GC_MS法建立广藿香挥发油指纹特征图谱研究_魏刚

1、中药指纹图谱收稿日期:2001-08-12作者简介:魏刚(1969,男,四川省内江市人,主管药师,主要从事中药制剂研究与中药(复方挥发油GC -M S 分析。电话:020-*.GC -MS 法建立广藿香挥发油指纹特征图谱研究魏刚1,符红2,王淑英1,李薇2(1.广州中医药大学第一附属医院实验中心,广州510405;2.广州中医药大学中药学院,广州510405关键词:广藿香;挥发油;GC -M S ;指纹图谱;广藿香醇;广藿香酮摘要:目的:建立广藿香挥发油指纹特征图谱,为广藿香的内在质量评价和鉴定提供特征数据。方法:采用GC -M S 法对不同产地广藿香(石牌、高要、海南藿香,组织培养广藿香,以

2、及超临界提取广藿香、广藿香对照品共21个样品进行主成分分析。结果:21个广藿香样品均含有-广藿香烯、-榄香烯、顺式-石竹烯、反式-石竹烯、刺蕊草烯、-愈创木烯、-广藿香烯、-愈创木烯、未鉴定A 、广藿香醇、广藿香酮等主要成分,以上11种主成分相对含量约占挥发油总量的80%左右。石牌藿香与高要、海南藿香比,11个成分的相对含量(除顺式-石竹烯、反式-石竹烯外,均有显著性差异;高要藿香与海南藿香比无显著性差异。结论:11个主要成分的出峰先后顺序及相对含量极具特征性,形成了广藿香特有的指纹图谱(地貌,可作为广藿香内在质量评价和鉴定的依据。中图分类号:R284.1文献标识码:A 文章编号:1001-1

3、528(200206-0407-04Study on characteristic fingerprint of volatile oil of Pogostemon cablin (Blanco Benth by GC -MSWEI Gang 1,FU Hong 2,WANG Shu -ying 1,LI Wei2(1.The First A ffiliated Hospital of Guangz hou Un iversity of TCM ,Guangz hou 510405,China ;2.Guangz hou Univers ity of TCM ,Guangzhou 51040

4、5,China Key words :Pogostemon cablin (Blanco Benth ;volatile oil ;GC -MS ;fingerprint ;patchoulic alcohol ;pogostone A bstract :Objective :To establish the characteristic fingerprint of volatile oil of Pogostemon cablin (Blanco Benth .Methods :The main com ponents of 21samples w ere determined by GC

5、 -MS .Results :-Patchoulene ,-Elemene ,cis -Caryophy llene ,trans -Caryophyllene ,seychellene ,-Guaiene ,-Patchoulene ,-Guaiene ,uniden -tification com ponent A ,patchoulic alcohol ,pogostone w ere determined in all samples ,and the relative content of 11components add up to 80percent .Compared w it

6、h the samples produceds in Gaoyao and Hainan ,Shipai sam -ples were significantly differences .C onclusion :The retention time and relative content of 11components bulidup the characteristic fingerprint of volatile oil of Pogostemon cablin (Blanco Benth ,it can be used for quality con -trol and iden

7、tificatio n to Pogostemon cablin (Blanco Benth .广藿香为唇形科植物广藿香Pogostemon cablin (Blanco Benth 的干燥地上部分。商品分为石牌藿香、高要藿香、海南藿香,分别产于广州市郊石牌、高要、湛江及海南岛地区。19982001年我们采用GC -MS 法对广藿香21个样品进行主成分分析时,发现3个不同产地的广藿香以及组织培养广藿香中,均含有-广藿香烯、-榄香烯、顺式-石竹烯、反式-石竹烯、刺蕊草烯、-愈创木烯、-广藿香烯、-愈创木烯、未鉴定A 、广藿香醇、广藿香酮等11种主要成分。以上述11种主成分的出峰先后及相对含量为特

8、征,形成了广藿香特有的指纹图谱,报道如下:1材料与仪器石牌藿香2个样品1998年11月采自广州郊区,生长期1214个月;高要藿香5个样品1999年11月分别采自高要市、肇庆市,生长期78个月;海南藿香10个样品于1998、1999年11月分别采自湛江市遂溪县、吴川以及阳春市;组织培养广藿香2个,本课题组培育,1998年34月下地种植,1999407年11月采收,在地生长89个月;广藿香油对照品,批号0832-9501,由中国药品生物制品检定所提供;广藿香超临界提取由广州市轻工研究所完成。岛津GCMS-QP5000型气相色谱质谱联用仪;乙醚为分析纯。2实验条件与方法2.1材料处理石牌、高要、海南

9、广藿香,组织培养广藿香茎叶混同粉碎过3号筛,按中国药典1995年版挥发油测定甲法,分别提取、收集挥发油,加入适量乙醚稀释10倍;广藿香油对照品、广藿香超临界提取物同法加入适量乙醚稀释10倍供分析用。2.2色谱条件GC:DB-1石英毛细管色谱柱(30m×0.25mm;进样口温度250°C,接口温度230°C;载气为氦气,流速为1.3m L·min-1;柱前压为80kPa,分流比601,进样量为1.0L;峰面积归一法计算各化合物的相对含量。MS:EI源(70ev,双灯丝;质量范围m/z 40-400全程扫描,扫描间歇1.0s。升温程序1:柱温60°

10、C,保持5min,5°C·min-1280°C,保持5min,可达到较好分离。升温程序2:柱温60°C,3°C·min-1140°C1°C·min-1160°C10°C·min-1280°C,保持5 20min,可达到较好分离。3结果3.1以上21个广藿香样品分别采用升温程序1法、2法进行主成分分析,结果见表1,图1。由图1可以观察到广藿香挥发油具有非常相似的“地貌”,均含有-广藿香烯、-榄香烯、顺式-石竹烯、反式-石竹烯、刺蕊草烯、-愈创木烯、-广藿香烯、-愈创木

11、烯、未鉴定A、广藿香醇、广藿香酮等11种主要成分。以这11种主成分的出峰先后及“表观丰度”的高矮为特征,形成了广藿香特有的指纹图谱(地貌。3.2为易于辨认,可将11个主要成分分成、区,见图2。经统计学处理,高要藿香与海南藿香比较,仅-榄香烯的相对百分含量有显著性差异,其余10个成分相对含量无显著性差异,见表2、表3、表4。提示从挥发油角度来看,二者在品质上似无差异,这与海南藿香品质较高要藿香差的经验看法表1广藿香挥发油特征(峰成分相对含量样品编号产地相对百分含量%峰1-广藿香烯2-榄香烯3顺式-石竹烯4反式-石竹烯5刺蕊草烯6-愈创木烯7-广藿香烯8-愈创木烯9未鉴定A10广藿香醇11广藿香酮

12、合计1.石牌0.170.050.150.970.571.190.640.240.357.7263.7575.802.石牌0.140.050.531.990.480.970.880.820.147.0672.6385.693.高要1.250.702.680.025.054.50853.171.4079.574.高要0.920.800.332.184.464.754.356.302.0053.302.2881.675.高要1.630.310.391.045.142.943.794.922.0049.777.5279.456.高要1.280.200.445.023.504.12

13、4.102.871.0232.6824.0379.267.肇庆01.322.392.0834.3519.0565.998.遂溪1.900.940.682.106.798.956.9611.090.4938.180.3078.389.遂溪2.470.820.331.493.743.923.686.491.6243.2512.4780.2810.遂溪0.570.740.301.014.072.433.053.262.5157.015.7580.7011.湛江1.751.340.502.876.246.655.9515.021.7039.552.6184

14、.1812.湛江2.830.621.212.297.266.676.5910.842.3346.870.3987.9013.吴川2.600.755.474.297.681.1040.4910.2879.7914.吴川0.361.360.470.755.562.163.554.121.8549.730.4670.3715.吴川0.980.780.231.482.914.273.026.850.8053.435.5280.2716.阳春1.720.571.730.314.263.633.424.361.7046.2811.4379.4117.阳春0.960.670.241.

15、653.223.883.385.402.4454.189.9986.0118.组培2.13.415.511.183.957.584.984.620.8521.3016.9169.4219.组培0.980.650.201.643.173.583.535.642.3555.889.0986.7120.对照品a5.711.400.743.337.9211.359.6818.230.6626.710.8886.610832-9501b5.671.380.743.327.6112.099.8118.180.6526.470.7686.68 21.超临界萃取0.390.330.280.803.153.59

16、2.823.380.5726.687.1149.10(0.560.470.391.144.475.104.014.810.8137.9010.1069.76注:对照品(0832-9501分a、b样,分别采用升温程序1、2检测;石牌、高要、遂溪采用升温程序1检测;其余样品采用升温程序2检测。以上相对含量均为全程计量,超临界样品括号中为050min中计量。408 图1广藿香对照品、不同产地、组培挥发油及超临界提取物GC-MS 总离子流图图2广藿香挥发油指纹图谱分区图似不同。表2广藿香挥发油指纹特征峰区相对含量比较品种特征峰(成分相对含量-广藿香烯-榄香烯顺式-石竹烯反式-石竹烯、石牌藿香0.16&

17、#177;0.0210.05±0.110.34±0.271.48±0.72高要藿香1.24±0.260.42±0.3110.81±1.051.92±1.90海南藿香1.61±0.870.86±0.280.79±0.701.41±0.87注:1P<0.05,2P<0.01,3P<0.001,表3、表4同。3.3为便于比较,考虑到高要藿香与海南藿香主成分含量几无统计学差异,笔者将高要藿香5个样品与海南藿香10个样品合并成为一组,与道地药材石409牌藿香进行统计分析,结果其

18、中-广藿香烯、-榄香烯、刺蕊草烯、-愈创木烯、-广藿香烯、-愈创木烯、未鉴定A、广藿香醇、广藿香酮等9个主要成分的含量均有显著性差异,仅顺式-石竹烯、反式-石竹烯2个无差异(见表2、表3、表4。提示从挥发油角度来看,石牌藿香在品质上与高要、海南藿香存在显著差异,这与经验看法相一致。表3广藿香挥发油指纹特征峰区相对含量比较品种特征峰(成分相对含量刺蕊草烯-愈创木烯-广藿香烯-愈创木烯未鉴定A石牌藿香0.52±0.0621.08±0.1610.76±0.1720.53±0.4110.24±0.152高要藿香4.11±1.163.67

19、77;1.153.72±0.854.31±1.701.50±0.50海南藿香4.88±1.514.80±2.124.39±1.527.51±3.741.65±0.69表4广藿香挥发油指纹特征峰区相对含量比较品种特征峰(成分相对含量广藿香醇广藿香酮石牌藿香7.39±0.47368.19±6.283高要藿香44.65±10.2810.86±10.18海南藿香46.90±6.595.92±4.854结论由11个主要成分的出峰先后及相对含量为特征,形成了广藿香特有

20、的指纹图谱。其主要特征归纳详见表5。以上主要特征可作为广藿香品种鉴定、真伪鉴别的依据。5讨论5.1一般气相色谱以保留时间为主要鉴别参数,若因仪器厂家、色谱柱等条件不同,则保留时间可能产生较大的差异,导致指纹图谱的可操作性不强。采用GC-M S建立挥发油指纹图谱,一个突出的优点是其本身具有定性的功能,基本不受色谱柱、不同仪器等条件的局限。即使有些成分不能鉴定出,也可根据其质谱“棒形图”进行辨认。表5广藿香挥发油指纹图谱特征分析图谱特征要点分析分、区易于辨认区包括14号峰,含-广藿香烯、-榄香烯、顺式-石竹烯、反式-石竹烯等4个成分。区包括59号峰,含刺蕊草烯、-愈创木烯、-广藿香烯、-愈创木烯、未鉴定等5个成分。区包括1011号峰,含广藿香醇、广藿香酮2个成分。峰高总体来看区14号峰明显比号59号峰,区1011号峰矮小;以广藿香醇为最高峰(石牌藿香广藿香酮最高。区14号峰,以1、4号较2、3号为高,形成“两高夹两矮”的地貌。区59号峰,5、6号峰连在一起,较7号峰高;8号峰与5、6连峰相差无几,明显高出9号峰,相成“两高护两矮”的地貌。区1011号峰,石牌藿香广藿香酮明显高于