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文档简介

1、PCR技术简介 分子生物学技术的迅速发展，分子生物学技术的迅速发展，为为PCR技术的发现提供了坚实的技术的发现提供了坚实的基础，同时也为这一技术的发展基础，同时也为这一技术的发展和应用提供了宽广的舞台。和应用提供了宽广的舞台。PCR技术的发明v1985年vMullis v青年v遗传学领域v1995年诺贝尔化学奖v灵感PCR技术的发明v1971年Korana最早提出核酸体外扩增的设想：“经过DNA变性、与合适的引物杂交、用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”。 PCR原理示意图原理示意图PCR的扩增效率：的扩增效率：循环数循环数. 扩增子数扩增子数 (靶序列拷贝数靶序列拷

2、贝数)1 22 43 84 165 326 6420 1,048,57630 1,073,741,824(10亿亿)3、PCR条件的优化条件的优化 模板模板 引物引物(0.2-1umol/L) 缓冲液缓冲液(Tris-HCl 10mmol/L KCl 50mmol/L pH 8.3-9.3) 镁离子镁离子(0.5-5.0 mmol/L) dNTP 耐热耐热DNA聚合酶聚合酶 温度循环参数温度循环参数 PCR的改进与完善vMullis最初使用DNA聚合酶I的Klenow片段v不耐高温v37C下反应PCR技术的改进与完善v1984年Keohanog改用T4DNA聚合酶v1988年Saiki等从温泉

3、中分离的一株嗜热杆菌（thermus aquaticus)中提取到一种耐热DNA聚合酶Taq DNA聚合酶v耐热性v忠实性v扩增长度v平台期PCR技术的发展v高保真PCRv长片段PCRvRTPCRv定量PCRv原位PCRvssPCRv反向PCRPCR技术的发展v武断引物PCRv多重PCRv标记PCRv重组PCRv免疫PCRvPCRELISAvddPCRPCR 技术的应用分子生物学v克隆v重组v突变体构建v突变分析vSNPv序列分析PCR 技术的应用医学研究v基因表达水平与疾病的相关性v基因变异与疾病的相关性v基因与表型的关联v基因之间的相互关系v寻找未知基因v研究基因功能PCR技术的应用临床医学v遗传学（各种遗传病）v肿瘤学（K-ras、p53、微卫星、端粒酶、p16、BCR/ABL等）v传染病学（病毒、细菌、寄生虫等）v其他法医学v亲子鉴定v刑事侦破v物证v身份确认PCR技术的发展趋势v简便v快速v封闭v集成（高通量）v定量v广泛v预测疾病（上工治未病）v指导治疗（个体化治疗）荧

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