实验方法汇总情况

1、实验方法汇总第一部分 水样的采集和储存第一节 进水取样用烧杯从进水箱中取样， 根据不同指标的测定频率确定取样量的大小， 从中 取约20mL水样过0.45um 滤膜后存于聚乙烯瓶中，标明取样日期后 4 C储存 于冰箱中用于硝氮、亚硝氮的测定；另取约 10mL 水样过玻璃纤维膜后用硫酸 调pH至小于2，存于玻璃试管中，标明取样日期后4 C储存于冰箱中用于TOC 的测定。其余水样用于 COD 、氨氮、色度、 pH 、总铁、蛋白质和多糖指标的测 定，测定 BOD 的当天取样量约 300mL 。第二节 出水取样用烧杯从出水口接取一定量水样，其它同进水。第三节 上清液取样将适量混合液用定性滤纸过滤， 取滤

2、液进行各项指标的测定， 具体同进水取 样，将过滤后余下的污泥倒回反应器（整个实验中，除测定 MLVSS 外，其它指标测定完毕后都要将污泥倒回反应器）0二水合四草酸钾1.67912.61gKH3C4O8?2H2 0氢氧化钙(25 oC 饱和)12.4541.5gCa(OH)2第二部分理化指标的测定方法第一节 DO、水温的测定采用溶解氧仪进行DO和水温的测定：将溶氧仪的电极与仪器连接并将电极 浸没入反应器混合液液面以下（每次的测定位置都固定在同一死角处并保证温度 感应部分也没入水面以下），打开溶解氧仪，调至显示 mg/L单位的状态下，待 读数稳定后记录下 DO和水温。测试完毕后关掉溶氧仪，拔下电极

3、依次用清水 和蒸馏水清洗后，用滤纸小心擦干电极后将溶氧仪放回固定位置处。第二节 pH的测定1. 仪器：pH计10mL小烧杯2试剂用于校准仪器的标准缓冲液，按pH标准溶液的配制中规定的数量称取 试剂，溶于25 0C水中，在容量瓶定容至1000ml、水的电导率应低于2卩S/cm 临用前煮沸数分钟，赶走二氧化碳，冷却。取 50ml冷却的蒸馏水，加1滴饱和 氯化钾溶液，测量pH值，如pH在67之间即可用于配制各种标准缓冲液。pH标准液的配制标准物质pH （25 oC） 每1000ml水溶液中所含试剂的质量（25 0C）基本标准酒石酸氢钾（25 oC饱和）3.5576.4gKHC 4H4O6°

4、柠檬酸二氢钾3.77611.41gKH2C6H5O7邻苯二甲酸氢钾4.00810.12gKHC8H4O4磷酸二氢钾+磷酸氢二钠6.8653.388gKH2PO4 +3.533gNa2HPO4 3)磷酸二氢钾+磷酸氢二钠7.4131.179gKH 2PO4 +4.302gNa2HPO4 3)四硼酸钠9.1803.80gNa2B407?l0H20 碳酸氢钠+碳酸钠10.0122.92gNaHCO3+2.64gNa2CO3辅助标准注：近似溶解度在1001300C烘干2h (3)用新煮过并冷却的无二氧化碳水(4)烘干温度不可超过60oCo3. 步骤3.1打开pH计，预热30分钟，将标准缓冲液和待测水样

5、分别倒入小烧杯，将仪器温度补偿旋钮调至待测水样温度处，选用与水样pH值相差不超过2个pH单位的标准溶液校准仪器。从第一个标准溶液中取出电极，彻底冲洗， 并用滤纸吸干。再浸入第二个标准溶液中，其pH值约与第一个相差3个pH 单位，如测定值与第二个标准溶液pH值之差大于0.1pH单位时，就要检查 仪器、电极或标准溶液是否有问题。当三者均无异常时方可测定水样。3.2水样的测定：先用蒸馏水仔细冲洗电极，再用待测样清洗，然后将电极浸入水样中，小心搅拌或摇动，待读数稳定后记录pH值。使用完毕后关掉仪第三节色度的测定一稀释倍数法1. 仪器：50mL具塞比色管2. 步骤：2.1 取约100mL澄清水样于烧杯中

6、，以白色瓷板为背景，观察并描述其颜 色种类。2.2比色管底部衬一白瓷板，取澄清的水样 1mL至比色管中，加水至标线， 此时的稀释倍数为50倍，以蒸馏水做对照，由上至下观察其颜色，若为无 色，则减小稀释倍数；若仍有颜色则继续稀释，直至刚好看不出颜色，记录此时的稀释倍数第四节 COD 的测定重铬酸钾法1. 仪器：具密封塞的消解管 恒温定时加热装置 分光光度计2. 试剂硫酸汞1mol/L 重铬酸钾溶液：准确称取120 oC烘干2小时的重铬酸钾24.515g ,用少量水溶解后，移入 500mL 容量瓶中，用水稀释至标线， 摇匀。硫酸-硫酸银溶液：称取 5g 硫酸银溶于 500mL 硫酸中。邻苯二甲酸氢

7、钾标准储备液（ 5000mg/L ）：将邻苯二甲酸氢钾（基准级或优级纯）在105 oC下干燥至恒重后，称取2.1274g邻苯二甲酸氢钾溶于 250mL 水中，将此溶液转移至 500mL 容量瓶中， 加水至标线，摇匀， 4oC 保存。邻苯二甲酸氢钾标准系列使用液：量程分别为100mg/L 、200mg/L 、400mg/L 、600mg/L 、800mg/L 、1000mg/L 。分别取 5mL 、 10mL 、20mL 、30mL 、40mL 、50mL 的标准储备液加入到 相应的 250mL 容量瓶中，加水至标线，摇匀， 4oC 保存。3. 步骤3.1 打开恒温加热器升温至预设的 150 o

8、C.3.2 水样的测定：向消解管中依次加入 0.04g 硫酸汞、 0.75mL1mol/L 的重铬 酸钾溶液、 2.25mL 硫酸-硫酸银溶液和 2mL 待测样品（若浓度超过 1000mg/L 需稀释后取样） ,密封混匀后放入加热槽中计时加热 2h 后，取出消解管冷却至室温，用 10mm 比色皿在波长 600nm 处以蒸馏水为参比测定吸光度。测定的 COD 值由相应的标准曲线查得。用水代替水样按上述步骤消解后测定吸光度。3.3 标准曲线的绘制： 标准使用溶液 COD 值对应其测定的吸光度值减去空白实 验测定的吸光度值的差值，绘制标准工作曲线。量程为 0-1000mg/L.第五节 氨氮的测定水酸

9、比色法1. 仪器：分光光度计 10mL 比色管2. 试剂显色液：称取 25g 水酸，加入约 50mL 水，再加入 16mL10mol/L 的 NaOH 溶液搅拌至完全溶解。另取 25g 酒石酸钾钠溶于水中，与上述溶液合并稀释 至 500mL ，存放于棕色瓶中，可至少稳定一个月，若水酸未完全溶解，可再 加入数毫升 NaOH 至完全溶解为止。NaClO 溶液：取 0.35mLNaClO 、0.72375mL10mol/L的 NaOH ，定容至10mL ，存放于棕色滴瓶中，此溶液有效期为一周。亚硝基铁氰化钠溶液：称取 0.1g 亚硝基铁氰化钠于 10ml 比色管中，加水稀 释至标线，此溶液现用现配。

10、氨标准储备溶液：称取3.819g经100 C干燥过的优级纯氯化氨溶于水中，移入 1000mL 容量瓶中，稀释至标线。此溶液每毫升含 1.0mg 氨氮。氨标准中间溶液：吸取 10.00mL 氨标准储备溶液移入 100mL 容量瓶中，加 水至标线，此溶液每毫升含 0.1mg 氨氮。氨标准使用溶液：吸取 10.00mL 氨标准中间溶液移入 1000mL 容量瓶中，加水至标线，此溶液每毫升含 1ug 氨氮3. 测定步骤3.1 水样的测定：取适量经预处理后的水样 1mL （使氨氮含量不超过 8ug ）至 10mL 比色管中，加水至约 8mL ，加入 1mL 显色液、 2 滴亚硝基铁氰化钠， 混匀，再滴加

11、 2 滴 NaClO 溶液，稀释至标线，充分混匀，放置一小时后， 在波长 697nm 处，用 10mm 比色皿，以水为参比测定吸光度。 空白样用蒸馏水按同样步骤做，扣去空白吸光度后代入计算。3.2 标准曲线的绘制：分别吸取 0、1.0 、2.0 、4.0 、6.0 、8.0mL 氨标准使用液 于 10mL 比色管中，按与水样测定相同步骤测定吸光度， 绘制标准工作曲线。第六节 亚硝酸盐氮和硝酸盐氮的测定离子色谱法1. 仪器离子色谱仪（具有分离柱、抑制柱或抑制膜、抑制器） 。 检测器，记录仪或数据处理系统。进样器。淋洗液及再生液贮罐2. 试剂实验用水均为电导率小于 0.5 yS/cm的二次去离子水

12、，并经0.45 pm的微孔 滤膜过滤。所用试剂均为优级纯试剂。 淋洗贮备液：分别称取25.44g碳酸钠和26.04g碳酸氢钠（均已在105 C 烘干 2h ，干燥器中冷却），溶解于水，移入 1000ml 容量瓶中，用水稀释 到标线，摇匀。 贮存于聚乙烯瓶中，在冰箱中保存。碳酸钠浓度（ Na 2CO3）为 0.24mol/L ；碳酸氢钠（ NaHCO 3）为 0.31mol/L 淋洗使用液：取 20.00ml 淋洗储备液置于 2000ml 容量瓶中，用水稀释到 标线，摇匀。此溶液碳酸钠浓度为（ Na 2CO 3）为 0.0024mol/L ；碳酸氢 钠（ NaHCO 3）为 0.0031mol/

13、L 。 氟离子标准贮备液： 称 2.2100g 氟化钠（在 105 °C 烘干 2h ，干燥器中冷却） 溶于水，移入 1000 毫升容量瓶中，加入 10.00ml 淋洗贮备液，用水稀释 至标线，贮于聚乙烯瓶中，置于冰箱。此溶液每毫升含 1.00mg 氟离子。 氯离子标准贮备液：称取 1.6484g 氯化钠（在 105 °C 烘干 2h ，干燥器中冷 却）溶于水，移入 1000 毫升容量瓶中，加入 10.00 淋洗贮备液，用水稀 释至标线，贮于聚乙烯瓶中，置于冰箱。此溶液每毫升含 1.00mg 氯离子。 溴离子标准贮备液：称取 1.2879g 溴化钠（在 105 °

14、C 烘干 2h ，干燥器中冷 却）溶于水，移入 1000 毫升容量瓶中，加入 10.00 淋洗贮备液，用水稀 释至标线，贮于聚乙烯瓶中，置于冰箱。此溶液每毫升含 1.00mg 溴离子。 亚硝酸根离子标准贮备液：称取 1.4998g 亚硝酸钠（干燥器中干燥 24h ） 溶于水，移入 1000 毫升容量瓶中，加入 10.00ml 淋洗贮备液，用水稀释 至标线，贮于聚乙烯瓶中，置于冰箱。此溶液每毫升含 1.00mg 溴离子。 磷酸根离子标准贮备液：称取 1.495g 磷酸氢二钠（干燥器中干燥 24h ）溶 于水，移入 1000 毫升容量瓶中，加入 10.00ml 淋洗贮备液，用水稀释至 标线，贮于聚

15、乙烯瓶中，置于冰箱。此溶液每毫升含 1.00mg 磷酸根。 硝酸离子标准贮备液：称取 1.3703g 硝酸钠（干燥器中干燥 24h ）溶于水， 移入 1000 毫升容量瓶中，加入 10.00ml 淋洗贮备液，用水稀释至标线， 贮于聚乙烯瓶中，置于冰箱。此溶液每毫升含 1.00mg 硝酸根。 硫酸根离子标准贮备液：称取 1.8142g 硫酸钾（在 105 °C 烘干 2h ，干燥器中冷却）溶于水，移入 1000 毫升容量瓶中，加入 10.00ml 淋洗贮备液，用水稀释至标线，贮于聚乙烯瓶中，置于冰箱。此溶液每毫升含 1.00mg 硫酸根。 混合标准使用液：可根据被测样品的浓度围配制混合

16、标准使用液。如：吸取F- 3.00ml ，Cl- 4.00ml ，Br- 10.00ml ，NO 2- 10.00ml ，NO3- 30.00ml ， PO43- 50.00ml ，SO42- 50.00ml 于 1000ml 容量瓶中，加入 10.00ml 淋 洗贮备液，用水稀释至标线。 F-、Cl-、Br-、NO 2-、NO 3-、 PO 43- 、SO 42- 浓度分别为 3mg/L ，4mg/L ，10mg/L ，10mg/L ，30mg/L ，50mg/L ， 50mg/L 。再生液：取硫酸 1.39ml 于 2000ml 容量瓶中（瓶中有少量水） ，用水稀释到 标线3. 步骤仪器操

17、作按仪器的使用说明书进行。 样品保存及预处理样品采集后均经0.45阿 微孔滤膜过滤，保存于聚乙烯瓶，置于冰箱中， 使用前将样品和淋洗贮备液按（ 99 1）体积混合，以除去负峰干扰。 校准曲线分别取 2.00 、5.00 、10.00 、50.00ml 混合标准液于 100ml 容量瓶中， 再分别加 1.00ml 淋洗贮备液，用水稀释到标线，摇匀。用测定样品相同的 条件下测定，绘制校准曲线。 样品测定色谱条件：淋洗使用液流速为2.5ml/min，进样量为100 pl，电导检测器灵 敏度根据仪器情况选择。 定性分析：根据各离子的出峰保留时间确定离子种类。定量分析：测定未知样的峰高，从校准曲线查得其

18、浓度。4. 注意事项 用淋洗液配置标准溶液和稀释样品， 可除去水的负峰干扰， 使定量更加准确。 样品经25mm、0.45mm 滤膜过滤，用以去除样品中颗粒物，以防沾污色谱柱。 淋洗液经150mm、0.45mm 微孔滤膜过滤，用5000ml滤瓶承接，这样过滤速度快，时间短。 整个系统不能有气泡，否则会影响分离效果。 其他型号的离子色谱仪可参照本方法自行选择色谱条件。试液中离子浓度更低或更高，可选择电导检测器的不同灵敏度档。 作校准曲线和测定样品应在同一灵敏度下进行。 因试剂、器皿或者样品的预处理可引入污染干扰测定，因此要特别注意防止污染。第七节 BOD 5测定方法 WTW BOD 5测定仪1.

19、仪器: WTW BOD 5测定仪 恒温培养箱2. 试剂磷酸盐缓冲液：将 0.85gKH 2PO4、2.175gK 2HPO4、3.34gNa 2 HPO 4.7H2O 和 0.19g NH 4CI 稀释至 100mL。硫酸镁溶液：2.25g MgSO 4 - 7H2O 稀释至100mL 。氯化钙溶液：3.64g CaCI 2 - 2H 2O稀释至100mL 。硫酸亚铁溶液：0.025gFeSO 4 - 7H 2O稀释至100mL 。接种稀释水：每升蒸馏水中加入10mL生活污水，上述四种盐溶液各1mL作 为接种稀释水。NTH硝化抑制剂NaOH药丸3. 测定步骤3.1对于工业废水，根据下表确定合适

20、的稀释倍数（对于未知样品，BOD按测得的COD的0.8倍估算）。3.2将一定量的稀释后的样品装入 BOD测试瓶中，加入搅拌转子，滴加相应 体积的硝化抑制剂NTH，用镊子向橡胶套中加入 2粒NaOH药丸（注 意防止进水）。3.3将感测头旋紧在测量瓶上，按下 S+M键清零，连同搅拌底座一起放入恒 温培养箱在20 °C下恒温培养五天，仪器每天自动记录读数。3.4五天后，取出测试瓶，按下 M显示当前读数，S显示每天存储的读数。 根据下表确定测试结果。预期BOD5(mg/L )稀释倍数（倍）水样体积（mL ）稀释后体积（mL）测试时取样体积（mL）仪器系数测试结果（mg/L ）0-802250

21、500432+8.64 滴NTH11 X2 XM80-4002125250250+5滴NTH52 X5 XM400-1000550250250+5滴NTH55 X5 XM1000-20001025250250+5滴NTH510 X5 XM第八节总铁的测定一邻菲啰啉分光光度法1. 仪器：分光光度计 150mL锥形瓶 50mL比色管2. 试剂（1+3 ）盐酸10%盐酸羟胺溶液缓冲溶液：40g乙酸铵加50mL冰乙酸用水稀释至100mL0.5%邻菲啰啉溶液：加数滴盐酸帮助溶解饱和乙酸钠铁标准储备液：准确称取 0.7020g硫酸亚铁铵溶于（1+1 ）硫酸50mL中并 转移至1000mL容量瓶中，加水至标

22、线，摇匀，此溶液每毫升含 100ug铁。 铁标准使用液：移取25.00mL铁标准储备液于100mL容量瓶中，加水至标 线，摇匀，此溶液每毫升含25.0ug铁。3. 测定步骤3.1水样的测定：取样后立即将样品用盐酸酸化至pH<1，分析时取50mL混匀水样（浓度不超过5mg/L，否则要稀释），加（1+3 ）盐酸、盐酸羟胺各1mL，加热煮沸至15mL左右，若仍有沉淀应过滤除去，冷却至室温，定量 转至 50mL 具塞比色管中，加刚果红试纸， 滴加饱和乙酸钠至试纸刚好变红， 加入 5mL 缓冲液、 0.5% 邻菲啰啉 2mL ，加水至标线，摇匀，显色 15 分钟 后，用 10mm 比色皿在 510

23、nm 处测定吸光度，若水样有底色，可用不加 邻菲啰啉的试液做参比，对底色进行校正。3.2 标准曲线的绘制：分别移取 0.00 、2.00 、4.00 、6.00 、8.00 、10.0mL 铁 标准使用液于 150mL 锥形瓶中，加水至 50mL ，按与水样相同步骤处理后 测定吸光度并绘制标准工作曲线。第三部分 常规生物学指标的测定第一节 异养菌计数 MPN 法1. 培养基 的配制葡萄糖 5g, 蛋白胨 5g 磷酸氢二钾 5g 蒸馏水 1000ml ，pH7.2-7.4 。2将配制好的培养基分装于试管中，每个试管装9mL,121 C蒸汽下灭菌20min ，备用。3. 取用超声波打碎絮体的污泥悬

24、浊液 1 mL （或电磁搅拌 30min ），用配好的培 养基逐级稀释到 10-1 、10-2 、10-3 、10-4 、10-5 、10-6 、 10-7 、10-8 、 10-9 、10-10 ，并用空白对照培养管（向上面装有培养基的试管接种 1mL 无菌水）。同时各再做两个平行样。4. 37 °C下恒温培养两天后，取出观察颜色是否变浑浊，若变浑浊则表明异养菌 的存在。5. 根据结果查表确定数量指标， 换算成每毫升污泥样所含的最大可能异养菌数第二节 亚硝化菌计数1. 培养基 的配制将硫酸铵2g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，氯化钠2g，硫酸亚铁0.4g溶 于 1000mL 蒸馏

25、水中，按 0.5% 比例加入碳酸钙或碳酸镁，调节 pH 至 7.2.2将配制好的培养基分装于试管中，每个试管装9mL,121 C蒸汽下灭菌20min ，备用。3. 取用超声波打碎絮体的污泥悬浊液 1 mL （或电磁搅拌 30min ），用配好的培 养基逐级稀释到 10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9、 10-10，并用空白对照培养管（向上面装有培养基的试管接种 1mL 无菌水）。 同时各再做两个平行样。4. 在28 C恒温生物培养箱培养30天后，在白色比色板的凹窝滴加3滴锌-碘- 淀粉液，加入适量的 20% 硫酸，加培养液 2 滴，如有 NO

26、 2- 存在，立即出现 蓝色，这说明亚硝化菌的存在。5. 根据上面的结果查表确定数量指标，换算成每毫升污泥样所含的最大可能菌数。第三节 硝化菌计数1. 培养基 的配制将无水碳酸钠1.0g，亚硝酸钠1.0g，七水合硫酸镁0.5g，氯化钠0.5g， 七水和硫酸亚铁 0.4g ，磷酸氢二钾 0.5g 溶于 1000mL 蒸馏水中配成溶液， 调节 pH 至7.2。2. 将上述培养基分装于试管中，每个试管装9mL,121 °C蒸汽下灭菌20min，备用3. 取用超声波打碎絮体的污泥悬浊液 1mL （或电磁搅拌 30min ），用配好的培 养基逐级稀释到 10 -1 、 10 -2 、10 -3

27、 、10 -4 、10 -5 、10 -6 、10 -7 、 10 -8 、10 -9 、 10 -10 ，并用空白对照培养管（向上面装有培养基的试管接种 1mL 无菌水）。 同时各再做两个平行样。4. 在28 C恒温生物培养箱培养30天后，根据亚硝酸盐的消失，硝酸盐的形成， 可验证细菌硝化作用过程第二阶段的存在。亚硝酸盐的消失可用格里斯 （Griess ）试剂测定：将甲、乙液各 2 滴滴于白瓷盘的凹窝，再加待测培养 液1 滴，如果亚硝酸盐被氧化完毕，则颜色不变，证明了硝化细菌的存在。 也可将新鲜无接种的培养液作对照，这时未接种培养液反应为红色，即有亚 硝酸盐的存在。 硝酸盐的鉴定： 在白瓷盘

28、的凹窝中加 20% 浓硫酸和二苯胺试 剂各 2 滴，如果出现蓝色则说明亚硝酸盐培养基在硝化细菌的作用下已被氧 化成硝酸盐，另外用未接种培养基作对照。5. 根据上面结果查表确定数量指标，换算成每毫升污泥样所含最大可能菌数。附：试剂配制：1. 锌-碘-淀粉试剂的配法：将 25g 氯化锌溶于 25 毫升蒸馏水中， 1g 淀 粉溶于少量水，两液混合煮沸至淀粉溶解后，加入 0.5g 碘化锌，蒸馏 水加至 250 毫升即成（制成的溶液应是无色的） ，保存于棕色瓶中待用。2. 奈氏试剂的配制：奈氏试剂也称氨试剂，为碘化汞与碘化钾复盐（Hg .2KI ）的碱性溶液，配法如下：a .甲液：碘化钾 10g 、蒸馏

29、水 100 毫升、碘化汞 20g 。b. 乙液：氢氧化钾 20g 、蒸馏水 100 毫升。分别按上列配方制备甲、 乙两液，待冷后， 将两液混合保存于暗色瓶中备用，为加速溶解，碘化汞可预先放在研钵中加几滴碘化钾研碎。3. 格里斯试剂的配制：a.甲液：对氨基苯磺酸（磺胺酸）0.8g , 5N醋酸（1份醋酸加2.5份水） 100mL ，配制时不能加热溶解；b.乙液：a-萘胺0.5g , 5N醋酸100ml.，加热溶解。同时把甲、乙两液等量混合，但混合液不能较长时间保存。4. 二苯胺试剂配法：二苯胺 1.0g 溶于 20 毫升蒸馏水中，然后徐徐加入浓硫酸 100 毫升即成，保存在棕色瓶中。第四节 胞外

30、聚合物（EPS）的提取和测定1 胞外聚合物的 EDTA 提取法将浓度为2%的EDTA溶液10ml加入10ml污泥样品中，在4 C下放置3h , 然后在4 °C下，14000rpm 下离心20min，弃掉沉积物。通过测定蛋白质和糖类的含量来表示 EPS 的含量。其中，糖类采用蒽酮试剂 法，蛋白质采用考马斯亮蓝比色法。2 糖类蒽酮比色法2.1 实验原理强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛与蒽酮试剂脱水缩合 形成糠醛的衍生物呈蓝绿色， 该物质在 620nm 处有最大吸收。在 10-100ug30ug围其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。该方法灵敏度高，糖含量在左右即可测定。2.2

31、试剂100ug/ml 葡萄糖标准液高纯度浓硫酸蒽酮试剂0.1g蒽酮溶于100ml浓硫酸中，当日配制使用23实验步骤2.3.1葡萄糖标准曲线的绘制取七支大试管，按照下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液管号1234567葡萄糖标液（ml）00.10.20.30.40.60.8蒸馏水（ml）10.90.80.70.60.40.2葡萄糖含量（ug）0102030406080在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4ml，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水中，管口加盖玻璃塞以防蒸发。自水浴重新煮沸起准确计时10min 取出，用流水冷却，室温放置 10min，在620nm 处比色，以标准葡萄糖含量作纵坐

32、标，以吸光值作横坐标，作出标准曲线。232样品的测定方法同标准曲线做法。3蛋白质一一考马斯亮蓝比色法3.1实验原理考马斯亮蓝法是根据蛋白质和染料相结合的原理设计的蛋白质测定方法。该方法优于双缩脲法和Folin-酚法，是目前广泛应用的方法。考马斯亮蓝和蛋白质通过德瓦尔键结合，在一定的蛋白质浓度围，蛋白质和染料结合符合比 尔定律。此染料在酸性溶液中与蛋白质中的碱性氨基酸特别是精氨酸和芳香 族氨基酸残基相结合，与蛋白质结合后颜色由红色转变为蓝色，最大吸收波 长由465nm 变为595nm，通过测定595nm 处吸收可知与其结合的蛋白 质的含量。该方法灵敏度高，重现性好。3.2试剂3.2.1 考马斯亮蓝 G-250试剂：100mg 考马斯亮蓝 G-250溶于50mL95% 乙醇中，加入100mL85% 磷酸，用