庚型肝炎病毒E2抗体的检测及其临床意义

1、    庚型肝炎病毒E2抗体的检测及其临床意义        目前多采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增方法检测肝炎病人血清中的庚型肝炎病毒(HGV)，此技术需要病毒在血液中存在时才会出现阳性结果，同时临床也需要通过特异性免疫测定方法来跟踪感染及恢复过程。由于GBV-C在培养中不能成功地获得，没有天然抗原可供血清学检测之用，近年来国外一种GBV-C E2蛋白被克隆并在CHO细胞中成功地表达，这种分泌型E2蛋白被纯化后在固相ELISA中应用，可用于确定人群血清GBV-C

2、E2抗体水平、探讨这种抗体的产生在庚型肝炎临床流行病学中的意义。我们对18例庚型肝炎病毒感染患者血清进行了检测。 1材料和方法1.1研究对象选择1998年3月1999年3月在解放军302医院住院的庚型肝炎病毒感染患者(均两次以上HGV RNA阳性)，其中男性15例，女性3例，平均年龄(37±4.8)岁，入院后每12周留取1次血清，共留取血清43份，统一检测HGV E2抗体。1.2检测方法检测试剂购自302医院科卫试剂厂。检测程序：用50 mmol/L pH9.6碳酸盐缓冲液稀释抗原至工作浓度，包被丹麦产NUNC反应板，50 l/孔，置37 2 h，甩干，每孔加封闭液100 l，37

3、1 h，甩干，加血清稀释液100 l，血清标本5 l，设空白对照1孔，阴、阳性对照各2孔，37 30 min，洗板，加TMB底物A、B液各1滴，37显色10 min，加终止液1滴终止反应，经酶联仪测吸光度(450 nm)A值，以标本A值大于等于临界值为阳性，反之为阴性。临界值0.1×PN。2结果18例患者中有9例(27份血清)HGV E2抗体阳性，其阳性率为50%，抗体出现后其滴度呈明显逐渐增高趋势。见表1。4例急性庚型肝炎情况见表2。表118例庚肝患者病型及感染情况病型例数 (%)抗-HGV E2阳性数急性肝炎4(22.22)3G3G+A1慢性肝炎5(27.78)1G+B3G+A+

4、B1G+B+E1慢重肝，肝硬化9(50.0)5G+B8G+酒精肝1合计189     3讨论 我们通过对18例庚型肝炎患者的研究发现：单纯HGV感染可致肝功损害，表现单项ALT增高，但恢复快，预后好，E2抗体出现时间为发病后的26周左右，E2抗体出现同时或1周左右，HGV RNA阴转，本研究尚未见单纯HGV感染所致慢性肝炎病例。急性HGV合并甲型肝炎病毒感染可使肝功损害明显加重，且可能影响E2抗体的表达以及疾病的恢复，由此也看出E2抗体可成为疾病康复的指标之一1，2。从表1中可以看出HGV感染患者中，慢重肝及肝硬化患者明显多于急慢性肝炎，提示随病情加重及

5、病程延长，HGV重叠感染率可能有所升高。另外，从研究中也发现，在慢重肝及慢性肝炎乙/庚重叠感染患者中，随着E2抗体的出现往往伴随HGV RNA阴转，但未见伴随肝功能的改善，考虑乙型肝炎病毒仍为影响疾病的主要因素。总之，从本文研究发现E2抗体与HGV RNA两项指标呈明显的负相关，此与国外文献报道一致3。此项检测项目有较高的特异性和敏感性，且不受血清保存时间的影响，但由于本文例数较少，需今后进一步继续观察其临床意义。表2急性庚肝抗-HGV E2及临床恢复情况病例 编号病型发病后E2抗体出现时间(d)抗-HGV E2出现后HGV RNA阴转时间(d)ALT最高值(U/L)血清胆红素(mol/L)临

6、床治愈时间(d)1单纯急性庚肝177438正常242单纯急性庚肝40同时293正常433单纯急性庚肝217208正常304急性庚肝+甲肝-持续阳性50042890     作者单位：张文瑾（解放军302医院感染六科北京100039）朱传琳（解放军302医院感染六科北京100039）夏杰（解放军302医院感染六科北京100039）刘洪（解放军302医院感染六科北京100039）李力（解放军302医院感染六科北京100039）王惠芬（解放军302医院感染六科北京100039） 参考文献1，Gutierrez RA,Dawson GJ, Mushahwar I

7、K,et al. ELISA for detection of antibody to the E2 protein of GB virus C. J Virol Methods,1997,69：1-6.2，Tacke M,Kiyosawa K,Stark K,et al. Detection of antibodies to a putative hepatitis G virus envelope protein.Lancet,1997,349：318-320.3，Tacke M,Schmolke S,Schlueter V,et al.Humoral immune response to the E2 protein of hepatitis G virus in associated with long-term recovery from infection a