表面擦拭微生物限度检查法回收率实验方案

1、湖北天圣康迪制药 GMP文件文件名称外表擦拭微生物限度检查法回收率实验方案文件编码：共4页制定人审核人批准人制定日期年 月曰审核日期年 月曰批准日期年 月曰颁发部门质管部颁发数量2份生效日期年 月曰分发部门及数量质管部、QC各 1份外表擦拭微生物限度检查法回收率实验方案1.目的对外表擦拭微生物限度检查法回收率进行验证，确认所采用的方法适合于供试品的微 生物限度检查。2范围本方案适用于外表擦拭微生物限度检查法回收率的验证。3. 职责质管部负责验证方案起草、组织实施、起草验证报告及送审4. 验证过程4.1验证用菌种：所用菌种表1菌种名称编号来源大肠埃希菌【CMC(B) 44103 】金黄色葡萄球菌

2、【CMC( B) 26003 】白色念珠菌【CMC(F) 98001 】枯草芽孢杆菌【CMC(B) 63501 】菌株选择的原那么：代表性，普遍性，低或非致病性，标准菌株菌种的要求：不得超过5代。采用适宜的方法保存。4.1.4 加菌量：50100cfu。4.2菌液的制备湖北天圣康迪制药取经37C培养18-24小时，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌肉汤培养 物1ml加9ml生理盐水10倍稀释至10-510-7，为50100个/ml，做活菌计数备用。取经25C培养18-24小时的白色念珠菌霉菌液体培养物 1ml加9ml生理盐水10倍 稀释至10-510-6，为50100个/ml，做活菌计数

3、备用。4.3回收率的测定：将经灭菌的开孔面积为20cm的金属模板放在试验物体外表，分别向无菌物体表 面接种1ml金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌和枯草芽抱杆菌的菌悬液，接种面 积为20cm，并在层流下进行枯燥。验证结束后用75%勺酒精擦洗染菌外表。取无菌棉签用0.9%无菌氯化钠溶液稍沾湿,在板孔范围内擦抹5次，换1无菌棉签 同法再擦抹5次，2支棉签共擦抹10次，然后剪去手接触局部棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内。摇匀取 1mL倒平板，每次倒三个平板。分别培养计数。用同样的方法重复操作三次。试验要进行三次独立操作，每次试验的回收率要?70%方可认为该方法适宜。4.4回收率计

4、算试验结果下表，棉签擦拭法的结果是每次试验三个平板的平均菌落数再乘以稀释倍数(10)。金黄色葡萄球菌试验结果金黄色葡萄球菌试验结果表2实验次数1号平皿2号平皿3号平皿平均菌落数检测结果123根据表中的数据，回收率计算如下表 3:实验次数菌液组菌落数实验组菌落数回收率(%平均回收(%范围123符合要求不符合要求检查人 日期 复核人 日 期 442大肠埃希菌试验结果大肠埃希菌试验结果表4实验次数1号平皿2号平皿3号平皿平均菌落数检测结果123根据表中的数据，回收率计算如下表 5：实验次数理论菌总数检测结果回收率%平均回收%范围123符合要求不符合要求检杳人日期复核人日期白色念珠菌试验结果白色念珠菌试验结果表6实验次数1号平皿2号平皿3号平皿平均菌落数检测结果123根据表中的数据，回收率计算如下表 7：符合要求湖北天圣康迪制药不符合要求实验次数理论菌总数检测结果回收率%平均回收%范围123检查人 日期 复核人 日 期 444枯草芽抱杆菌试验结果枯草芽抱杆菌试验结果表8实验次数1号平皿2号平皿3号平皿平均菌落数检测结果123根据表中的数据，回收率计算如下表 9:实验次数理论菌总数检测结果回收率%平均回收%范围123符合要求不符合要求日期 日期 日期 日期 日期： 年 月 日检查人 复核人 4.5方法确认结论符合要求不符