排孔中，每孔移入0.025ml，原稀释孔保管0.025ml。u规范血清稀释根据血清效价而定ustandard serum: 18000ustandard serum : 12000ustandard serum : 12000病毒分别技术四 中和抗体测定u规范毒株稀释200CCID50/0.025mlu 病毒滴定及攻击病毒含量的计算与稀释见附录2、3u中和实验时所用抗原量过大或过小都会影响血清抗体滴度。每次实验应设病毒对照，核对所用病毒剂量，普通应在32320CCID50/0.025ml的用量时其结果才被认可。u 病毒滴定对照见附录4病毒分别技术四 中和抗体测定u中和

5、作用，u向血清板上参与已稀释好的规范毒株悬液0.025ml 200CCID50 。u 留意型别的区分和对应u轻摇混匀后，放入CO2孵箱，培育24小时u参与事先预备好的细胞悬液0.1ml/孔uHep-2 : 510104/mlu再次摇匀，密封好放在36.5培育57天。病毒分别技术四 中和抗体测定u对照的设立u血清对照 14，规范血清和待检血清同时设立u细胞对照、稀释液对照u100CCID50的抗原对照u每个对照设两孔，血清、抗原的量各为0.025ml/孔，补加稀释液0.025ml/孔，细胞对照孔的稀释液应为0.05ml，然后全部加细胞悬液0.1ml/孔，密封后放34.5培育57天。病毒分别技术四

6、 中和抗体测定u结果断定u当100CCID50的抗原对照出现完全病变时，断定最终结果 u当最高稀释度的血清病毒混合液接种的2孔细胞中有1孔不出现CPE，该稀释度的倒数即为该血清标本的中和抗体滴度。 型板型板 血清血清1血清血清2血清血清3血清血清4血清对照血清对照1414 血清稀释血清稀释1414 116116 164164 12561256 1102411024 血清对照血清对照1414 血清稀释血清稀释1414 116116 164164 12561256 1102411024 血清血清5血清血清6血清血清7血清血清8病毒分别技术四 中和抗体测定CCID50100Sabine1010.11

7、00Sabine1010.1100Sabine1010.1病毒滴定结果判别表示图1001病毒分别技术四 中和抗体测定uSpearsmanKarber公式：uLogCCID50=Xm1/2ddPi/100u Xm=所用病毒最低稀释度最高浓度的对数u d=稀释度系数倍数的对数。u Pi=各稀释度出现CPE百分数的总和。病毒分别技术四 中和抗体测定u病毒滴定结果的断定uSabine：u LogCCID50=0+0.5-1100+100+100+25/100=-2.75uSabine：u LogCCID50=0+0.5-1100+75+25/100=-1.50uSabine：u LogCCID50=0+0.5-1100+100+50/100=-2.00病毒分别技术四 中和抗体测定u病毒滴定对照结果的判别uSabine：取2.75的反对数，即得到攻击病毒的含量：562CCID50/0.025ml。uSabine：取1.50的反对数，即得到攻击病毒的含量：31.6CCID50/0.025ml。uSabine：取2.00的反对数，即得到攻击病毒的含量：100CCID50/0.025ml。病毒分别技术四 中和抗体测定u简单的断定能否有效的方法：u32320 CCID50/0.025ml 的对数：u 1.5052