小鼠骨髓微核试验 - 中山大学公共卫生学院实验教学中心网站

1、小鼠骨髓微核试验小鼠骨髓微核试验In vivo Mouse Bone Marrow Cytogenetics Test:Micronucleus Assay中山大学公共卫生学院中山大学公共卫生学院预防医学系预防医学系肖勇梅肖勇梅（一）目的（一）目的学习和掌握小鼠骨髓多染红细胞（学习和掌握小鼠骨髓多染红细胞（PCE）微）微核测定方法。核测定方法。（二）原理（二）原理微核（微核（micronucleus）大小相当于细胞直径大小相当于细胞直径1/201/5，呈圆形或杏，呈圆形或杏仁状，其染色与细胞核一致，在间期细胞中仁状，其染色与细胞核一致，在间期细胞中可以出现一个或多个。可以出现一个或多个。（二）

2、原理（二）原理微核实验可检测化学毒物或物理因素诱导产微核实验可检测化学毒物或物理因素诱导产生的生的染色体完整性改变染色体完整性改变和和染色体分离改变染色体分离改变两两种遗传学终点。种遗传学终点。凡能使染色体发生断裂或使染色体和纺锤体凡能使染色体发生断裂或使染色体和纺锤体联结损伤的化学物，都可用微核试验来检测。联结损伤的化学物，都可用微核试验来检测。（二）原理（二）原理有核细胞的胞质少，微核与正常核叶及核的突起难以有核细胞的胞质少，微核与正常核叶及核的突起难以鉴别。鉴别。嗜多染红细胞的主核已排出，胞质内含有核糖体，姬嗜多染红细胞的主核已排出，胞质内含有核糖体，姬姆萨染色呈灰蓝色；成熟红细胞（姆萨

3、染色呈灰蓝色；成熟红细胞（NCE）的核糖体已）的核糖体已消失，被染成淡桔红色。骨髓中嗜多染红细胞数量充消失，被染成淡桔红色。骨髓中嗜多染红细胞数量充足，微核容易辨认，而且微核自发率低，因此，骨髓足，微核容易辨认，而且微核自发率低，因此，骨髓中嗜多染红细胞成为微核试验的中嗜多染红细胞成为微核试验的首选细胞群首选细胞群。（三）器材与试剂（三）器材与试剂器材：器材： 手术刀、手术剪、无齿镊、小型弯止手术刀、手术剪、无齿镊、小型弯止血钳、干净纱布、带橡皮头吸管、晾片架、血钳、干净纱布、带橡皮头吸管、晾片架、玻璃蜡笔、玻璃染色缸、载玻片及推片、定玻璃蜡笔、玻璃染色缸、载玻片及推片、定时钟、带油镜头显微镜

4、、细胞计数器时钟、带油镜头显微镜、细胞计数器试剂：甲醇（分析纯）、甘油（分析纯）、试剂：甲醇（分析纯）、甘油（分析纯）、小牛血清、生理盐水、小牛血清、生理盐水、Giemsa贮备液、磷酸贮备液、磷酸盐缓冲液（盐缓冲液（pH6.8）阳性对照物：环磷酰胺或丝裂霉素阳性对照物：环磷酰胺或丝裂霉素C（四）操作步骤（四）操作步骤1.实验动物与处理实验动物与处理动物选择：常用大、小鼠动物选择：常用大、小鼠染毒途径：经口、经皮、经呼吸道、注射染毒途径：经口、经皮、经呼吸道、注射染毒次数及取样时间：染毒次数及取样时间：剂量选择：剂量选择：35个或更多剂量组个或更多剂量组2.骨髓微核观察的步骤骨髓微核观察的步骤骨

5、髓制取骨髓制取涂片涂片固定固定染色染色观察与计数观察与计数正染红细胞正染红细胞 嗜多染红细胞及微核嗜多染红细胞及微核正染红细胞正染红细胞嗜多染红细胞及微核嗜多染红细胞及微核染色太浅染色太浅（五）结果分析与评价（五）结果分析与评价 微核率指含有微核的嗜多染红细胞数，以千微核率指含有微核的嗜多染红细胞数，以千分率（分率（）表示）表示 若一个嗜多染红细胞中出现两个或两个以上若一个嗜多染红细胞中出现两个或两个以上微核，仍按一个有微核细胞计数微核，仍按一个有微核细胞计数（五）结果分析与评价（五）结果分析与评价正常的正常的PCE/NCE比值约为比值约为1（正常范围（正常范围0.61.2）；）；PCE/NC

6、E0.1，阴性对照组和阳性对照组的微核发生率阴性对照组和阳性对照组的微核发生率多种统计学方法（多种统计学方法（Poinsson分布、二项分布、分布、二项分布、X2检验等）均有人应用检验等）均有人应用（五）结果分析与评价（五）结果分析与评价注意：本实验的关键步骤是制作注意：本实验的关键步骤是制作良好的骨髓涂片及优质的染色。良好的骨髓涂片及优质的染色。 （六）试验报告（六）试验报告 受试物名称、理化性状、配制方法、所用溶剂受试物名称、理化性状、配制方法、所用溶剂动物种属和品系、体重、数量、性别、来源（注明合格证号和动动物种属和品系、体重、数量、性别、来源（注明合格证号和动物级别）物级别）实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度、实验动物实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度、实验动物室合格证号室合格证号剂量分组，染毒途径和方式剂量分组，染毒途径和方式试验方法：简述操作步骤，所用统计学方法，结果判定标准试验方法：简述操作步骤，所用统计学方法，结果判定标准结果：以列表方式报告受试物对动物骨髓细胞微核发生率（表结果：以列表方式报告受试物对动物骨髓细胞微核发生率（表1）结论结论组别组别动物数动物数受检细胞数受检细胞数含微核细含微核细胞数胞数微核率微核率P值值（只