四种糖的测定方法

1、4 种糖的测定方法总结：1、直接滴定法。原理为 糖还原天蓝色的氢氧化铜为红色的氧化亚铜。缺点：水样中的还原性物质能对 糖的测定造成影响。2、高锰酸钾滴定法。 所用原理同直接滴定法。缺点：水样中的还原性物质能对糖的测定造成影响，过程较为 复杂，误差大。3、硫酸苯酚法。 糖在浓硫酸作用下，脱水形成的糠醛和羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在 10-100mg 范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm 波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵 敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定 160min 以上

2、。 缺点：如果水样呈橙红色（大部分水样为黄色） ，会对比色法造成较大的干扰。4、蒽酮法糖在浓硫酸作用下， 可经脱水反应生成糠醛和羟甲基糠醛， 生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽 酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物， 在一定范围内， 颜色的深浅与糖的含量成正比， 故可用于糖 的测定。缺点：，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘 露糖较浅，五碳糖显色更浅。综合比较；采用蒽酮法能将最为准确地测定尾水中糖的含量。（一）直接 滴定法（本法是国家标准分析方法）中华人民共和国行业标准 （ 果汁总糖的测定直接滴定法 ）SB/T 10203-1994、原理? 一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等

3、量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀 很快与酒石酸钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。在加热条件下，以次 甲基蓝作为指示剂，用标液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧 化亚铜沉淀，待二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由蓝色变 为无色，即为滴定终点。根据样液消耗量可计算出还原糖含量。样品经除去蛋白质后， 在加热条件下， 以次甲基蓝做指示剂， 滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液 （用 还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液），根据样品溶液消耗体积计算还原糖量。、仪器和试剂1仪器酸式滴定管，可调电炉（带石棉板）， 250ml 容量瓶。2试剂1. 盐酸。2

4、. 碱性酒石酸铜甲液：称取 15g 硫酸铜（ CuSO4· 5H2O）及 0.05g 次甲基蓝，溶于水中并 稀释至 1000mL。3. 碱性酒石酸铜乙液：称取 50g 酒石酸钾钠与 75g 氢氧化钠，溶于水中，再加入 4g 亚铁 氰化钾，完全溶解后，用水稀释至 1000 ml ，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。4. 乙酸锌溶液：称取 21.9 g 乙酸锌，加 3ml 冰乙酸，加水溶解并稀释至 100ml 。5. 亚铁氰化钾溶液：称取 10.6g 亚铁氰化钾，用水溶解并稀释至 100ml 。6. 葡萄糖标准溶液： 准确称取 1.0000g 经过 96± 2干燥 2h 的纯葡萄糖， 加水

5、溶解后加 入 5ml 盐酸，并以水稀释至 1000L 。此溶液相当于 1mg/ml 葡萄糖（注：加盐酸的目的是 防腐，标准溶液也可用饱和苯甲酸溶液配制） 。7. 果糖标准溶液：按操作，配制每毫升标准溶液相当于1mg 的果糖。8. 乳糖标准溶液：按操作，配制每毫升标准溶液相当于1mg 的乳糖。9. 转化糖标准溶液： 准确称取 1.0526g 纯蔗糖，用 100ml 水溶解， 置于具塞三角瓶中加 5ml 盐酸（ 1+1），在 6870水浴中加热 15min，放置至室温定容至 1000ml ，每 ml标准溶 液相当于 1.0mg 转化糖。、实验步骤1样品处理 乳类、乳制品及含蛋白质的食品： 称取约

6、2.50 5.00g 固体样品 （吸取 2550ml 液体样品） 置于 250 ml 容量瓶中，加 50 ml 水，摇匀。边摇边慢慢加入 5ml 乙酸锌溶液及 5ml 亚铁氢化钾 溶液，加水至刻度，混匀。静置 30 min ，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。（注意： 乙酸锌可去除蛋白质、鞣质、树脂等，使它们形成沉淀，经过滤除去。如果钙离子过多时，易与与钙结合,葡萄糖、果糖生成络合物， 使滴定速度缓慢； 从而结果偏低，可向样品中加入草酸粉, 形成沉淀并过滤。） 酒精性饮料：吸取 100ml 样品，置于蒸发皿中，用 1 mol/L 氢氧化钠溶液中和至中性，在水 浴上蒸发至原体积 1/4 后，

7、移入 250ml 容量瓶中，加水至刻度。 含多量淀粉的食品：称取 10.00 20.00g 样品，置于 250ml 容量瓶中，加 200ml 水，在 45 水浴中加热 1h，并时时振摇（注意：此步骤是使还原糖溶于水中，切忌温度过高，因为淀粉在 高温条件下可糊化、 水解，影响检测结果。 ）。冷后加水至刻度， 混匀，静置， 沉淀。 吸取 200ml 上清液于另一 250ml 容量瓶中，慢慢加入 5ml 乙酸锌溶液及 5ml 亚铁氢化钾溶液，加水至刻度， 混匀，沉淀，静置 30 min ，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。 汽水等含有二氧化碳的饮料：吸取 100ml 样品置于蒸发皿中，在水浴上除

8、去二氧化碳后，移 入 250ml 容量瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀后备用。 （注 意：样品中稀释的还原糖最终浓度应接近于葡萄糖标准液的浓度。）2. 标定碱性酒石酸铜溶液：吸取 5.0ml 碱性酒石酸铜甲液及 5.0ml 乙液，置于 150ml 锥形瓶中 （注意： 甲液与乙液混合可生成氧化亚铜沉淀， 应将甲液加入乙液， 使开始生成的氧化亚铜沉淀 重溶），加水 10 ml ，加入玻璃珠 2 粒，从滴定管滴加约 9 ml 葡萄糖标准溶液或其他还原糖标 准溶液， 直至溶液兰色刚好褪去为终点， 记录消耗的葡萄糖标准溶液或其他还原糖标准溶液总体 积，平行操作三份，取其平均值

9、，计算每 10 ml（甲、乙液各 5 ml ）碱性酒石酸铜溶液相当于葡 萄糖的质量或其他还原糖的质量（ mg）。 （注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成 原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。）3. 样品溶液预测：吸取 5.0 ml 碱性酒石酸铜甲液及 5.0 ml 乙液，置于 150 ml 锥形瓶中，加水10 ml ，加入玻璃珠 2 粒，控制在 2 min 内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加 样品溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒 1 滴的速度滴定，直至溶液蓝色 褪去，出现亮黄色为终点。 如果样品液颜色较深， 滴定终

10、点则为兰色褪去出现明亮颜色 （如亮红） ， 记录消耗样液的总体积。 （注意：如果滴定液的颜色变浅后复又变深，说明滴定过量，需重新滴 定。） 当试样溶液中还原糖浓度过高时应适当稀释，再进行正式测定，使每次滴定消耗试样溶 液的体积控制在与标定碱性酒石酸酮溶液时所消耗的还原糖标准溶液的体积相近，约在 10ml 左 右。当浓度过低时则采取直接加入 10ml 样品溶液，免去加水 10ml ，再用还原糖标准溶液滴定至 终点，记录消耗的体积与标定时消耗的还原糖标准溶液体积之差相当于 10ml 试样溶液中所含还 原糖的量。4. 样品溶液测定：吸取 5.0 ml 碱性酒石酸铜甲液及 5.0 ml 乙液，置于 1

11、50 ml 锥形瓶中，加水10 ml ，加入玻璃珠 2 粒，在 2 min 内加热至沸，快速从滴定管中滴加比预测体积少 1 ml 的样品 溶液， 然后趁沸继续以每两秒 1 滴的速度滴定直至终点。 记录消耗样液的总体积， 同法平行操作 两至三份，得出平均消耗体积。5. 计算 样品中还原糖的含量（以某种还原糖计）按下式计算。X=A/(m×V/250×1000)×100式中： X- 样品中还原糖的含量 (以某种还原糖计 ) ，单位 g/100g ；mg；A碱性酒石酸铜溶液（甲、乙液各半）相当于某种还原糖的质量，单位 m- 样品质量，单位 g ；V- 测定时平均消耗样品溶

12、液的体积，单位ml ；计算结果保留小数点后一位。注意： 滴定结束，锥形瓶离开热源后，由于空气中氧的氧化，使溶液又重新变蓝，此时不应再滴定。（二）高锰酸钾滴定法? 原理 将样液与一定量过量的碱性酒石酸铜溶液反应， 还原糖将二价铜还原为氧化 亚铜，经过滤，得到氧化亚铜沉淀，加入过量的酸性硫酸铁溶液将其氧化溶解，而 三价铁盐被定量地还原为亚铁盐，用高锰酸钾标准溶液滴定所生成的亚铁盐，根据 高锰酸钾溶液消耗量可计算出氧化亚铜的量，再从检索表中查出氧化亚铜量相当的 还原糖量，即可计算出样品中还原糖含量。（三）硫酸苯酚法、原理糖在浓硫酸作用下，脱水形成的糠醛和羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在

13、10-100mg 范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm 波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵 敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定 160min 以上。多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生 成橙黄色化合物。再以比色法测定。、试剂1 浓硫酸：分析纯， 95.5%2 80%苯酚： 80 克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20 克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。3 6%苯酚：临用前以 80%苯酚配制。（ 每次测定均需现配 ）4 标准葡聚糖（ Dextran, 瑞典 P

14、harmacia ） , 或分析纯葡萄糖。5 15%三氯乙酸（ 15%TCA）： 15 克 TCA加 85 克水使之溶解，可置冰 箱中长期储存。6 5%三氯乙酸（ 5%TCA）：25 克 TCA加 475 克水使之溶解，可置冰箱 中长期储存。7 6mol/L 氢氧化钠： 120 克分析纯氢氧化钠溶于 500ml 水。8 6mol/L 盐酸、操作。1制作标准曲线：准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg 于 500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4 、0.6 、0.8 、1.0 、1.2 、1.4 、1.6及 1.8ml, 各以蒸馏水补至 2.0ml ，然后加入 6%苯酚 1.0ml 及浓硫

15、酸 5.0ml, 摇匀冷却，室温放置 20 分钟以后于 490nm 测光密度，以 2.0ml 水按同样显 色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。2样品含量测定：取样品 1 克（湿样）加 1ml 15%TCA 溶液研磨，再加少许 5TCA溶 液研磨，倒上清液于 10 毫升离心管中，再加少许 5 TCA溶液研磨，倒上 清液，重复 3 次。最后一次将残渣一起到入离心管。注意：总的溶液不要超出 10 毫升。 （既不要超出离心管的容量）。 离心，转速 3000 转 / 分钟，共三次。第一次 15 分钟，取上清液。后 两次各 5 分钟取上清液到 25 毫升锥形比色管中。最后滤液保

16、持 18 毫升左 右。（ 测肝胰腺样品时，每次取上清液时应过滤。因为其脂肪含量大容易 夹带残渣。 ）水浴，在向比色管中加入 2 毫升 6mol/L 盐酸之后摇匀，在 96水 浴锅中水浴 2 小时。定容取样。 水浴后， 用流水冷却后加入 2 毫升 6mol/L 氢氧化钠摇匀。 定容至 25 毫升的容量瓶中。吸取 0.2 ml 的样品液，以蒸馏补至 2.0ml ，然 后加入 6%苯酚 1.0ml 及浓硫酸 5.0ml, 摇匀冷却室温放置 20 分钟以后于 490nm测光密度。每次测定取双样对照。以标准曲线计算多糖含量。 、注意（ 1）此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条标准曲 线，颜

17、色持久。（ 2）制作标准线宜用相应的标准多糖， 如用葡萄糖， 应以校正系数 0.9 校正 g数。（3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标 准曲线的校正系数加以校正计算。（ 4）测定时根据光密度值确定取样的量。光密度值最好在0.1 0.3之间。比如：小于 0.1 之下可以考虑取样品时取 2 克，仍取 0.2ml 样品液， 如大于 0.3 可以减半取 0.1ml 的样品液测定。（四）蒽酮法、实验原理糖在浓硫酸作用下， 可经脱水反应生成糠醛和羟甲基糠醛， 生成的糠醛或羟甲基糠醛可 与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物， 在一定范围内， 颜色的深浅与糖的含量成正比， 故可用 于糖的测定。该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物， 不但可以测定戊糖和己糖， 而且可以测 所有的寡糖类和多糖类， 其中包括淀粉、 纤维素等 （因反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成 单糖而发生反应。 所以， 用蒽酮法测出的碳水化合物含量， 实际上是溶液中全部可溶性碳水 化合物总量。在没