慢性排斥反应移植体动脉硬化与增殖细胞核抗原表达

1、    慢性排斥反应移植体动脉硬化与增殖细胞核抗原表达        【摘要】目的探讨慢性排斥反应移植动脉硬化与增殖细胞核抗原(PCNA)表达的关系。方法采用免疫组化SP法研究61只大鼠的移植动脉，10例慢性排斥反应移植肾动脉组织中的PCNA表达。结果实验组：在大鼠移植动脉中层PCNA术后7天达最高峰，内膜层术后20天达最高峰，且细胞数明显增多，两者呈正相关。临床组：移植肾动脉PCNA表达主要集中在内膜，其次为中层，外膜极少。结论移植动脉硬化过程中细胞增殖与PCNA表达关系密

2、切。慢性排斥的移植肾动脉PCNA呈高表达。且与术后早期急性排斥反应的发生频率及程度密切相关。【关键词】移植物排斥动脉硬化动物，实验 Expression of PCNA in the transplant arteriosclerosis of chronic rejectionLI Qiansheng,QIAO Zhuoyi,FANG Yuhuan,et al.(Renal Transplantation Center,Daping Hospital,the Third Military Medical University,Chongqing 400042,China)【Abstract】

3、ObjectiveTo investigated the relationship between the expression of PCNA and transplant arteriosclerosis of chronic rejection.MethodsThe expression of PCNA in the allograft arteriosclerosis of 61 rats and the transplant renal artery in 10 patients of chronic rejection were studied with immunohistoch

4、emistry SP method.ResultsIn the experiment group,the expression of PCNA in the media of transplant aorta showed a peak at 7 days postoperative,the intimal PCNA showed a peak at 20 days and the cell numbers increased.The expression of PCNA and the cell numbers showed a positive correlation.In the cli

5、nical group,the expression of PCNA was mainly found in the intimal membrane of transplant renal artery,the next was in the media,where as the exomembrane showed a few.ConclusionsThere was a close relationship between the increase of expression of PCNA and the cell proliferation.The expression of PCN

6、A in the transplant artery of chronic rejection increased.It had significant relationship with the frequency or the degree of acute rejection.【Key words】Graft rejectionArteriosclerosisAnimals,laboratery移植体动脉硬化是慢性排斥反应的主要病理学特征之一。目前，在移植动脉硬化过程中细胞增殖进程与原癌基因的表达尚缺乏了解。为明确血管细胞增殖DNA复制与增殖细胞核抗原(PCNA)表达的相互关系，我们在建

7、立标准慢性排斥反应动物模型基础上，对移植体动脉硬化与PCNA表达作了实验与临床观察。动物实验时相点(术后，天)内膜中层3051±157063±461425±927±222073±2412±103036±217±5609±70     与同组前一时相点比较，差别有显著性意义，P0.05临床研究一、研究对象收集10例同种肾移植术后19年移植肾失功病理诊断为慢性排斥反应并行肾切除的移植肾标本。男8例，女2例。年龄2355岁。肾移植术后3个月内发生急性排斥反应1次3例，2次

8、4例，3次1例，不详2例。5例正常肾组织为对照组。二、材料与方法与实验组相同，即取移植肾动脉12级分支，采用SP法行PCNA免疫组化检测。三、结果1.PCNA表达形式：在光镜下显示移植肾动脉硬化血管中PCNA阳性细胞染色呈棕黄色颗粒，呈弥散状或混合状分布，不规律地表达于胞浆、胞核及胞膜，胞浆内以混合型多见，核内分布以弥散状颗粒为主。血管壁各层均可见大量炎性细胞，其中以内膜占相当大的比例，包括单核、巨噬细胞及T细胞。对照组未见PCNA阳性细胞。2.PCNA表达部位及其阳性率：血管壁内膜、中层及外膜PCNA阳性表达率分别为90%、50%及10%。表明排斥反应时血管PCNA表达主要集中在内膜，其次为

9、中层，外膜极少，差别有显著性意义，P0.05。3.PCNA表达强度与急性排斥发生频率关系：肾移植术后发生急性排斥1次3例，血管内皮细胞PCNA阳性表达率为31%，2次4例，阳性细胞表达率63%，3次1例，阳性细胞表达率80%。即急性排斥发生频率越高，PCNA阳性细胞表达率越明显，P0.05。讨论一、PCNA来源、表达形式及部位PCNA作为评价细胞增殖状态的一个重要指标，近年来已广泛开展。本实验在异系移植动脉硬化研究中发现，PCNA在血管的内、中、外层均有不同程度的表达，且主要集中在内膜及中层，染色呈棕黄色颗粒，弥散状或混合状分布，不规律地表达于胞浆、胞核及胞膜。胞浆内以混合型颗粒为主，核内以弥

10、散状颗粒为主。外膜有大量炎性细胞浸润，PCNA有不均匀少量的表达。因外膜中不存在平滑肌细胞增生，故推测PCNA来源于内皮细胞、单核及巨噬细胞1。二、PCNA表达与动脉硬化的关系本实验发现移植后14天，内膜出现增生层，内膜细胞PCNA阳性表达率为25%±9%，术后20天达最高峰为73%±24%，且伴随平滑肌细胞由中层向内膜迁移以及迁移后细胞增生。此后PCNA表达阳性率逐渐下降。而在血管中层术后7天PCNA阳性率达最高峰63%±24%。以后逐渐下降，反映出术后2周出现的“中层坏死”现象。由此推测，中层PCNA阳性表达多为平滑肌细胞。有人认为，移植动脉中层坏死与内膜增生

11、其主要因素与中层平滑肌细胞向内膜迁移有关2。某些细胞因子如IGF-1，PDGF及TGF-b，或白介素及炎症脂质介质等可促进平滑肌细胞的迁移3。本组10例移植肾慢性排斥的动脉硬化标本中可见血管各层均有炎性细胞浸润。如单核、巨噬细胞及T细胞，尤以内膜更为显著。PCNA表达也主要集中在内膜，其次为中层。虽然由于人类肾移植术后免疫抑制剂的应用，中层坏死炎性细胞浸润程度、PCNA表达程度均较动物实验低，但炎性细胞的浸润与内膜PCNA表达及细胞增生导致动脉硬化的关系密切。三、PCNA高表达与急性排斥之间的关系肾移植术后急性排斥发生频率及强度是导致慢性排斥的主要危险因素4。在移植动脉硬化的过程中，当给予免疫

12、抑制剂抑制急性排斥的发生，内膜增生可明显受到抑制。Almond等5报告术后早期使用MMF，内膜增生较对照组低76.3%。本组急性排斥8例移植肾动脉标本中发现，急性排斥发生的频率越高，内膜增生越显著。增生形式有半月状或同心圆状，严重者管腔完全闭塞。因此，我们认为，肾移植术后急性排斥是导致移植肾动脉硬化的重要因素。一旦发生，其改变不可逆转。四、PCNA表达的启动因素与增生的关系1.炎性细胞的浸润：炎性细胞通过不相容MHC抗原识别，释放淋巴因子(IL-1等)，通过其免疫介导，使其产生PCGF，TGF-等生长因子，PCNA表达增强，DNA大量复制合成，出现细胞增生6。2.缺血与再灌注损伤：一般认为，在

13、冷缺血时间较短的情况下，缺血/再灌注损伤对移植动脉硬化影响不大。相反，供体长时间缺血，或再灌注性损伤，均可导致氧自由基的活化降低。脂蛋白氧化7，刺激细胞及生长因子，促使内膜增生及动脉硬化。3.感染：术后早期感染，血管外膜炎性细胞浸润，可使内膜增生程度加倍。而术后晚期的CMV感染可通过增强PDGF-BB及TGF- mRNA的表达，导致内膜增生8。我们认为，移植体动脉硬化过程中细胞增殖是多因素作用的结果，而PCNA的表达乃是细胞增殖的主要分子病理学基础。因肾移植术后使用免疫抑制剂，使PCNA的表达强度较实验动物弱。作者单位：李黔生(第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科洗肾移植中心重庆，400

14、042)乔着意(第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科洗肾移植中心重庆，400042)方玉华(第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科洗肾移植中心重庆，400042)徐序广(第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科洗肾移植中心重庆，400042)靳风烁(第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科洗肾移植中心重庆，400042)朱方强(第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科洗肾移植中心重庆，400042)万江华(第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科洗肾移植中心重庆，400042)姜庆(第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科洗肾移植中心重庆，400042)吴刚(第三军医大学大

15、坪医院野战外科研究所泌尿外科洗肾移植中心重庆，400042)靳文生(第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科洗肾移植中心重庆，400042)参考文献1，Alprs CE,Davis CL,Barr D,et al.Identification of platelet-derived growth factor:a and b chains in human renal vascular rejection.Am J Pathol,1996,148439-442.2，Mennander A,Pavoner J,Harry P.Intimal thickening and medial necr

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