实验室常用培养基的配制方法.

1、组份浓度配制量配制方法五、实验室常用培养基的配制方法Ampicillin( 氨卡青霉素 )(100 mg/ml)组份浓度100 mg/ml Ampicillin配制量50 ml配制方法1.称量 5 g Ampicillin 置于 50 ml 离心管中。2.加入 40 ml 灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。3.用 0.22m 过滤膜过滤除菌。4.小份分装 (1 ml/ 份)后， -20保存。IPTG( 异丙基 - -D-硫代半乳糖苷 ) (24 mg/ml)24 mg/mL IPTG50 mL1.称 1.2 g IPTG 置于 50 ml 离心管中。2.加入 40 ml 灭菌水，充分混

2、合溶解后，定容至50 ml。3.用 0 22m 过滤膜过滤除菌。4 小份分装 (1 ml ，份 )后， -20保存。X-Gal (20 mg/ml)组份浓度20 mg/ml X-Gal配制量50 ml配制方法1.称量 l g X-Gal 置于 50 ml 离心管中。2.加入 40 ml DMF( 二甲基甲酰胺 )，充分混合溶解后，定容至 50 ml。3.小份分装 (1 ml/ 份)后， -20避光保存。LB 培养基1%(W/V)Tryptone( 胰蛋白胨 ) ，0.5%(W/V)Yeast Extract(酵母提取物 )，组份浓度1%(W/V)NaCl配制量1 L配制方法1.称取下列试剂，置

3、于 l L 烧杯中。Tryptone10 gYeast Extract5 gNaCl10 g2.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加 5 N NaOH(约 0.2 m1)，调节 pH 值至 7.0。4.加去离子水将培养基定容至1 L。5 高温高压灭菌后， 4。 C 保存。LB/Amp 培养基组份浓度1%(W/V)Tryptone0.5%(W/V)Yeast Extract1%(W/V)NaCl0.1 mg/mlAmpicillin配制量1 L配制方法1.称取下列试剂，置于 l L 烧杯中。Tryptone10 gYeast Extract5 gNaCl10 g2.加入约 8

4、00 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加 5 N NaOH(约 0.2 mL)。调节 pH 值至 7.0。4.加去离子水将培养基定容至 1 L。5.高温高压灭菌后，冷却至室温。6.加入 1 ml Ampicillin(100 mg/ml) 后均匀混合。7.4保存。TB 培养基组份浓度1.2%(W/V)Tryptone2.4%(W/V)Yeast Extract0.4%(V/V)Glycerol17mMKH 2PO472mMK2HPOa配制量1.L配制方法1.配制磷酸盐缓；中液(0.17 M KH 2，24。PO40.72 M K HPO )100 ml溶解 2.31 g KH2 PO4和

5、 l2.54 g K 2HPO4 于 90 ml 的去离子水中，搅拌溶解 后，加去离子水定容至100 ml，高温高压灭菌。2.称取下列试剂，置于 l L 烧杯中。Tryptone12 gYeast Extract24 gGlycerol4 m3.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。4.加去离子水将培养基定容至1 L 后，高温高压灭菌。5.待溶液冷却至 60以下时，；加入 100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲液。6.4保存。TB/Amp 培养基组份浓度1.2%(W/V)Tryptone2.4%(W/V)Yeast Extract0.4%(V/V)Glycerol17 mMKH 2PO4

6、72 mMK 2HPO40.1 mg/mlAmpicillin配制量1 L配制方法1.配制磷酸盐缓冲液 (0.17 M KH 2PO4，0.72 M K 2HPO4)100 ml。溶解 2.31 g KH2PO4 ,和 12.54g K2HPO4 于 90 ml 的去离子水中， 搅拌溶解后，加去离子水定容至100 ml，高温高压灭菌。2.称取下列试剂，置于l L 烧杯中。TryptoneYeast ExtractGlycerol12 g24 g4 ml3.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。4.加去离子水将培养基定容至l L 后，高温高压灭菌。5.待溶液冷却至 60以下时， 加入

7、100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲液。6.均匀混合后4保存。SOB 培养基组份浓度2%(W/V)0.5%(W/V)0.05%(W/V)2.5mM10 mMTryptoneYeast ExtractNaClKClMgCl 2配制量1 L配制方法1.配制250 mM KCl溶液。在 90 ml 的去离子水中溶解 l.86 g KCl 后，定容至 100 ml。2.配制 2 M MgCl 2 溶液。在 90 ml 去离子水中溶解 19 g MgCl 2 后，定容至 100 ml，高温高压灭菌。3.称取下列试剂，置于l L 烧杯中。Tryptone20 gYeast Extract5 gNaCl0.5

8、 g4.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。5.量取 10 m1 250 mM KCl 溶液，加入到烧杯中。6.滴加 5 N NaOH 溶液 (约 0.2 m1)，调节 pH 值至 7.0。7.加入去离子水将培养基定容至l L 。8.高温高压灭菌后， 4保存。9.使用前加入 5 ml 灭菌的 2 M MgCl 2 溶液。SOC 培养基组份浓度2%(W/V)Tryptone0.5%(W/V)Yeast Extract0.05%(W/V)NaCl2.5 mMKCl10 mMMgCl 220 mMGlucose配制量100 mL配制方法1.配制 l M Glucose 溶液。将 18 g

9、 Glucose 溶于 90 ml 去离子水中，充分溶解后定容至 100 ml。用 0.22m 滤膜过滤除菌。2.向 l 00 ml SOB 培养基中加入除菌的1 M Glucose 溶液 2 ml ，均匀混合。3.4保存。2×YT 培养基1.6%(WV)Tryptone ， 1%(W/V)Yeast Extract，0.5%(W/V)NaCl组份浓度配制量1 L配制方法1.称取下列试剂，置于 l L 烧杯中。Tryptone16 gYeast Extract10 gNaCl5 g2.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加 5 N NaOH，调节 pH 值至 7.0

10、。4.加去离子水将培养基定容至1 L。5.高温高压灭菌后， 4保存。 b× broth组 份 浓 度2%(W/V)Tryptone ， 0.5%(W/V)Yeast Extract ， o5%(W/V)MgSO ·7H2O4配制量1 L配制方法1.称取下列试剂，置于 l L 烧杯中。Tryptone20 gYeast Extract5 gMgSO ·7H O5 g422.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加 1 N KOH 。调节 pH 值至 7.5。4.加去离子水将培养基定容至1 L。5.高温高压灭菌后， 4保存。NZCYM培养基组份浓度0.

11、5%(WV)Yeast Extract0.1%(WV)Casamino Acid（酪蛋白氨基酸）1%(WV)NZ 胺0.5%(WV)NaCl0.2%(WV)MgSO4·7HO配制量1 L配制方法1.称取下列试剂。置于 l L 烧杯中。Yeast Extract5 gCasamino Acid1 gNZ 胺10 gNaCl5 gMgSO ·7HO2 g42.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加 5 N NaOH(约 0.2 m1)，调节 pH 值至 7.0。4.加去离子水将培养基定容至1 L。5.高温高压灭菌后， 4保存。NZYM 培养基组份浓度0.5%(

12、WV)Yeast Extract1%(WV)NZ 胺0.1%(WV)NaCl0.2%(WV)MgSO4·7HO配制方法NZYM 培养基除不含 Casamino Acid 外，其他成份与NZCYM 培养基相同。NZM 培养基组份浓度1%(WV)NZ 胺0.1%(WV)NaCl0.2%(WV)MgSO ·7HO4配制方法NZM 培养基除不含 Yeast Extract(酵母提取物 )外，其他成份与 NZYM培养基相同。一般固体培养基的配制配制方法1.按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列试剂中的一种。Agar(琼脂；铺制平板用 )15 g/LAgar(琼

13、脂；配制顶层琼脂用 )7 g/LAgarose(琼脂糖；铺制平板用 )15 g/LAgarose(琼脂糖；配制顶层琼脂用 )7 g/L2.高温高压灭菌后，戴上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀 (此时培养基温度很高，小心烫伤)。3.待培养基冷却至 5060时，加入热不稳定物质 (如抗生素等 )，摇动容器充分混匀。4.铺制平板 (3035 ml 培养基 /90 mm 培养皿 )。LB/Amp/X-Gal/LPTG 平板培养基组份浓度1%(W/V)Tryptone0.5%(W/V)Yeast Extract1%(W/V)NaCl0.1 mg/mlAmpicillin0.024mg/ml

14、IPTG0.04 mg/mlX-GaL1.5%(W/V)Agar配制量1 L配制方法1.称取下列试剂，置于 l L 烧杯中。Tryptone10 gYeast Extract5 gNaCl10 g2.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加 5 N NaOH(约 0.2 mL)，调节 pH 值至 7.0。4.加去离子水将培养基定容至1 L 后，加入 15 g Agar。5.高温高压灭菌后，冷却至6.加入 1 ml Ampicillin(10060左右。mg/ml) 、1 ml IPTG(24 mg/ml) 、2 mlX-Gal(20 mg/mL) 后均匀混合。7.铺制平板 (3

15、035 ml 培养基 /90 mm 培养皿 )。8.4避光保存。TB/Amp/X-Gal/LPTG平板培养基组份浓度1.2%(W/V)Tryptone2.4%(W/V)Yeast Extract0.4%(V/V)Glycerol17 mMKH 2PO472 mMK 2HPO40.1 mg/mlAmpicillin0.024 mg/mlIPTG0.04mg/mLX-GaL1.5%(W/V)Agar配制量1 L配制方法1.配制磷酸盐缓冲液 (0.17 M KH 24，24。PO0.72 M K HPO )100 ml溶解 2.31 g KH PO 和 12.54 g K HPO 于 90 ml 的

16、去离子水中，搅2424拌溶解后，加去离子水定容至100 ml，高温高压灭菌。2.称取下列试剂，置于l L 烧杯中。Tryptone12 gYeast Extract24 gGlycerol4 ml3.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。4.加去离子水将培养基定容至1 L 后。加入 l 5 g Agar。5.高温高压灭菌后，冷却至60左右。6.加入 100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲液、 l ml Ampicillin (100mg/ml) 、1 ml IPTG(24mg/mL) 、2 ml X-Gal(20 mg/ml) 后均匀混合。7.铺制平板 (3035 ml 培养基 /90

17、mm 培养皿 )。8 4避光保存。六、抗生素的贮存溶液及其工作浓度抗生素贮存液 *1工作浓度浓度保存条件严紧型质粒松弛型质粒氨苄青霉素50 mg/ml( 溶于水 )-2020g/ml60g/ml羧苄青霉素50 mg/mL( 溶于水 )-2020g/ml60g/ml氯霉素34 mg/mL( 溶于乙醇 )-2025g/mll70g/mL卡那霉素10 mg/mL( 溶于水 )-2010g/ml50g/ml链霉素10 mg/mL( 溶于水 )-2010g/ml50g/ml四环素 *25 mg/mL( 溶于乙醇 )-2010g/ml50g/mL* 1 以水为溶剂的抗生素贮存液应通过 0.22 m 滤器过

18、滤除菌。以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应保存于不透光的容器中。* 2 镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基(如LB 培养基 )。七、 SDS-PAGE 浓缩胶 (5%Acrylamide)配方表各种组份名称各种凝胶体积所对应的各种组份的取样量1 m12 m13 m14 ml5 ml6 m18 m110 mLH2O0.681.42.12.73.44.15.56.830%Acrylamide0.170.330.50.670.831.01.3171.0M Tris-HCl(pH6.8)0.130.250.380.50.630 751.0l.2510

19、%SDS0.010.020.030.040.050 060.080.110%过硫酸铵0.010.020.030.040.050.060.080.1TEMED.0.0010.0020.0030.0040.0050.0060.0080.01八、 SDS-PAGE 分离胶配方表各种凝胶体积所对应的各种组份的取样量各种组份名称5m110m115m120 ml25m130m140m150 ml6%GelH2O2.65.37.010.613.215.921.226.530%Acrylamide1.02.03 04.05.06.08.010.01.5 M Tris-HCl(pH8.8)1.32.53.85.

20、06.37.510.012.510%SDS0.050.10.150.20.250.30.40.510%过硫酸铵0.0.050.10.150.20.250.30.40.5TEMED.010.0040.0080.0120.0150.020.0240.0320.048%GelH2O2.34.66.99.311.513.918.523.230%Acrylamide1.32.74.05.36.78.010.713.31.5M Tris-HCl(pH8 8)1.32.53.85.06.37.510.012.510%SDS0.050.10.150.20.250.30.40.510%过硫酸铵0.0.050.10.150 20.250.30 40.5TEMED0.0030.0060.0090.0l20.0150.0180.0240.0310%GeLH2O1.94.05.97.99.91