氨基转换作用

1、实验六氨基转换作用目的要求：了解转氨酶在代谢过程中的重要作用 学习应用纸层析法鉴定氨基转换反应实验原理体内a氨基酸的*氨基在氨基转换酶的作 用下，移换至e酮酸的过程，称氨基转换作1=1=1=用。转氨酶(aminotransferase) 转换酶中的一类。催化氨基酸和a酮酸或) 醛酸之间的氨基转换反应，生成与原来的a酮 酸或醛酸相应的a氨基酸或co-氨基酸，原来氨 基酸转变成相应的酮酸。转氨酶催化的反应都 是可逆的。IP是人体代谢过程转氨酶参与氨基酸的分解和合成, 中必不可少的“催化剂”；以谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）最为重要。 GPT主要存在于肝脏、心脏和骨骼肌中，在肝脏中 活力

2、最大。GPT升高是肝脏功能出现问题的一个重 要指标。1=本实验是将谷氨酸与丙酮酸在肌肉糜中 谷氨酸一丙酮酸氨基转换酶（简称谷一丙转 氨酶）的作用下进行氨基转化反应，然后用 纸层析法检查反应体系中丙氨酸的生成。OOH谷丙转氨酶COOHr=o cooh谷氨酸、 谷氨酸、 冬氨酸。 丙酮酸: 环。丙酮酸脱氢酶系催化生成乙酰辅酶A,进入TCA循在反应体系中添加漠乙酸以抑制谷氨酸和丙酮酸的其他代谢过程。丙酮酸（丙酮酸竣化酶系）一一糖异生途径 草酰乙酸在谷草转氨酶（GOT）催化转氨基生成天试剂和器材试剂1%谷氨酸溶液（用1% KOH调到 中性）；1%丙酮酸钠溶液（用材料1% KOH调到中性）；0. 1%K

3、HCO3溶液；0.025% 漠 醋酸溶液（用1% K0H调到中 性）；2% Hac溶液；0. 1%标准肌肉糜：取兔子肌肉lg,置 研钵中，加0.9%氯化钠溶 液3ml,在低温下研磨成细 浆，离心5分钟（3000转/III谷氨酸；0.1%标准丙氨酸。展开剂：酚饱和水溶液：2份 酚加1份水混合放入分液漏斗， 振荡。静置24小时显色剂：0.1%前三酮正丁醇溶分）,弃去沉淀，得肌肉糜 提取液。液。操作方法、转氨酶作用IE1in1取试管2只编号（1、2）,向每个试管各加0.5mL1%谷氨 酸溶液,0.5mL 1 %丙酮酸钠溶液，05mL 0.1% KHCO3和 0.25mL 0.025%漠醋酸,混匀。然

4、后分别加入肌肉糜提取液 0.5ml,混匀，将其中一试管立即在沸水浴中加热23分钟做 对照。用试管帽塞住另一只试管，置于45弋水浴中保温40minoIII2保温完毕，取出试管。向每只试管中各加2% HAc溶液4滴， 再置于沸水浴中2min,使蛋白质完全沉淀。过滤收集滤液 待用。（二、层析验证1.取9厘米培养皿一个，加入酚饱和水溶液约0.5cm高， 取圆形滤纸一张，在中心剪一直径约2mm的小孔，并以匚 心约1cm为半径划一圆作为底线。在此底线上，用铅笔点四 个等距离的原点并标明1, 2, 3, 4；酸2点聊醫敞®験WW 能太大，一般賣銓场0.2cm%宜。3另取一条滤纸卷成实心筒状，直径约23mm?将此小筒 插入滤纸中心小孔（不可突出纸面之上）,使层崭滤纸通过 此小筒与酚溶液相连。然后将滤纸平放在盛梅和酚的培养皿 ±o另取一女小稠同敢培养皿盖在滤纸上，此时酚溶液即由 滤纸中心孔向四闊扩散。:4当酚溶液扩展到直径约7cm时，取出滤纸。用铅笔画下酚溶液扩展边缘，用吹风机 吹干。用喷雾器喷以0.1%帝三酮正丁醇溶液， 再用热风吹干。用铅笔圈下各显色点。测定 各显色点的Rf值，并解释之。III:注意：当温度、滤纸质量和展开剂等都相同时, 对于一个化合物比移值Rf是一个特有的常数。三、计算公式1=原点至斑点中心的距离/原点至溶