万年蒿乙酸乙酯提取物化学成分研究

1、学校代码：10184学 号：2104113795 延 边 大 学本科毕业论文题 目：万年蒿花序乙酸乙酯提取物化学成分研究学生姓名：白昶健学 院：药学院专 业：药学班 级：10级药学1班指导教师：金光洙 教授二 一四 年 六 月摘 要目的：研究万年蒿花序乙酸乙酯提取物的化学成分。方法：利用硅胶柱层析分离和纯化化合物，利用理化性质及波谱分析的方法进行结构的鉴定。结果：在上柱接样之后发现所做实验中有三种化合物单体，经鉴定为木质素酸、-谷甾醇、异东莨菪素。结论：万年蒿花序中含有木质素酸、-谷甾醇、异东莨菪素。关键词：万年蒿花序；硅胶柱层析；化学成分AbstractObjective: Studies

2、on the chemical constituents of Artemisia sacrorum Ledeb. Ethyl acetate extract.Methods:The constituents were separated and purified by silica gel column chromatography, structure identification by physicochemical properties andspectral analysis.Results: After column sample receiving findings do hav

3、e three kinds of compound monomer experiment, identified as lignin acid, - sitosterol, isoscopoleti.Conclusion:Artemisia sacrorum Ledeb. Inflorescence contains quality acid, - sitosterol, isoscopoleti.Keywords: Artemisia sacrorum Ledeb. Inflorescence; silica gel column chromatography; chemical const

4、ituents目 录引言-1第一章 实验仪器、材料与试剂- 2第二章 实验方法与步骤- 3第三章 实验结果 -5第四章 讨论 -9参考文献 - 10谢辞 -11引 言 万年蒿属于菊科蒿属类植物，又称铁杆莲，白莲蒿。除中国高寒地带外几乎都有分布且资源丰富1。性味苦,辛,平。清热解毒，凉血止痛。用于肝炎，阑尾炎，小儿惊风，阴虚潮热；外用治创伤出血2;部分地区用其幼苗代替茵陈。药用部位一般为其全草。万年篙作为朝药,在治疗肝炎时当地朝鲜族经常使用此药。 在我国很多民间地区经常使用万年蒿作为治疗肝炎、胃肠炎、阑尾炎、小儿惊风以及退热、杀虫等。3 据较多参考文献报道万年蒿是一种药理活性很广泛的中药。它具有

5、保肝利胆4,5,6、抗菌、抗肿瘤、抗氧化7.8.9等多种作用。所以万年蒿非常具有研究价值以及开发、应用前景。 根据多年来的研究表明，万年蒿具有许多有效的化学物质。通过药物化学实验的研究结果表明万年蒿主要成分有萜类、肉桂酸类和香豆素类化合物等、此外还有多糖挥发油和黄酮类10。本实验主要对万年蒿花序中的化学成分进行研究，旨在证明万年蒿花序中同样含有上述一类或几类有效的化学成分。图 1 万年蒿植物原图第一章 实验仪器、材料与试剂1.1主要实验仪器、用具：核磁共振仪AV一300(瑞士布鲁克)柱层析用硅胶100200目、200300目(青岛海洋化学试剂厂)旋转蒸发仪(BUCHIR一200,瑞士)循环水式

6、多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)甲醇(HPLC,江苏汉邦科技有限公司)硅胶柱硅胶板硅胶板层析缸1.2 主要实验试剂、试剂盒石油醚（上海试剂一厂）二氯甲烷（上海试剂一厂）甲醇（上海试剂一厂）乙酸乙酯（北京化工厂）正丁醇（上海试剂一厂）硅胶（上海试剂一厂）氘代氯仿 （北京化工厂）DMSO（北京化工厂）第二章 实验方法与步骤2.1 万年蒿花絮的来源及处理 2014年3月16日采集于延吉溪洞,经延边大学医学部生药学教研室朴光春副教授鉴定为菊科篙属植物万年篙的地上部分。2.2万年蒿花絮的提取分离 取万年蒿的花1.6Kg粉碎，并用甲醇浸泡过夜，过夜后冷凝回流提取三次，时间分别为2h，3h,3h。回流后

7、合并提取液并过滤取滤液，将滤液呈入圆底烧瓶中减压回收溶剂得到样品的浸膏。将浸膏加入水中溶解制成混悬液，再分别用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取。然后再别分将石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇提取物减压回收溶剂，得到石油醚提取物50g、二氯甲烷提取物60g、乙酸乙酯提取物35g、正丁醇提取物100g。（图 2 为提取工艺流程） 图 2 万年蒿提取工艺流程2.3万年蒿花絮乙酸乙酯提取物化学成份的分离 取万年蒿乙酸乙酯提取物35g，加入少量甲醇使其完全溶解、并向其中加入40g硅胶混合搅拌（向其中加入的硅胶的质量大约为提取物的1.21.5倍左右），再减压回收溶剂使其成为粉末状，待装入硅胶柱中。取

8、400g左右的硅胶，用二氯甲烷浸泡，浸泡过程中需要不断用玻璃棒搅拌使其中气泡排除干净，气泡排净后静置一段时间再上柱，原因是硅胶中刚加入溶剂时其体积会膨胀，需要静置让其体积稳定后再上柱，避免因体积问题进而影响整个实验结果。待硅胶静置一段时间后准备上柱，先取一块脱脂棉，将脱脂棉整体制作成与柱体圆面积相似的片状，并用泡硅胶的溶剂浸泡脱脂棉且排除棉花内空气，使其平铺于硅胶柱底。将所有硅胶都倒入玻璃柱内后打开玻璃阀用加压泵对玻璃柱加压使玻璃柱内硅胶沉淀完全。待加压一段时间后将样品粉末加入到硅胶柱中，加入样品时应该使用钥匙缓缓加入。加样过后使用二氯甲烷-甲醇洗脱剂按梯度洗脱，洗脱剂比例分别为100：0、1

9、00：1、100：2、100：5、100：10、100：20、100：50依次洗脱。每次收集洗脱液为250ml。收集后通过薄层点板来合并流分相同的液体。在洗脱剂比例为100：0、100：1、100：5中通过合并相同流分，反复进行硅胶柱层析等方法得到化合物1、化合物2和化合物3。在判断化合物是否为单一化合物时，所采用的方法为薄层点板后观察是否为单一的一个点。点板应注意玻璃板末端与顶端留约0.5cm，每点间隔大约在0.5cm，并用毛细管吸取样品，在每个点上点约57下，点板后用甲醇将毛细管洗净。点板后用镊子夹住顶端放入呈有展开剂的层析缸内。尽量不要让展开剂跑到玻璃板的边缘，如果跑到边缘可能看不到点。

10、展开剂展开完毕后用H2SO4显色。（图2为 分离化合物流程） 乙酸乙酯提取物（35g） 硅胶柱层析 二氯甲烷-甲醇梯度洗脱 100：0 100：1 100：2 100：5 100：10 100：20 100：50 流分1-14 流分7-12 减压蒸发 减压蒸发 化合物1 化合物2 化合物3 图 2 乙酸乙酯提取物分离流程第三章 实验结果 在薄层点板且重结晶化合物后。将化合物装入核磁管内用核磁共振仪AV一300(瑞士布鲁克)进行氢谱和碳谱的实验，一般在核磁管内采用的溶剂为甲醇，如果有难溶性的物质那么我们采用的溶剂为氘代氯仿以及DMSO。最后我们根据氢谱与碳谱的分析来鉴定该化合物化学结构。 3.1

11、 化合物化学结构的鉴定化合物1： 白色粉末状，无色无味。可溶于二氯甲烷、氯仿等有机溶剂内，但是不溶于水。根据氢谱与张德志，李铣，吴力军发表的文献11对照基本一致，确定该化合物结构为木质素酸。化合物2： 白色针状晶体。根据氢谱，碳谱与张德志，李铣，朱廷儒发表的文献12对照得基本一致，确定该化合物为-谷甾醇。化合物3： 浅绿色针状结晶，三氯化铁反应为阳性，在紫外灯的照射下呈现蓝色荧光。 H一NMR谱图显示香豆素类化合物的基本骨架,3,4位质子特征信号(7.89,IH,d,J=9.40Hz,4一H;6.20,IH,d,J二9.40Hz,3一H),两个孤立氢(6.77IH,s;7.19,IH,s)和一

12、个甲氧基信号(3.81,3H,s,OCH3),说明该化合物为6,7一二取代的简单香豆素类化合物。13C一NMR谱图显示161ppm为香豆素类化合物碳基信号。综合以上分析以及对照邵红军，冯俊涛，韩静发表的文献12确定该化合物为物为异东莨菪素。3.2 化合物的波谱数据 化合物1： 白色粉末状，无臭无味。 1H一NMR(300MHz,CDCl3)dppm:2.30(2H,t,J=7.50Hz,H-2),1.63(2H,m,H一3),0.88(3H,m,H一24),1.26(40H,br.s,H一423) 化合物2： 白色针状晶体。 1H一NMR(300MHz,CDCl3)dppm:5.37(1H,d

13、,H一6),3.55(1H,m,H一3). 13C一NMR(75MHz,CDCl3)dppm:37.23(C一1),31.63(C一2),71.83(C一3),45.81(C一4),144.95(C一5),121.74(C一6),33.92(C一7),31.88(C一8),50.11(C一9),37.23(C一10),21.06(C一11),39.75(C一12),42.27(C一13),56.75(C一14),24.29(C一15),28.24(C一16),56.03(C一17),11.85(C一18),19.39(C一19),36.13(C一20),18.77(C一21),31.88(C一

14、22),19.01(C一23),29.69(C一24),29.11(C一25),19.81(C一26),23.04(C一27),26.02(C一28). 化合物3： 浅绿色针状结晶，三氯化铁反应阳性，在紫外灯照射下呈现蓝色荧光。 1H一NMR(300MHz,DMSO一d6)dppm:10.30(1H,s,-oH),7.89(1H,d,J=9.40Hz,4一H),7.19(1H,s,H一5),6.77(1H,s,H一8),6.20(1H,d,J=9.40Hz,3一H),3.80(3H,s,OCH3).13C一NMR(75MHz,DMSO一d6)dppm:161.11(C一2),151.57(C一

15、7),149.93(C一9),145.67(C一6),144.88(C一4),112.10(C一3),110.96(C一8),109.98(C一10),103.20(C一5),56.44(OCH3).3.3化合物的结构化合物 1 化合物 2化合物 33.4化合物的NMR图化合物1 1H-NMR 化合物 2 1H-NMR化合物 2 13C-NMR化合物 3 1H-NMR化合物 3 13C-NMR第4章 讨论 1.从实验中获取了三种化合物分别为木质素酸、-谷甾醇、异东莨菪素 2.-谷甾醇作为一种植物甾醇，具有明显降低血清胆固醇的功效。 3.东莨菪素在文献报道中表明14，东莨菪素具有以下几种药理活性

16、：.抗肿瘤作用.降血压作用.降血脂作用等 4.通过本实验获得的化合物可以基本确定，万年蒿的花序中同样含有有效的化学成分，所以对万年蒿花序的研究也同样具有研究价值以及开发前景。参考文献1 商凤杰，杜晓琪，刘桂杰.我国东北蒿属药用植物资源及其利用J，1997.2 谢宗万，范崔生，朱兆仪.全国中草药汇编M.北京：人民卫生出版社，1975 3全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编(下册)M.北京:人民卫生出版社,1975 4张德志,杨文胜,张伟森等.万年篙挥发油的化学成分J.吉林林学院学报,1992 5陈伟民.青海几种篙属植物挥发油的化学成分及其药性与用途J.青海科技,2004.6胡世林,杨莲菊,潘炯光

17、等.十二种篙属药用植物挥发油组分比较J.中草药,1985.7吕惠子,朴光春,郑光浩等.万年篙多糖的含量测定J.中国野生植物资源,2004.8张德志，李铣，朱廷儒.万年蒿中二萜类化合物的结构研究J.分析测试通报，1990.9张德志.新倍半萜内酯的分离与结构研究J.广东微量原素科学，200610范丽颖、张淑华、李景梅等.万年蒿的化学成分及药理活性研究进展J时珍国医国药,200711李作平,张馒丽,刘伟娜等.合欢花化学成分的研究J.天然产物研究与开发,200512罗娅君,肖新峰.大叶金花草化学成分的研究J.化学研究与应用,200913张德志,李铣,吴立军等.万年篙中香豆素类成分研究J.中草药,198914魏丽娟，周金培，戴岳.天然产物东莨菪素的研究进展J.海峡药学，2009年谢 辞 在论文完成的同时，首先我要衷心的感谢指导老师金光洙教授的尽心尽力的培养与指导。导师知识的渊博、严谨的治学风格、科研思维的敏锐以及对实验室学生们亦师亦友的情感，都让我感觉受益匪浅。导