保健食品中总蒽醌的测定

1、保健食品中总蒽醌的测定1 仪器及试剂1.1仪器(1 分析天平 (感量 0.00001g ;(2 分光光度计 (751型 ;(3 水浴锅 ;(4 刻度吸管。1.2试剂对照品:1, 8-二羟基蒽醌 (中国生物制品鉴定所 ;氢氧化钠 2%氢氧化铵混合碱液 :10%氢氧化钠溶液与 4%氢氧化铵 溶液等量混合 ;标准品溶液 :精密城区 25mg 1, 8 二羟基蒽醌对照品 ,置 200ml 容量瓶中 , 用乙醚溶解并稀释至刻 度,摇匀 ,备用 ;氯仿;乙醚;5N 硫酸;蒸馏水。2 测定步骤中2.1标准曲线的绘制 :精密量取上述标准溶液 1ml 、 2ml 、 3ml 、 4ml 、 5ml , 分别至于

2、 25ml 容量瓶中 ,在水浴 上挥净乙醚 ,放凉 ,分别加 5%氢氧化钠 2%氢氧化 铵混合碱液至刻度 ,摇匀 ,以 5%氢氧化钠 2%氢氧化 铵混合碱液为空白对照 ,在 490nm 下,以 1cm 比色杯测定吸光度 ,用回归法求标准曲线方程。2.2供试品溶液的制备及总蒽醌含量的测定 :取本品 50粒, 倾出内容物 , 精密称 定供试品内容物 3g , 于 250ml 烧瓶中,加 5N 硫酸 45ml ,直火加热水解 2h ,加入氯仿 40ml ,萃取 3次(40ml , 30ml , 30ml ,萃取液用 蒸馏水洗涤 2次(20ml , 20ml ,再用 5% 氢氧化钠 2%氢氧化铵混合碱

3、液振摇萃取 4次(30ml , 20 ml , 20ml , 20ml ,合并萃 取液 ,用氯仿洗涤数次至氯仿层无色 ,弃去氯仿层 ,用 5%氢氧化钠 2%氢氧化铵混 合碱液定容至 100ml ,摇匀 ,以 5%氢氧化钠 2%氢氧化铵混合碱液为空白对照 ,在 490nm 下,以 1cm 比色杯测定吸光度 ,由线性方程计算即得供试品溶液的浓度。2.3结果计算:C1( g/ml × 5ml × 100mlC2 = ×( g/100mgm ×10C=C2×1×100(g/Kg式中C :1kg 分析样品中含蒽醌量 (gC2:100mg 分析样

4、品中含蒽醌量 ( gC1:由回归方程计算所得 5ml 容量瓶中蒽醌的浓度 ( g/mlM : 所用分析样品的重量 (g蒽醌类化合物按结构的不同可分成羟基蒽醌类、氧化蒽酚及蒽酚类、二蒽酮 类。目前其提取方法主要采用溶 剂提取法 ,如浸渍、渗漉、连续回流提取等方式 ,所 用的溶剂主要有乙醇、甲醇、氯仿、乙醚、苯、石油醚、 吡啶、丙酮、硫酸溶液、盐酸溶液及氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化铵等溶液。其含量测定方法 有重 量法、荧光法、比色法、极谱法、薄层扫描法、高效液相色谱法等,而单味植物药或其复方制剂中的蒽醌化 合物含量 ,一般以大黄素或大黄酸、 1, 8-二羟基蒽醌 为标准测定游离蒽醌或总蒽醌

5、,结合蒽醌的量等于总蒽 醌减去游离蒽醌。1 比色法根据蒽醌类及其苷大多数是黄色或橙红色的 , 羟基蒽醌能溶于碱溶液中而显红 或紫红色 ; 蒽酚和二蒽醌与 碱液不显红色 ,只能呈黄色 ,需经氧化成羟基蒽醌后才与 碱作用显红色 ;羟基蒽醌类因结构不同与醋酸镁的甲醇溶液反应可显橙、红、蓝、紫等色的性质而比色测定。1.1 标准曲线的绘制 :取经五氧化二磷干燥 24 h的大黄素 （或大黄酸、 1, 8-二羟 基蒽醌 对照品适量用碱 液 （1 mol/L 氢氧化钠溶液或其与 2%氢氧化铵溶液的混合 溶液 或 0.5%1%醋酸镁甲醇溶液定溶 ,在 500 550 nm波长处扫描 , 在最大吸收波长 处测定吸

6、收度 , 以吸收度对浓度绘制标准曲线 , 线性范围 424 g/m。l 1.2 游离蒽醌 的测定 :取药物细粉或其制剂粉末适量 （约相当于游离蒽醌 1.5 mg 加乙醚 （或氯仿 溶 解或用 索氏提取器回流提取至提取液无色。将乙醚挥干 ,残渣用甲醇溶解 ,加醋酸镁 甲醇溶液至定容 ;或将乙醚提 取液移入分液漏斗中 ,用碱液提取并定容 1,比色测定 , 依标准曲线计算含量。1.3 总蒽醌的测定先水解后提取 :取供试品适量 （约相当于总蒽醌 1.5 mg ,用酸液 （17.5 mol/L 硫酸溶液或 1.56 mol/L 盐酸溶液 2030 ml2, 3, 4,水浴回流 12 h,以使结合 态的蒽

7、醌苷水解 ,使蒽醌游离 ,再用乙醚 （或氯仿 萃取 ,并将过滤的药物残渣及滤纸经 50干燥后用乙醚回流提取 ,待索氏提取器内提取液无色 ,合 并乙醚液 ,照游离蒽醌测 定法测定。对含还原型蒽酮苷 （如番泻苷 的样品 ,根据其可被三氯化铁氧化 ,酸水解成氧化 型蒽醌苷元这一原理 ,称 取供试品适量 , 加水 30 ml超声处理 1530 min（提高溶解、 提取效率, 大大缩短溶解、 提取时间 , 加 10.5%三氯化铁溶液 20 ml,回流 2060 min3,再加盐酸 13 ml继续回流 30 min,放冷,再进行萃取与测定。 因蒽醌类与碱 液显色后 , 过氧化氢不能使其褪色 , 而其它有色物质可被其氧化褪色的原理 , 对含有 干扰测 定成分的碱萃取液 2,加 1%过氧化氢溶液少量 ,在沸水浴中加热 4 min氧化, 冷却 ,定容 ,比色测定。 先提取后水解 :取供试品适量 , 加甲醇 （或乙醇、 氯仿等 , 对含蒽醌的浸膏制剂 , 超声处理