盐酸普鲁卡因注射液中特殊杂质的检查

1、盐酸普鲁卡因注射液中特殊杂质的检查一、实验目的与要求1. 了解盐酸普鲁卡因的结构和性质；2. 了解盐酸普鲁卡因注射液中的特殊杂质的检查方法；3. 掌握TLC法测定有关物质的原理与测定方法；4. 熟悉并掌握薄层板的制备与活化。二、实验原理1. 结构与性质C13H20N2O2.HCl 272.15盐酸普鲁卡因化学名为4-氨基苯甲酸-2-(二乙氨基)乙酯盐酸盐，白色结晶或结晶性粉末；无臭，味微苦，随后有麻痹感；在水中易溶，在乙醇中略溶，在氯仿中微溶，在乙醚中几乎不溶；用于局麻。2. 盐酸普鲁卡因中特殊杂质“对氨基苯甲酸”的来源及检查的必要性 盐酸普鲁卡因分子中含酯键，因此盐酸普鲁卡因注射液在贮藏期间

2、，普鲁卡因可发生水解反应生成对氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇：盐酸普鲁卡因注射液在贮存过程中的稳定性与溶液的pH、贮存温度、容器玻璃质量、空气中氧以及光线照射等有密切关系。如pH为6的溶液，于37 放置40天后，分解率约为4.3 4.6%；pH在4.05.0之间的溶液，久贮后仍较稳定。但保存不当，受空气及光线影响，对氨基苯甲酸可脱羧生成苯胺，而苯胺又会被氧化成有色物质使注射液变黄，降低疗效，增加毒性。所以，中国药典2010年版（是ChP2010吗？）中规定盐酸普鲁卡因及其注射液均需要检查对氨基苯甲酸的含量，并且盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的限量不得超过标示量的1.2%。3. 盐酸普鲁卡因注射液中

3、特殊杂质“对氨基苯甲酸”的检查原理和方法检查对氨基苯甲酸的方法曾采用溶剂抽提后比色法，该法操作麻烦、费时。中国药典1985年版至2005年版则采用薄层色谱法检查之。利用薄层色谱法的高分离效能，将对氨基苯甲酸与盐酸普鲁卡因等物质分离后，喷以对二甲氨基苯甲醛溶液，在冰醋酸存在下与对氨基苯甲酸缩合形成Schiff碱呈有色斑点，并同时与对照品溶液的主斑点进行比较。选用实际存在的待检杂质作为对照标准进行药物中特殊杂质检查的方法较为理想，因为对照品与杂质系同一种物质，其色谱行为相同。ChP2010采用高效液相色谱的方法进行检查，高效液相色谱具有灵敏度高、高专属性等优点，但是其使用成本较高，设备价格昂贵。本

4、实验中采用薄层色谱法进行检查。三、实验材料、试剂与仪器原料名称规 格用 量盐酸普鲁卡因注射液普通市售12支乙 醇AR适 量对氨基苯甲酸AR0.3 mg对二甲氨基苯甲醛溶液2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100 mL，加入冰醋酸5 mL制成适 量展开剂苯-冰醋酸-丙酮-甲醇(14:1:1:4)适量容量瓶10 mL、100 mL各一个，薄层层析硅胶板，层析缸，点样管。四、实验方法与步骤1. 供试品溶液的制备精密量取本品，加乙醇稀释使成每l mL中含盐酸普鲁卡因2.5 mg的溶液，作为供试品溶液。2. 对照品溶液的制备精密称取对氨基苯甲酸3 mg，置100 mL的容量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，既得。3.

5、 盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查（ChP2015采用HPLC法）：吸取上述两种溶液各10 L，分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶薄层板上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇(14:1:1:4)为展开剂。展开后，取出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液喷雾显色。供试溶液若显色，则与对照品相应的杂质斑点比较，其颜色与对照品溶液的主斑点比较，不得更深。注意事项：1. 薄层色谱分析中为使斑点集中，点样应分次点加，每次点加后候，其自然干燥、低温烘干或经温热气流吠干。 2. 薄层板放入层析缸时，薄板底边应水平浸入展开剂中，待展开至溶剂前沿距玻板顶端1 cm时，取出薄层板。3. 展开缸必须密封，为使缸内展开剂饱和，薄层板放入展缸前可在层析缸内壁贴滤纸条让滤纸条一端浸入展开剂中，密封层析缸，