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文档简介

1、REF 30 45013207C-cn-2007/04VIDAS? B R A H M S PCT (PCT)VIDAS BR A H M S PCT 是使用于 VIDAS分析仪上,使用 ELFA(酶联荧光分析) 技术 ,检测人血清或血浆( 肝素锂 )中的 降钙素原的 的定量检测试剂。VIDAS BR A H M S PCT 与其他实验室检测结果和临床评估一起用于协助评估到达ICU病房的重症病人发展重症败血症以至败血症性休克的可能性(危机分析)。摘要及说明降钙素原 (PCT) 是降钙素的激素原。 降钙素仅在甲状腺的 C 细胞受到激素性刺激时才产生,而降钙素原 (PCT) 则由很多器官的不同类型

2、细胞在受到促炎症反应刺激后分泌,特别是受到细菌引起的刺激()。临床资料显示, PCT 浓度高于0.1 ng/mL 时说明存在临床相关的细菌感染,需要采用抗生素进行治疗(2) 。当PCT浓度 0.5 ng/mL 时,要考虑患者可能有发展成重症败血症或败血症性休克的危险 (3, 4) 。败血症是免疫系统和凝血系统对感染的一种过激反应 (5) 。对感染患者进行诊断和监测是医生面临的主要难题。已经证明感染患者降的钙素原(PCT) 浓度升高较早, 特别是受细菌感染的患者。 在实验室诊断中, 降钙素原 (PCT) 是一种能特异性区分细菌感染和其它原因导致的炎性反应的重要标志物() 。此外,败血症再吸收时降

3、钙素原的浓度会下降至正常水平,半衰期为24 小时(6, 7)。在某些情况下(新生儿、多发性损伤、烧伤、大型手术),降钙素原 (PCT) 的升高可能与感染无关。 通常很快回到正常值。 病毒感染、 变态反应、 自身免疫疾病和移植排斥不会引起降钙素原(PCT) 显著升高 (8) 。局部的细菌感染能够导致降钙素原(PCT) 浓度中度升高(2, 9) 。VIDAS BR A H M SP C T 检验结果需结合患者的病史及所进行的所有其它化验结果来评估 。若实验室检测结果与临床体征间存在差异, 则必须进行其他检测。原理该项检验的原理是结合一步免疫测定夹心法和最终荧光检测法(ELFA) 的方法进行检验。

4、固相吸管 (SPR? )作为固定相及移液装置。 检验的试剂预先配制好,分装在密封的试剂板条中待用。所有检验步骤都由仪器自动完成。将样品转移到装有用碱性磷酸酶标记的抗降钙素原抗体(结合物) 的孔中。样品 /结合物的混合物在SPR 中循环进出几次。该项操作能够使抗原与固定于SPR 内壁的免疫球蛋白相结合,使结合物成为夹层状。未结合的化合物在清洗过程中被清除掉。连续进行两次检测。在每步检测中,底物(4-甲基伞形酮酰磷酸酯)在SPR 中循环进出。结合物酶催化该底物水解生成一种荧光产物( 4-甲基伞形酮) ,于 450nm 处检测其荧光性。其荧光强度与样品中抗原的浓度成比例。检测结束时, 仪器自动计算与

5、两次检测对应的两个校准曲线的结果。 荧光阈值决定用于检验每个样品的校准曲线。然后打印出结果。试剂盒的内容物(60 测试)试剂的重溶60 PCT 试剂条STR即用型。60 PCT SPRs 2x30SPR即用型。SPRs 内层涂有单克隆的鼠抗人降钙素原免疫球蛋白。PCT 对照液用 2ml 蒸馏水重溶。静置 5-10 分钟后混合。在 2-8下可保存 8 小时,或在 - 25 6CC1 对照液C1下可保存到试剂盒上的有效期。可反复冷冻/融解 5 次。2x2mL (冻干)TRIS NaCI 缓冲液 (pH 7.3) +重组人 PCT + 防腐剂。C2 对照液C2在 MEL 卡上的 “对照液 C1 剂量

6、值范围 ”或 “对照液 C2 剂量值范围 ”后显示置信区间2 x 2 mL(冻干)(单位为 ng/mL ) 。PCT 校准剂用 2ml 蒸馏水重溶。 静置 5-10 分钟后混合。在2-8下可保存 8 小时,或在 - 25 S1 校准剂S16C 下可保存到试剂盒上的有效期。可反复冷冻/融解 5 次。2 x 2 mL(冻干)TRIS NaCI 缓冲液 (pH 7.3) +重组人 PCT + 防腐剂。在 MEL 卡上的 “校准剂 (S1)剂S2 校准剂S2量值 ”或 “校准剂( S2)剂量值 ”后显示 “相对荧光度值 ”的置信区间。2 x 2 mL(冻干)1MLE 卡含有用于校准检验的厂家标准校准数

7、据的质量标准表。1 份说明书SPR试剂条SPR? 的内层在生产时涂有单克隆的鼠抗降钙素原试剂条由 10 个孔组成,上面用印有标签的铝箔密免疫蛋白。通过PCT 编码识别 SPR。开启后仅从袋中封。 标签包括一个主要显示检验编码、试剂盒批号及取出需要数目的SPRs,并重新正确密封储物袋。有效期的条码。 第一个孔的铝箔上有一个小孔,以便于加入样品。 每个试剂板条的最后一个孔是一个比色槽,用于荧光检测读数。 试剂板条的中间部分的孔装有检测所需的各种试剂。PCT 试剂条的说明孔试剂1样品孔2-3-4空孔5结合物:碱性磷酸酶标记的小鼠单克隆抗人降钙素原免疫蛋白防腐剂( 400 L)。6-7-8TRIS N

8、aCI 吐温 (pH 7.3) +防腐剂 (600 uL).9空孔10装有底物的检测读数比色槽:4- 甲基伞形酮酰磷酸酯 (0.6 mmol/L)+ 二乙醇胺 * (DEA*)( 0.62mol/L 或 6.6%, pH 9.2 ) + 1g/L 叠氮化钠(300 uL).*刺激性试剂:- R 36 :对眼睛有刺激性。- S 26 :若不慎入眼,立即用大量水清洗,并立即就医。欲了解更详细的信息,可来函索取并参阅安全数据表。自备材料- 配有用于转移 200 uL 液体的一次性吸管。- 一次性无滑石粉手套。警告和预防措施仅用于 体外 诊断。仅供专业人员使用。该试剂盒含有源自动物的产物。 动物来源及

9、卫生状态的合格信息并不能完全保证不会传播致病体。因此建议将这些产品作为潜在传染物进行处理,注意一般的安全预防措施(不得咽下或吸入) 。若储物袋已被穿破,则SPRs不能再使用。不得使用可见的变质的 STRs(铝箔或塑料被损坏)。不得使用已过标签上标明的有效期的试剂。不得将不同批次的试剂或耗材混合。试剂盒中的试剂包括叠氮化钠,该物质能与铅或铜管道起反应生成易爆的金属叠氮化合物。如果含有叠氮化钠的液体被倒入管道系统中,则必须用水冲洗,以避免出现累积。使用 无滑石粉 手套,因为已经有粉末会导致某些酶免疫测定的结果错误的报道。第 10 个孔中的底物含有刺激性化学试剂(二乙醇胺)。参考上述危险性惯用语 “

10、R”及预防措施 “S。”溅出液必须用液体清洁剂和至少含有 0.5 次氯酸钠的家用漂白粉溶液彻底擦干净。仪器上或内的溅出液的清洁请参考操作手册。 含有漂白粉的溶液不得高压灭菌。VIDAS 及迷你VIDAS 仪器必须定期清洁和去污(参见操作手册) 。储存条件将 VIDAS B R A H M S PCT 试剂盒保存在 2-8 C下。不得冷冻试剂,除了重溶后的校准剂和对照液。所以未用的试剂保存在 2-8 C下。开启试剂盒后,检查 SPR袋是否正确密封且未损害。若未正确密封或已损害,则不得使用其中的SPRs。使用后,将装有干燥剂的袋子重新密封以保持SPRs的稳定性,并重新将试剂盒保存在 2-8 C下。

11、若依据建议的条件储存, 则所有的成分在标签上的有效期内能够保持稳定状态。 特殊储存条件请参考试剂盒成分表。样本样本类型与采集人血清或血浆(肝素锂)。某个特定患者的 PCT 检验必须在同类型的取样管中进行。由于 EDTA 能导致测量值下降, 所以收集时含有 EDTA 的血浆不得用于(检验) 。含有悬浮的纤维蛋白颗粒或红细胞基质的样品在检验中必须离心处理。样品的准备- 干燥试管:根据试管生产商有关去除纤维蛋白的建议,等待样品凝固及离心 。- 其它试管:参考试管生产商的使用建议。- 冷藏的样品:解冻后,所有样品必须经过离心后使其澄清。注意:由于材料和添加剂的不同, 不同生产商生产的血样采集管的检验结

12、果可能不同。实验室有责任验证采集管的类型并参照生产商的使用建议。样品的稳定性从血块中分离出的样品能在2-8 C 下保存 48 小时;如果需要保存更长时间,则需于 -25 + 6C下冷冻。 冷冻了 6个月的样品不影响检验结果的质量。已经对三次冷冻 /融解循环检验结果进行了验证。样品相关干扰发现以下因素不会显著影响检验:-溶血(样品中掺入血红蛋白后:347 umol/L ),-脂血症(样品中掺入类脂后:含有30 g/L 同等物的甘油三酯),-胆红素血症 (样品中掺入胆红素后:574 umol/L )。但是,建议不要使用出现溶血、脂血或黄疸的血样,如果可能,需采集新的血样。使用说明书完整的使用说明请

13、参阅VIDAS或 mini-VIDAS 操作手册。批数据的录入注意:初次进行检验时,必须在读取MLE卡前输入VIDAS ? PTC 操作协议数据(说明书末端的条形码) 。如果在输入 VIDAS PTC 操作协议数据前读取了 MLE 卡,则再读一次。使用新的一批试剂前,使用每个试剂盒中的批号数据 (MLE) 卡(质量标准表)将质量标准(或厂家标准校准曲线数据) 输入到仪器 ( VIDAS 或 mini-VIDAS )中。如果在开始检验前没有完成该操作, 则仪器无法打印结果。 每批的批数据只需要输入一次。可以利用 MLE 卡自动输入或手动输入数据。校准开启一批新的试剂时、输入批数据 (MLE 卡)

14、后及以后每隔28 天必须进行利用试剂盒中提供的两种校准品进行校准。该操作能提供仪器特定的校准曲线,并能弥补试剂盒在货架期内检验信号可能出现的小差异。校准品, S1 及 S2,在同一次运行中必须检验两次 。校准值必须在设定的RFV ( “相对荧光度值”)的范围内。如果不在该范围内,使用 S1 和 S2 重新校准 。步骤1.从冷藏处取出需要的试剂。2.每份待测的样品、对照液或校准品都使用一条PCT板条和一个 PCT SPR。 确保取出需要的SPRs后已重新密封储物袋。3. 在仪器上键入或选择 PCT 以输入检测码。 校准品需分别标为 S1 和 S2 并且需要 重复检测 。如果对照液需要检测,则将其

15、标分别为 C1 和C2并检测一次。4. 采用种涡流式混合器混合校准品和/对照液。5. 吸取 200 L 校准品、对照液和样品滴入样品孔中。6. 将 SPRs和板条插入仪器中。 检查以保证 SPRs上带有检验代码的颜色标签与试剂板条相匹配。7. 立即开始检测。 所有检验步骤都由仪器自动完成。检验将在 约 20分钟 内完成。8. 检验结束后,从仪器中取出SPRs和试剂条。9. 将使用过的 SPRs和试剂条放入适当的容器中处理。VIDAS PTC操作协议数据的输入首次进行检验且读取MLE卡前 ,使用VIDAS或mini-VIDAS条形码读数器扫描条形码(说明书的末端)。该读数将会允许将VIDASPT

16、C 操作协议的数据作为更新输入到VIDAS PC和 /或 mini-VIDAS仪器的软件中。这些数据需仅在初次检验时使用,或者在VIDAS仪器要求时读取。结果及判定检验完成后得到的结果通过计算机采用储存于仪器中的两条校准曲线进行分析,所得的浓度值的单位为ng/mL 。采用VIDASPC检测时,若得到的结果 J4 & J2 JRFV阈值 ”,RFV显示为 * 。该警告只与VIDASB R A H M S PCT 技术的读取模式(重复读取)相关,而与检测的浓度无关。由于尚无适用的国际标准, 因此采用含有已知浓度降钙素原的人血清的内标板对比校正 VIDAS B R A H M S PCT 。对于随访

17、患者,建议采用相同的 PCT 检验技术。降钙素原浓度大于200 ng/mL的样品必须稀释至1/10( 1 体积样品 + 9 体积 PCT 阴性样品) 后进行复验。若创建工作列表 (Work List) 时未输入稀释倍数(见操作者手册) ,需将结果乘以稀释倍数得到样品浓度。检验结果需结合患者的病史及所进行的所有其它化验结果来判定。质量控制每个 VIDAS BR A H M S PCT 试剂盒中有两份对照液。这些对照液必须在新的试剂盒打开后立即使用以保证试剂的性质未发生改变。 必须采用这些对照液检查每次的校准。该仪器只有在对照液标记为C1和C2后才能检查这些对照值。若对照值偏离期望值,则无法对检验

18、结果进行验证。在同次检验中的样品也必须进行复验。注意使用者有责任按照任何当地适用的法规进行质量控制检测。该方法的局限性某些含有抗试剂中某种成分的抗体的样品可能会影响检验结果。 鉴于这种原因, 检验结果需结合患者的病史及所进行的所有其它化验结果来判定。期望值范围与文献(,)相符,在对进入重症监护病房的患者进行研究(参考临床性能)- 浓度 2 ng/mL 表示出现重症败血症和/或败血症性休克的风险较高。,得到以下结果:但是由于存在与低浓度降钙素原相关的局部感染因此浓度 0.5 ng/mL 时并不能排除感染的出现。(无全身性病征) 或处于感染初期的全身性感染此外,无感染时也可能出现降钙素原浓度升高。

19、( 6 小时),PCT 浓度在0.5ng/mL-2.0 ng/mL时需结合患者的病史来判定结果。建议在6-24 小时内对对任何测得浓度 2 ng/mL的样品进行PCT复验。性能采用 VIDAS BR A H M S PCT 进行的研究中得到以下结果:测量范围VIDAS BR A H M S PCT 的测量范围为 0.05-200 ng/mL 。检测限该分析方法的检测限为小于0.05 ng/mL ,指能检测出降钙素原的最小浓度,该浓度值与零间具有显著差异的置信概率为95% 。采用批内( 4 批)变异系数(功能检测限)为20% 时测得的 PCT 浓度为 0.09 ng/mL 。Hook 效应当降钙

20、素原的浓度达2,600 ng/mL 时,未发现钩状效应。正常值这些数据仅供参考,建议每个实验室从严格筛选的人群中建立自己的参考值。在一项采用 VIDAS BR A H M S PCT 对来自正常男性(N=98) 和女性 (N=102)受试者的血样进行检测的研究中, 发现百分比为 95 和 99 的相应的正常值分别为 0.5 ng/mlTotal 0.5 ng/ml74175 0.5 ng/ml5124129Total79125204VIDAS B RAHMSBRAHMS PCT LIAPCT 2 ng/ml 2 ng/mlTotal 2 ng/ml1094113 2 ng/ml88391Tot

21、al11787204阈值为 0.5 ng/mL和 2 ng/mL 时,2 种方法检测的符合率平均值分别为97.1 % 和 94.1% 。临床性能在法国及美国的家医院进行了临床研究,共 229 连续的病人( 141 男性, 88 女性)在进入重症病房的第一天被纳入了这研究创伤,烧伤,手术后,长期或严重心源性休克的病人被排除于这研究病人的分类是基于 American Colledge of Chest Physicians/Society of Critical Care Medicine 共识会议的条件()及额外的专家文献资料每一种类的数量,平均年龄及范围如下:没有感染:27 病人, 22-29 岁(平均64.4)SIRS: 62 病人, 18-87 岁(平均59.0 )败血症 : 42 病人, 21-92 岁(平均64.2)重症败血症: 48 病人, 19-89 岁(平均66.3)败血症性休克: 50 病人, 33-88 岁(平均68.2)下图列出结果:阈值为 0.5ng/ml 时没有感染SIRS败血症的病人与重症败血症败血症性休克的病人的比较没有感染 SIRS败血症重症败血症败血症性休总数的病人克的病人PCT 0.5 ng/ml88391PCT 0.5 ng/ml4395138总数13198229阈值为 2.0ng/ml 时没有感染SIRS败血症的病人与重症败血症败血症性休

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