梗阻性肾间质纤维化大鼠血流变及微循环研究

1、梗阻性肾间质纤维化大鼠血流变及微循环研究 10-08-25 11:00:00 编辑：studa20 作者：吕小燕，孙学刚，刘强，吕志平【摘要】 目的观察单侧输尿管梗阻(UUO)致大鼠肾间质纤维化的血液流变学及微循环的变化特点，从络病角度探讨肾间质纤维化的中医病机。方法 建立单侧输尿管梗阻致大鼠肾间质纤维化模型，观察肾间质纤维化大鼠全血粘度150/s切变率、30/s切变率、5/s切变率、1/s切变率、红细胞压积、舌下及耳廓的脉络变化，同时检测肾纤维化指标、血清肌酐及尿素氮。结果肾间质纤维化模型组的全血粘度150/s切变率、30/s切变率、5/s切变率、1/s切变率、红细胞压积、透明质酸酶(HA)

2、、层粘连蛋白(LN)、型前胶原(PC)、IV型胶原(C IV)、血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)与假手术组相比显著升高;且肾纤维化指标(HA、LN、 PC、C IV)与全血粘度的各个切变率及红细胞压积呈显著正相关。结论肾间质纤维化大鼠血流变及微循环的变化特点一定程度上反应了肾间质纤维化“络脉瘀组”的中医病机，为抗肾间质纤维化“活血通络”的治疗提供初步依据。 【关键词】 肾间质纤维化; 血液流变学; 全血粘度; 红细胞压积Abstract：ObjectiveTo observe the changes of blood rheology and microcirculation in ren

3、al interstitial fibrosis and unilateral ureteral obstruction (UUO) . MethodsRat fibrosis models was established by unilateral ureteral obstruction. Hematocrit and blood viscosity at shear rate in 150/s, 30/s, 5/s, 1/s, renal fibrosis serum markers, serum creatinine and blood urea nitrogen were detec

4、ted respectively in sham operation and model group; microcirculation microscope was used to observe the thread of hypoglottis and auricle in rats. ResultsThe indexes of hematocrit, blood viscosity at different shear rate, hyaluronic acid (HA), laminin (LN), procolagen type (PC), collagen type (C), s

5、erum creatinine (SCr) and blood urea nitrogen (BUN) were increased significantly after fibrosis appeared, and there had positive correlation between blood viscosity at different shear rate, hematocrit and serum concentration of the fibrosis markers(HA，LN， PC，C IV). ConclusionThe tendency of blood rh

6、eological and microcirculation changes hint the pathogenesis of renal interstitial fibrosis including “blood- stasis blocking collaterals”. This may be one of the causes about using “promoting blood circulation to remove meridian obstruction” method to treat renal interstitial fibrosis.Key words：Ren

7、al interstitial fibrosis; Hemorheology; Blood viscosity; Hematocrit肾间质纤维化(RIF)是各种慢性肾脏疾病进展到终末期肾功能衰竭共有的病理改变1，隶属于络病学说中“肾络病”的范畴，其形成的病理过程与络病学说中的“久病入络”相一致2,3。近来有关学者认为，血流变及微循环的异常变化是反映络脉病变的主要客观指标4,5。本文通过观察UUO大鼠肾间质纤维化血流变及微循环的变化特点，拟从络病角度阐述肾间质纤维化的中医病机。1 材料与仪器1.1 动物SPF级SD大鼠16只，雌雄各半，体质量180200g, 由南方医科大学实验动物中心提供(合

8、格证号：NO 0038558)。1.2 试剂及仪器透明质酸、层粘连蛋白、III型前胶原、IV型胶原放免测试盒，上海海研医学生物技术有限公司，批号20081201。GTM-STEELLEX R-80A血液流变仪，北京中勤世帝科学仪器有限公司;意大利爱康ECHO LCD全自动生化仪，意大利乐高特公司;olympus szx16体视显微镜，上海嘉仪信息科技有限公司;SN-682型放射免疫计数器，上海核福光电仪器有限公司。2 方法2.1 造模肾纤维化模型组(以下简称：模型组)大鼠于9 Am以水合氯醛(350 mg/kg)腹腔麻醉，取左侧腹肾区切口,用眼科镊分离左侧输尿管,用5号手术线,在肾盏处和肾下极

9、处分别结扎输尿管,但并不离断输尿管,并保护好肾包膜及周围组织,术后把肾置于原位,逐层缝合腹膜、肌肉、皮肤;假手术组：除不结扎输尿管外,其余步骤与模型组相同;术中严格遵守无菌操作。模型及假手术组大鼠均予普通饲料，自由饮水，共5周。2.2 动物分组SPF级SD大鼠16只随机均分为两组：假手术组和模型组。2.3 舌下、耳廓脉络图像采集造模期满前1天20：00时，动物禁食，于次日8：00时用10%水合氯醛腹腔麻醉，取仰卧位,用镊子轻轻夹住大鼠舌尖从左轻轻拉出,直至露出舌根部,使整个舌体与大鼠躯干成直线或有小于15的夹角，用80倍的体视显微镜观察舌下脉络;后取侧卧位，将左侧耳廓置于“耳托”上，呈平面展开

10、，再用80倍的体视显微镜观察耳廓背侧脉络;所有采集图像导入联想电脑，采用ACDsee v3. 2和windows图片和传真查看器看图软件查看。2.4 指标检测图像采集完毕后，剖开腹腔，取左侧肾组织用中性福尔马林固定，常规脱水，HE染色，光镜下观察肾组织细胞的病理改变及肾间质纤维的增生程度，并参照文献6制定胶原纤维增生程度半定量标准;腹主动脉采血，用真空负压抗凝采血管收集：取0.8 ml的全血用GTM-STEELLEX R-80A血液流变仪测定不同切变率的全血粘度;取1 ml的全血用10 cm长的普通压积管，离心15 min 3 000 r/min测定红细胞压积;剩余全血室温静置1.5 h，2

11、500 r/min，4C离心15 min，取上层血清，分装于离心管中;用ECHO LCD全自动生化分析仪测定血清SCr、BUN;用SN-682型放射免疫r计数器测定血清HA、LN、PC、CIV(按试剂说明书进行)。2.5 统计方法上述各项指标以均数标准差表示，用统计软件SPSS11.5进行独立样本t检验、双变量相关分析、Kruskal-Wallis H及Mann-Whitney U非参数检验。3 结果3.1 动物生存状态观察模型组大鼠皮毛略枯槁、干涩，喜静少动，动作迟缓;假手术组大鼠皮毛浓密、光洁，体态正常;体质量日渐增加。两组大鼠存活良好。3.2 大鼠舌下、耳廓脉络的变化见图12。模型组大鼠舌质紫暗舌下脉络紫黑增粗;耳廓润泽、脉络增粗，略曲张。假手术组大鼠舌质鲜红润泽舌下脉络清晰可见;耳廓润泽、脉络清晰。3.3 肾功(SCr、BUN)的变化 见表1