几种类型的分光光度计

1、2.3 分光光度法2.3.1 分光光度法概述1.1.目视比色法目视比色法 以比较溶液颜色深浅，从而确定被测定组分含量的方法，称为目视比色法。 目视比色法的准确度和精密度受视力条件影响很大，一般相对误差约在520的范围。常用的目视比色法（常用的目视比色法（1 1） 最常用的目视比色法是标准系列法。 取一套比色管，于各管中分别加入一系列不同体积的标准溶液，在测定条件下进行显色定容。此时一系列标准溶液的管中显出由浅到深的色阶。 被测溶液在同一条件下显色。 将被测溶液管与标准系列进行比较(从管口垂直向下观察)，若与其中某一管颜色相同可认为被测溶液浓度与此管浓度相等，若被测溶液颜色介于两标准颜色之间，可

2、认为被测溶液浓度等于两管浓度的平均值。常用的目视比色法（常用的目视比色法（2 2） 这种方法设备和操作简单，液层厚，对于很稀的溶液亦可以辨色，故灵敏度高,可在白光下进行，不符合比尔定律的试液亦可以进行测定。 但由于经显色反应后溶液往往不稳定.标准色阶须临时配制，故有时采用稳定的有色物质如K2CrO7(橙色)、CuSO4(蓝色)、CoSO4(粉红色)等配制标准色阶。2.2.分光光度法分光光度法 光度可用光电比色计或分光光度计进行测量。 测定时常用的是校正曲线法或比较法。 （1）校正曲线法 校正曲线法，又称工作曲线或标准曲线法。 当溶液厚度b固定时，吸光度A与溶液浓度c成正比.取一系列不同浓度标准

3、溶液（57图），分别测定其吸光度，以浓度c为横坐标，吸光度为纵坐标，作校正曲线.试液用同样条件显色，测定吸光度，从曲线上求得试液浓度。（2）比较法 比较法又称单对照法。 根据两个液层厚度相同而浓度不同的同一种有色溶液，它们的浓度与吸光度成正比： A标=K1c标 A试=K2c试 由于有色溶液性质一致，入射光波长也一致，因此K1=K2,故有：A标 /A试 =c标 /c试 故： c试 A试c标/A标 采用比较法时，c标与c试必须相近，结果才可靠。光度法的优点 与目视比色法相比，光度法的优点： 1. 用光电仪器进行测量可消除轻度色盲、眼睛疲劳等主观误差。2. 有其他物质共存时，可选适当的入射光和参比溶

4、液来消除干扰，提高选择性。3. 对于大批试样分析，校正曲线可简化手续，提高分析速度。2.3.2.测量条件的选择(1)（1）选择合适的入射光 由于溶液对光的吸收是有选择性的，因此必须选择溶液吸收最大的波长作为入射光的波长。 （2）控制适当的吸光度范围 用光度计测量吸光度，都存在着误差。当测量小于0.2和大于0.7吸光度时，误差会迅速增加。为了使测量误差落在0.20.7之间，可以控制试样的称取量。对于组分含量高的试样，可减少称取量，或是稀释;对于含量低的溶液可增加称样量或浓缩的方法来提高浓度。2.3.2.测量条件的选择（2）（3）选择适当的参比溶液 参比溶液的作用在于用它来抵消比色皿及试剂对入射光

5、的反射和吸收，也可以抵消一些有色干扰离子的影响。2.3.2.测量条件的选择（3） 参比溶液的选择方法：1、如果试液、显色剂及其他试剂都无色，可选用蒸馏水作为 参比溶液；2、若显色剂无色而试液中存在有色干扰物，可用不加显色剂的被测溶液作参比溶液；3、若试液无色而显色剂和其他试剂有色，则可用试剂空白作参比溶液。2.3.3分光光度计的结构 分光光度计种类和型号繁多，但其基本结构和原理相似，主要由下列4个部分组成：（1）光源（2）单色器（3）吸收池（4）检测器和读数装置光源 可见光分光光度法使用的光源常为612V的钨丝灯，它可以发出波长约为320nm2500nm的连续光谱. 若紫外光谱法，则采用氘灯，

6、它能够产生 200320nm的连续光谱。单色器（1） 单色器的作用是获得单色光。1、滤光片常用的滤光片是由有色玻璃（或其他材料）构成，使通过的光与滤光片的颜色相同。为了表示滤光片的质量，可制作透光率波长曲线（即透光曲线），以峰高的一半与曲线相交波长范围（光谱半宽度）来表示单色光的质量。半宽度愈窄，单色光愈纯。选择滤光片，必须使能被溶液吸收最大的光通过，也就是滤光片颜色是溶液的补色。 单色器（2）2. 棱镜 分光光度计常用棱镜作为单色器。棱镜获得单色光的纯度与棱镜色散率和出口狭缝宽度有关。可见光区用玻璃棱镜（对可见光有较大色散率），紫外区则用石英棱镜（玻璃吸收紫外光）。3. 光栅，是在镀铝的光学

7、玻璃上刻了许多相距很小、等距又相平行，并具有反射面的沟槽构成的一种单色器。检测器和读数装置 （一） 检测器和读数装置都是光电转换元件，目的是把透过光信号转换成电流信号，并加以测量。1、硒光电池 是一种光敏半导体元件，经常使用的是硒光电池。硒光电池适用于波长范围380750nm的光，在540580nm处灵敏度最高。它产生的光电流较大，可毋须放大，直接用灵敏电流计测量。 光电池使用时间过长或受强光照射时会导致灵敏度下降，称为“疲劳现象”，故使用时须注意不可令光源未经单色器调节便直接照射光电池，出现疲劳现象时可放置暗处使其恢复。检测器和读数装置 （2）2. 光电管. 是一个二极真空管由一个阳极和一个光敏阴极组成。3. 光电倍增管。 是利用光敏阴极把光信号放大的装置。 4. 读数装置。 读数装置常用的是微安计或检流计。几种类型的分光光度计（一）几种类型的分光光度计（一）图27 721分光光度计 几种类型的分光光度计（二）几种类型的分光光度计（