制备高效液相色谱在天然产物分离中的应用

1、综述制备高效液相色谱在天然产物分离中的应用杨振寰, 刘霞3(中国科学院兰州化学物理研究所甘肃省天然药物重点实验室, 甘肃兰州730000收稿日期:2004209212基金项目:中国科学院专攻方向性项目“两部特色民族药资源标准的研究(No . KGCX22213208作者简介:杨振寰(1976 , 女, 山东省烟台市人, 硕士研究生, 研究方向:高效液相色谱对天然药物制备分离的研究。通讯作者:刘霞(1958 , 女, 研究员, 博士生导师, 电话:093124968203。关键词:制备高效液相色谱(PHP LC ; 天然产物; 分离纯化中图分类号:R284. 1文献标识码:B 文章编号:1001

2、21528(2005 12214442051前言色谱法是1906年俄国植物学家M ichael Ts wett 将含有有色的植物叶子色素和溶液通过装填有白垩粒子吸附剂的柱子, 企图分离它们时而发现并命名的。而首次真正意义上的制备型液相色谱分离是20世纪30年代对植物代谢产物色素(如叶绿素及胡萝卜素等 的分离1。20世纪70年代初, 高效液相色谱(HP LC 问世。此后的30年, 由于HP LC 具有高的分辨率及分离纯化鉴定一次性完成的特点,使其在许多学科的研究领域得到广泛的应用。但是由于传统的分析型HP LC 分离的样品量少, 限制。型HP LC (PHP LC , , 并最终实现了工业化天然

3、产物中包含的成分复杂, 有的达到几十种甚至上百种, 因此对其中化学成分的分离纯化一直是一项十分艰巨的工作。由于传统的方法不仅步骤繁琐和有机溶剂等方面消耗大, 而且最终的产率及纯度不高, 所以需要采用一种新型的分离纯化方法, PHP LC 正好可以解决这些问题。因此几十年来, PHP LC 在天然产物的分离中得到了广泛的应用。本文就20世纪90年代以后有关PHP LC 在天然产物分离方面的应用做一综述。2应用2. 1PHP LC 分离纯化糖类及其衍生物糖类是植物光合作用的初生产物, 是一类最丰富的天然产物, 糖类在植物中的分布十分广泛, 常占植物干重的8090。糖类又可根据其碳链的长度分为单糖、

4、低聚糖和多糖。糖类的衍生物也十分复杂, 如氨基糖、去氧糖、糖醛酸、糖醇、环醇类、糖的磷酸酯及一些苷类还有糊精等。2. 1. 1PHP LC 对糖类混合物的分离在糖类的提取方面, P . Abreu 等2用制备色谱纯化了来自植物Sarcocephalus latifolius 中的糖类物质。他们首先将提出的糖混合物甲酰化后, 用正相PHP LC 以己烷2乙酸乙酯为流动相进行梯度(9010到1090 洗脱, 进样量为250mg, 将其分离为11个组分, 每一个组分再用PHP LC 或制备薄层色谱等进一步纯化后, 发现上一步所得的11个组分, 有的为纯品有的为混合物, 经过二次纯化后最终均得到了纯品

5、。将这些纯品用配有示差折光检测器的HP LC 定量, 用核磁(NMR 确定化合物的结构。M ary F . Evangelist o 等3对Parr Bomb 合成反应生成的糖类混合物进行了分离纯化, , 然后将分离出的物质PHP , NMR 鉴定结构。结果纯化出了12garafluor o 222Cd A (99. 7 和3g a 2头异构体(a 2anomer (99. 2。反相PHP LC 所用的色谱条件为:C 18色谱柱(500mm 50mm i . d . , 填料用量为500g, 流速为50mL /min, 流动相为乙腈2水(1090v /v , 梯度洗脱至(5050v /v ,

6、检测波长为254n m 。Guile G . R. 等4研究了阴离子低聚糖的分离制备, 他们采用的是弱阴离子交换HP LC, 所用的缓冲溶液为甲酸铵, 因为甲酸铵是易挥发的组分, 可以使最后的分离纯化变得简单易行。色谱柱为隋性的聚合物柱, 这种聚合物柱比硅胶柱有更宽的pH 使用范围, 在pH 值为5. 59. 0时, 阴离子糖都可以得到极好的分离。这个方法可以用作对包含硫酸、磷酸、唾液酸(sialic acid 和质子酸等结构的分离。2. 1. 2PHP LC 对苷类的分离PHP LC 在苷类的提取方面也得到了广泛的应用, 如Q ingguo Tian 等5对柑橘(C itrus tanger

7、ina 皮中的葡萄糖苷(glucosides 进行了制备纯化和定性。实验的目的是找到一种快速可靠的方法从柑橘皮中在线分析葡萄糖苷的存在和分布情况。他们首先将柑橘皮用己烷除去油分, 再用丙酮及70的甲醇2水溶液将其中的葡萄糖苷提取后, 将其通过离子交换色谱柱XAD 柱、WA 柱及XAD 柱洗脱下其中的葡萄糖苷, 得到的干物质溶于20mL 水中用于HP LC 2DAD 和ESI 2MS 分析。PHP LC 的色谱条件为色谱柱(250mm 20mm, 10m , 流动相为乙腈2水为2575(含0. 05的TF A , 进样44412005年12月第27卷第12期中成药Chinese Traditi

8、onal PatentM edicine Dece mber 2005Vol . 27No . 12量为200L, 流速为6mL /min, 检测时间为60m in, 检测波长为210n m 。用HP LC /MS 进行结构鉴定, 为了确认结构的正确性, 又对PHP LC 制备出的纯化合物进行NMR 验证。雷厉等6利用反相PHP LC 结合溶剂萃取、大孔吸附树脂柱色谱和葡聚糖凝胶LH20柱色谱方法, 从管花肉苁蓉的乙醇提取物中纯化制备了苯乙醇苷类化合物松果菊苷的标准品, 纯度达到98以上。方法操作简便, 重现性好, 可用于松果菊苷及其他苯乙醇苷类化合物的大量制备。丁朝武8用化学和PHP LC

9、方法分离制备了红景天属植物提取物中苷及苷元的标准物, 标准品纯度分别由12和1提高到99和97以上。他们首先用大花红景天粉末的水提取液用乙酸铅除去其中的黄酮类物质, 用活性炭吸附法除去糖类等杂质, 最后用PHP LC 分离纯化所需的红景天苷及苷元的标准品, 所用的色谱条件为色谱柱:C 18柱(250mm 20mm i . d . , 流动相为甲醇2水(7525v /v ; 流速:15mL /min; 波长:254n m; 进样量:2mL 。Cat o Fr oytl og 等8就黑醋栗(blackcurrant 中的花青苷(anthocyanins 进行了分离研究, 实验中首先将甲醇提取物浓缩

10、后萃取, 到硅胶色谱柱, 将收集的组分通过LC 离制备, 所得到的纯品用UV 核磁确定结构式, 在分辨率方面T oyopearl HW 240F 填料明显优于Sephadex LH 220, 而最引人注目的是Toyo 2pearl HW 240F 填料随着流速度增加分辨率增加。M aurizi o Fi orini 等9也用PHP LC 制备了草莓(stra wber 2ry 、接骨木果(elderberry 、茄子(eggp lant 、小萝卜(radish 及enocyanin 等中的花青苷(anthocyanins , 并与标准品做参照, 对每一种植物中的花青苷的制备过程都做了优化。他们

11、还用UV /Vis 对所有纯化了的花青苷进行定性, 并用M S 和NMR 测定了酰化的花青苷的结构。每种植物都经过一定的预处理步骤后, 加载到离子交换树脂的色谱柱洗脱, 再用于PHP LC 的分离。所用色谱条件为C 18柱, 流速为3mL /min,流动相为含5蚁酸(20时pH 值为2. 2 和甲醇按照分离的需要设成不同的比例等度或梯度洗脱, 不同植物的进样量为518mg 不等, 紫外检测波长为500530n m, 最后将制备出的物质用MS 和NMR 鉴定结构。J. 2P .Goiffon 等10在分析越桔(bilberry 、黑醋栗(blackcurrant 、草莓(stra wberry

12、、黑莓(blackberry 、黑樱桃(black cherry 、欧洲酸樱桃(morell o 、悬钩子(ras pberry 及接骨木(elderberry 等的红色果实中的花青苷(anthocyanins 时也用到了半制备HP LC, 并在实验中研究了影响HP LC 保留时间的不同参数, 尤其对于配糖基(aglycone 和糖(sug 2ars 可以分离和定量。并研究了流动相组成的影响及解决了共洗脱问题。2. 1. 3其它糖类的衍生物的分离制备不同的烟草(t obacco 属和栽培植物及西红柿(t omat o 植物的根由于灌木菌根(mycorrhizal r oots 中的真菌的集群作

13、用导致了几种糖基化C13环己烯酮衍生物(glycosylatedC13cycl ohexenone derivatives 的生成, 在这篇文章中W alter Maier 等11用HP LC 分析比较了植物的菌根和非菌根, 并用PHP LC 对其中的八种C13衍生物进行了制备分离。他们将菌根用80的乙醇溶液提取离心取上清液用于HP LC 的分析。在PHP LC 的过程中, 先将根用乙醇水溶液提取, 悬浮物离心烘干溶于水后, 离心取上清液用于PHP LC 。色谱条件为:C 18色谱柱(250mm 40mm i . d . 10m , 流速11m l/m in, 流动相为0. 4的甲酸水溶液(A

14、 , 甲醇(B , 梯度为前10m in 从30B 到50B, 紧跟着是50B 的等度洗脱。最终将PHP LC 分离的几种衍生物用M S 和NMR 鉴定为62(92羟丁基 21, 1, 52三甲基242环己烯232酮的单、双或三葡萄糖苷(mono 2, di 2and triglucosides of 62(92hydr oxybutyl 21, 1, 52tri m ethyl 242cycl ohexen 232one 和62(92羟丁基 21, 52二甲基242环己烯232酮212羧酸的单葡萄糖苷(monoglucosides of 62(92hydr oxybutyl 21,52di

15、m ethyl 242cycl ohexen 232one 212carboxylicacid 和6(2羟丁基 21, 142环己烯232酮252羧酸(622m cycl ohexen 232one 252car 2 , 香(marins scopoletin 和它的葡萄糖苷的积。Naoki Noda 等12分离和纯化了来自海洋环节动物N eanthes diversicolor 中的5种糖鞘脂(glycos phingoli p id 。最终的单一化合物用制备薄层、反相PHP LC 等制备出来, 并用MS 及NMR 测定了它们的结构式。最后指出它们是半乳糖部分(galact ose moie

16、ty 中携带磷酸胆碱(phos phocholinegr oup 的单半乳糖神经酰胺(monogalact osyl cera m ides , 其中之一包含有奇数的脂肪酸。Tom s Rezanka 等13用PHP LC 对小球藻(alga Chl orellakessleri 中包含三至五糖苷酰基鞘氨醇(tri 2t o pentaglycosyl 2cera m ides 的6个部分进行了制备分离, 然后用反相HP LC将每个糖苷酰基鞘氨醇(glycosylcera m ide 部分进一步分为12个部分, 并用气相色谱(GC 和M S 进行鉴定。最终确定了400多种糖苷酰基鞘氨醇(gly

17、cosylcera m ides 分子结构式。E . Andria mboavonjy 等14用PHP LC 对糊精(dextrins 进行了制备, 其中所用的流动相为水, 色谱柱为C 18柱, 他们是通过把2环糊精(2cycl odextrin 转化为葡萄糖苷(gluco 2sides 得到糊精。由于所用的流动相很简单, 糊精的回收率稳定。2. 2PHP LC 对黄酮类物质的分离纯化黄酮类化合物广泛存在于自然界中, 是一类重要的天然有机化合物, 其不同的颜色为天然色素家族添加了更多的色彩, 黄酮类化合物主要包括黄酮、黄酮醇类、黄酮苷类等等。Christian W. Huck 等15将报春属(

18、Pri m ula veris 的花用甲醇粗提, 再用氧化铝正相固相萃取法得到粗总黄酮(G12G6 , 然后将总黄酮的混合物依次通过正相中压色谱、制备正相薄层色谱及反相PHP LC 对其进行分离制备, 其中正相中压色谱除去总黄酮中的大部分杂质, 并将其粗分为G1、G254412005年12月第27卷第12期中成药Chinese Traditi onal PatentM edicine Dece mber 2005Vol . 27No . 12G3、G4、G5、G6, 用制备正相薄层将其每种组分进一步净化, 并将G2G3分开, 再用PHP LC 将其中的6种黄酮完全分离制备出来。并且在制备分离之

19、前他们还将黄酮的粗提物分别用正相和反相以紫外和荧光检测器检测, 对其中的5种黄酮进行确定, 从中发现用反相HP LC 作为纯物质的分析手段更为可取。当最终得到6种纯净的产物之后, 他们又用质谱对G3、G4进行鉴定。为了工业上可以正确的鉴定这6种黄酮, 又在实验中采用了HP LC 2M S, 成功的对6种黄酮做出鉴别。研究证明在盐渍的橄榄核果(olive drupes 中的酚类和类黄酮类化合物(phenolic and avonoid compounds 具有抗氧化性和抗癌活性, R. W. Owen 等16将橄榄皮用索氏提取器除去脂肪类物质, 再用甲醇提取及甲醇的水溶液进一步处理后溶于乙腈中,

20、 用己烷提取除去脂类物质, 乙腈溶液干燥后的剩余物溶于甲醇中, 然后用于半制备HP LC 的制备分离。最终对物质定性时, 用的是UV 、M S 及NMR 。其中用半制备HP LC 制备酚类化合物时, 色谱柱为C 18反相柱(250mm 10mm i . d . , 流动相A 为2的醋酸水溶液, 流动相B 为甲醇,梯度洗脱, 检测器为278n m 和340n m UV 双波长检测器, 2. 3PHP LC PHP LC , 如M. Isabel M inguez 2Mosquera 等17理得到了脱镁叶绿素a 和b (pheophytins a and b 的氧化产物, 并通过正相薄层和半制备H

21、P LC 进行分离, 并用UV 2V is和M S 鉴定为31, 322二脱氢21512羟基21512羟基2玫红二氢卟酚2152乙酸(31, 322D idehydr o 21512hydr oxy 21512hydr oxy 2rhodo 2chl orin 2152acetic acid 2内酯21522甲基2172phytyl 酯(a 和b (2lact one 21522methyl 2172phytyl ester (a and b 和31, 322二脱氢2玫红二氢卟酚2152二羟乙酸21732叶绿基酯(a 和b (31,322D idehydr o 2rhodochl orin 2

22、152glyoxylic acid 21732phytyl ester (a和b 。化合物与二价铜络合后, 用反相离子对HP LC 进行分离, 并报告了铜络合物的正相薄层和反相离子对HP LC 的色谱特征, 用二极管阵列检测器在线给出了其相关的UV 2V is 光谱。其中半制备HP LC 的色谱条件为:C 18色谱柱(250mm 10mm i . d . , 流速为7. 5mL /min, 流动相为:(A 水2离子对试剂2甲醇(118v /v 和(B 丙酮2甲醇(11v /v , 离子对试剂为0. 05mol/L四丁基醋酸铵和1mol/L醋酸铵的水溶液, 进行梯度洗脱。H. I noue 等1

23、8通过反相HP LC 测定叶绿酸铜(II (Cop 2per (II chl or ophyllin , 叶绿酸铜(II 包括脱镁叶绿酸铜(II a (copper (II pheophorbide a , 氯化铜(II e 6(copper (II chl orin e 6 , 香茅酸铜(II g 7(copper (II rhodin g 7 及氯化铜(II e 4(copper (II chl orin e 4 时也用到了PHP LC, 他们先用半制备HP LC 对其进行了分离制备, 而后叶绿酸铜(II 的组成用反相HP LC 进行了测定。最终说明了用反相HP LC 对叶绿酸铜钠(s o

24、diu m copper (II chl or ophyllin 进行检测是可行的。H idenari I noue 等19用半制备HP LC 分离了叶绿素Zn(II a and b (zinc (II chl or ophyll a and b , 其中色谱柱为C 18柱, 流动相为甲醇2丙酮(7525V /V , 检测波长为425n m 。R. Rauscher 等20为了研究类胡萝卜素(car otenoids 的抗诱变性, 他们对杏(ap ricots 、胡萝卜(carr ots 、西红柿(t oma 2t oes 、桔子(oranges 、布鲁塞尔苗芽(brussels s p r

25、outs 、黄2红胡椒(yell ow 2red peppers 等的水不溶物的己烷提取物用半制备HP LC 做了分离制备, 从中分离出所需要的类胡萝卜素等物质, 所用的色谱柱均为C 18反相柱, 流动相为乙腈2甲醇2氯仿(47476, v/v/v , 流速为6. 3m l/min, 进样体积为1000L 。结果表明, 己烷提取物中的抗诱变活性主要来自于类胡萝卜素(car otenoids , 蕃茄红素(lycopene , 叶黄素(xanthophylls 和叶黄素酯(car otenolesters 。2. 4PHP LC 对酸性物质的分离纯化Jung Il Ki m 等21也研究了色谱柱

26、填料粒度大小对韩国绿茶(Korean green tea 儿茶酸(catechin 中的EGCG (ep igal 2l ocatechin 实验中用C 18色谱柱(mm i . 15, 40263, and 150. 12乙腈2甲醇2乙酸乙, 400L, 流速随着粒径的增加提, 结果表明随着填料粒径的增加, 虽然分离度和柱效变差, 但是对于EGCG 的分离并没有太大的影响, 只有在粒径为150m 的填料上的洗脱使EGCG 和EC (ep icatechin 一同洗脱下来, 不过, 由于EGCG 和EC 都有很强的抗氧化性和抗癌性, 因此粒径为150m 填料的制备色谱可以用来生产抗氧化和抗癌作

27、用的EGCG 和EC 的混合物。Prabha Painuly 等22用HP LC 和结晶作用对芥子酸(erucic acid 纯化, 芥子酸(C22:1脂肪酸 对于治疗脑白质肾上腺营养不良症(ALD 是有用的。它是通过降低血液中的长链脂肪酸(VLCF A s 起作用的, 而长链脂肪酸能摧毁神经髓鞘质的外皮因此对身体有害。利用反相HP LC 纯化芥子酸, 所用的色谱柱为C 18柱(1020m, 120! , 流动相为乙醇2水, 芥子酸的回收率为69, 用GC 检测其纯度超过97, 实验中发现饱合脂肪酸VLCF A s 的量处于治疗ALD 的限度之内, 但产率很低。而如果用甲醇2水代替乙醇2水做流

28、动相, 虽然芥子酸的回收率为65, 稍有降低, 但是产率提高了9倍, 而纯度为98, 也有一定的提高。在PHP LC 以后, 在低温下进行结晶, 产率进一步提高142, 这样比用乙醇2水做流动相提高22倍, 结晶的芥子酸纯度达到99。2. 5PHP LC 提取分离生物碱生物碱是自然界中广泛存在的一大类碱性含氮化合物, 是许多中草药的重要有效成分。它们在中性或酸性条件下以正离子形式存在, 通常人们用阳离子交换树脂从其提取液中富集分离生物碱。但是由于植物中所含的生物碱成分复杂, 采用传统的方法很难从总生物碱中通过一步法分离纯化其中组分, 而用PHP LC 可以达到纯化分离的目的。例如Jean 2P

29、ierre Rey23等从虞美人(Papaver rhoeas L. 花瓣的总生物碱中用硅胶色谱柱初步分离总丽春花宁(rhoeagenine 64412005年12月第27卷第12期中成药Chinese Traditi onal PatentM edicineDece mber 2005Vol . 27No . 12和总异丽春花宁(is orhoeadine , 再用PHP LC 进一步分离, 所用的色谱柱为L i Chr os orb Si 60柱, 流动相为包含05(v /v 甲醇的氯仿溶液, 先用等度接着用线性梯度洗脱。用分析型HP LC 定性异丽春花宁和丽春花宁。在总碱中得到3种不同的

30、异丽春花宁分别为71. 1, 42. 4, 0. 5mg/g;而3种丽春花宁为(rhoeagenine 是29. 7, 424. 2, 117. 3mg/g。2. 6PHP LC 对萜类物质的分离纯化由于真菌polaris sorokiniana 在植物上形成的最多且活性最大的植物毒素为前长蠕孢(菌 醇p rehel m inthos por ol(C 15H 22O 2 , 它是一种疏水性的热不稳定的倍半萜, H. Carl 2s on 等24从无性孢子(conidia , 菌丝(hyphae 及周围环境中用硅胶“flash ”色谱及PHP LC 检测并制备了前长蠕孢(菌 醇p rehel

31、m inthos por ol 。纯度控制用正相和反相HP LC 及R I 检测器检测。并用PHP LC 2MS 得到了在m /z219处的5ng 毒素。2. 7PHP LC 对其它物质的分离纯化PHP LC 除了以上的应用以外, 它也在其它天然产物方面得到了广泛的应用, 如单宁质磷脂等。Duk Hui Kang 等25(2002 在用PHP LC (s oybean phos pholi p ids 的过程中, Nova 2Pak 色谱柱(3. i . . , 4谱柱的差异, 15, 5220, 25240, 和40263m Nova 2Pak 色谱柱能将大豆磷脂中的P I (phos ph

32、atidylinosit ol , PE (phos phati 2dylethanolam ine 和PC (phos phatidylcholine 很好的分离, 而自制的色谱柱用更小的粒度为15m 并且均匀的色谱填料有利于对磷脂中的P I, PE 和PC 的分离。在实验中所用的流动相为己烷2异丙醇2甲醇, 并采用了一定的梯度, 流速为1. 5mL /min, 洗脱时间为25m in, 紫外检测波长为208n m 和210n m 的双波长检测, 进样量为10L 。Yong An Jung 等26研究了从韩国桔皮(Korean orangepeel 中提取和纯化紫苏基醇(perillyl a

33、lcohol 的工艺, 他们首先在2060将桔皮用溶剂搅拌3h 提取, 再浓缩, 将浓缩物用水2氯仿萃取, 将水相浓缩物加载到柱色谱, 并分段用GC 分析, 后又用PHP LC 制备其中的醇, 其中PHP LC 所用的色谱条件为:C 18柱(300mm 3. 9mm i . d . 15m , 流动相为水2甲醇2乙腈, 进样量为100L, 流速为0. 5mL /min 。在这篇文章中他们对各步的优化都做了较详细的描述。Tai 2Sun Shin 等27从大豆油(s oybean oil 和小麦胚芽(wheat ger m 的混合物中分离了四种生育酚(t ocopher ols ,从小麦麸皮(w

34、heat bran 和橡胶胶乳(rubber latex 中分离出四种三烯生育酚(t ocotrienols , 并做了定量测定, 他们在分离制备的时候用的是半制备HP LC, 色谱柱为硅胶柱(250mm 10mm i . d . 10m , 流动相为含2215四氢呋喃的己烷, 纯化产物用M S 来鉴定, 浓度通过吸收系数确定, 回收率从54283, 用GC 和HP LC 检测纯度达到99以上。S . Gi ovanni De Si m one 等28用离子对PHP LC 从桑科植物(A rtocarpus integrifolia 中分离了植物凝集素lectin jacalin,他们选用了最

35、优的梯度洗脱参数, 快速对2and 2jacalin 进行了分离纯化, 色谱柱为聚丙烯酸酯(polyacrylate 2DE AE 柱, 这两种分离出来的多肽用端基氨基酸排序法(N 2ter m inalam ino acid sequence analysis 确定了结构。Ezi o Bolzacchini 等29用免疫亲合式色谱(I m munoaffinitychr omat ography 和离子对HP LC 对梯牧草(Phleum pratense 的花粉提取物进行了纯化, 梯牧草花粉过敏源通过硅胶过滤离子交换色谱(HP I EX 和排阻色谱或者是通过连续的胶体过滤层析2免疫亲合式色

36、谱(gel filtrati on 2i m munoaffinity 和HP I EX 进行纯化制备, 实验证明后者用于制备更为合适的。夏栎(Quercus r obur L. 木心中含大约10的鞣花单宁质(ellagitannins , Augustin Scalbert 等30用Sephadex LH 220和反相高效液相色谱对其中五种鞣花单宁质进行了分离制备, 并对其中的两种鉴定为栗木鞣花素(castalagin 和栎木鞣花素(vescalagin 。3应用前景综上所述, , 如果在粗提, , 、薄层色谱等, 最后PHP LC 进行分离, 其分离的基本指导原则可以归纳为先分离性质差别大

37、的物质, 再分离相似的物质, 最后用最精密的手段分离极相似难分离的成分, 只有这样才可能达到化合物每一成分的完全分离。因为制备高效液体色谱具有分辨率高、检测方便、收集产物准确等特点, 因而它在天然产物提取分离研究与生产中的应用必将日益广泛。一般而言, 在色谱技术用于天然产物的制备时, 用制备型色谱对样品进行分离和纯化, 用分析型色谱对有效成分进行检测和鉴定, 并进行产品质量控制。如果需要确定化合物的结构式, 可以考虑使用质谱、核磁等方法。我国的天然产物分布范围广, 种类繁多, 而对它们的组分结构与生理活性关系的研究以及对天然产物的综合利用是当今非常感兴趣的课题。这就要求我们在对其中成分的分离过

38、程中做到至纯至微, 为此我们必须将各种分离手段结合起来, 并最终用高分辨率的仪器将其一一分离鉴定。在此过程中, 制备型高效液相色谱由于具有分辨率高等特点, 在将来会成为在天然产物分离方面的主要手段之一。参考文献:1K . 霍斯泰特曼等著, 赵维民(Zhao WM 等译. 制备色谱技术在天然产物分离中的应用M.第一版. 北京:科学出版社, 2000. 1.2Abreu P . Characterisati on of a sugar fracti on fr om Sarcocephaluslatif olius ste m bark extract J .Carbohydr Polym . ,

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