注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸的制备及稳定性研究

1、注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸的制备及稳定性研究赵鹏1,王东凯1,王丽君1,苏娟娟2,张春叶1,薛梅妍1(1·沈阳药科大学药学院,辽宁沈阳110016;2·沈阳沃森药物研究所,辽宁沈阳110016)摘要:目的制备注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸及其注射用溶剂并考察其稳定性。方法以含量、有关物质、酸碱度为指标,筛选处方及制备工艺;考察了3批样品的稳定性。结果最佳处方为丁二磺酸腺苷蛋氨酸500·0 g、甘露醇200·0 g、磷酸36·1 mL、磷酸氢二钠59·1 g,以该处方制备的3批样品在市售包装条件下经加速、室温留样试验考察,质量稳定。结论处方设计

2、合理,工艺可行。关键词:丁二磺酸腺苷蛋氨酸;注射剂;稳定性腺苷蛋氨酸是存在人体所有组织和体液中的一种生理活性分子,它作为转甲基作用的甲基供体和转巯基作用的生理性巯基化合物(如半胱氨酸、牛磺酸、谷胱甘肽和辅酶A等)的前体,参与体内重要的生化反应。主要用于治疗肝硬化前和肝硬化所致的肝内胆汁淤积及妊娠期肝内胆汁淤积等1,2。作者制备了注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸,旨在替代进口产品,减轻患者药品费用负担。1仪器与试药岛津LC 10A高效液相色谱仪(岛津LC 10A泵、SPD 10A紫外检测器、7725i进样阀,岛津仪器苏州有限公司),PHS 2C数显形酸度计(上海宇隆仪器有限公司),冷冻干燥机(北京四环科

3、学仪器厂)。丁二磺酸腺苷蛋氨酸原料(ademetionine1,4 butanedisulfonate,ADE,沃森药物研究所,批号040101、040102、040103),腺苷蛋氨酸对照品(美国sigma公司,纯度大于99·0%),甘露醇(青岛胶南明月海藻工业有限责任公司,批号030402),磷酸(沈阳经济技术开发区试剂厂,批号030916),磷酸氢二钠(沈阳化学试剂厂,批号031203),甲酸铵(天津市瑞金特化学品有限公司,批号050108),辛烷磺酸钠(山东省中美美奥特色谱产品有限公司,批号031107),甲酸(天津市博迪化工有限公司,批号030702),甲醇(色谱纯,天津市

4、康科德科技有限公司),盐酸赖氨酸(天津市化学试剂公司,批号030104),NaOH(沈阳正信高科技研究所试剂部,批号20040327)。2方法与结果2·1注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸处方筛选2·1·1溶剂量的选择由于本品极易溶于水,故考虑将本品的溶剂用量定为每支1·0 mL,但冻干后,本品制剂底部呈胶状黏稠状。考虑可能是溶液中药量浓度过大,所以将预冻干溶液的浓度降低,增加溶剂量至每支2·0 mL。2·1·2冻干支持剂种类及用量的选择因为本品并未使用任何冻干支持剂,从而导致样品内部疏松多孔,为确保得到外型美观且易于贮存的样品,故考

5、虑加入适当的冻干支持剂来改善外观。结果见表1。由表1可见,最佳冻干支持剂及用量为100 g·L-1的甘露醇。2·1·3缓冲盐用量的选择本品的注射用溶剂是一个偏碱性的缓冲盐体系,与样品互溶后,使溶解后的样品溶液pH值偏向碱度一侧,从而造成样品的酸碱度测定结果偏高。为使制剂的pH值符合限度要求,在冻干品溶液的配制过程中加入适量的辅料,使制剂形成一个偏酸性的缓冲体系,并进行冻干。考察结果表明在1 000支药量的溶液(2 000 mL)中加入磷酸36·1mL、磷酸氢二钠59·1g作为一个偏酸性作者简介:赵鹏(1981 ),男(汉族),吉林吉林人,硕士研

6、究生,Tel. 024 23986127,E mailzhaopeng3442;Table 1The selections of lyophilization support agentsFormulam(ADE)/gm(manicol)/gm(dextran 20)/g Appearance1 20 0 0 Honeycomb2 20 4 0 Honeycomb3 20 6 0 Comparatively satiation4 20 8 0 Satiation5 20 0 1 Honeycomb6 20 0 2 Honeycomb的缓冲体系制备样品,该样品加注射用溶剂溶解后,pH值为7左右,

7、符合限度要求,结果较好。2·1·4处方根据处方筛选的结果,设计处方为丁二磺酸腺苷蛋氨酸500·0 g、甘露醇200·0 g、磷酸36·1 mL、磷酸氢二钠59·1 g、注射用水加至2 000 mL,制成1 000支。2·2注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸的制备取处方量的甘露醇、磷酸及磷酸氢二钠,加入注射用水1 000 mL,加热搅拌使溶解,按1 g·L-1加入活性炭,80搅拌30 min,用G4或0·45m滤膜滤过,得溶液(1);取处方量的主药,加入注射用水500 mL,搅拌溶解,按1 g·L-1加入活

8、性炭,室温搅拌15 min,用G4或0·45m滤膜滤过,得溶液(2);将溶液(1)与溶液(2)混合,搅拌均匀,并自滤器上补加注射用水至全量,无菌条件下用0·22m微孔滤膜滤过除菌,分装于西林瓶中,加塞,放入冻干机中进行冷冻干燥。2·3注射用溶剂处方盐酸赖氨酸(以L赖氨酸计) 417·5 g、400 g·L-1氢氧化钠适量,注射用水加至5 000 mL,制成1 000支,规格为每支5 mL。2·4注射用溶剂的制备取处方量盐酸赖氨酸,加入4 000 mL注射用水中,搅拌使溶解,用400 g·L-1氢氧化钠调pH值为10·

9、;310·6,按1 g·L-1加入针用活性炭,室温搅拌30 min,过滤至澄清,用G4或0·45m滤膜滤过,并自滤器上补加注射用水至全量,无菌条件下用0·22m微孔滤膜滤过除菌,分装,熔封,115灭菌30 min,即得。2·5丁二磺酸腺苷蛋氨酸的含量测定2·5·1色谱条件色谱柱为DiamonsilTM(钻石)C18柱(5m,4·6 mm×25 cm);取甲酸铵6·3 g、辛烷磺酸钠1·0 g,加水700 mL溶解,用甲酸调节pH值至3·8,加水稀释至1 000 mL,摇匀,取

10、此溶液660 mL加甲醇340 mL,摇匀,作为流动相;流速为0·9 mL·min-1;检测波长为260 nm;柱温为30;进样量20L;用外标法进行定量。2·5·2测定波长的确定取本品适量,精密称定,加水制成丁二磺酸腺苷蛋氨酸的质量浓度为100 mg·L-1的溶液,照文献3的分光光度法测定。将其置于200 400 nm波长内进行紫外扫描,结果丁二磺酸腺苷蛋氨酸在260 nm波长处有最大吸收,故选用260 nm作为检测波长。2·5·3线性关系考察取丁二磺酸腺苷蛋氨酸对照品50 mg,精密称定,置25 mL量瓶中,加水溶解并稀

11、释至刻度,摇匀。精密量取上述溶液1·0、1·5、2·0、2·5、3·0 mL,分别置于10 mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。取20L注入液相色谱仪,以峰面积计算,结果丁二磺酸腺苷蛋氨酸在200 600 mg·L-1内,其质量浓度()与峰面积(A)呈良好的线性关系,其回归方程为A=9 710·6-140 169(r=0·999 8)。2·5·4辅料对丁二磺酸腺苷蛋氨酸测定的干扰试验按处方量配比称取各辅料适量,用水溶解制成含丁二磺酸腺苷蛋氨酸400 mg·L-1的溶液,取20L注入液相色

12、谱仪。结果表明,辅料不影响主成分的测定。2·5·5加样回收率试验按处方主药量为100%时称取辅料,分别加入处方量的80%、100%和120%的丁二磺酸腺苷蛋氨酸制备成3批注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸样品,分别取3批样品按“2·5·7”条方法制成质量浓度为320、400、480 mg·L-1的供试品溶液各3份(共9份);另取丁二磺酸腺苷蛋氨酸对照品加水溶解并稀释制成质量浓度为400 mg·L-1的溶液。 “2·5·7”条方法操作,计算回收率。结果表明,3种质量浓度的回收率为98·5%101·5%,RS

13、D值均小于1%。2·5·6精密度试验取320、400、480 mg·L-13种质量浓度的丁二磺酸腺苷蛋氨酸溶液,分别连续进样6次,RSD值分别为0·49%、0·87%、0·76%。2·5·7含量测定取本品1瓶加水溶解后稀释至50 mL,取1 mL置25 mL量瓶中,加水稀释至刻度,作为供试品溶液。另取丁二磺酸腺苷蛋氨酸对照品加水溶解并稀释成400 mg·L-1的溶液。分别取供试品溶液与对照品溶液各20L进样,测定峰面积,按外标法计算样品含量(图1)。Fig.1HPLC chromatograms of c

14、ontrol(A)and sample(B)2·6稳定性试验按“2·1·4”条的处方制备3批样品,分别进行影响因素试验、加速试验和室温留样观察。2·6·1影响因素试验(强光照射、高温及高湿试验)取本品,除去外包装后置于表面皿中,分别在(4 500±500)Lx光照度下放置10 d;置于60恒温箱中放置10 d,分别于第5、10天取样测定,并与0 d结果比较,分别考察本品的性状、澄清度、酸碱度、有关物质和含量等指标。结果详见表2、3。由于本品极易吸湿,故将样品研成细粉置称量瓶中(厚度约为5 mm),于25、相对湿度为(75±5

15、)%的环境中开口放置,5 d时取样结果发现药物吸潮溶解,萎缩已不成型,故不再继续进行其他项考察。从表2、3可以看出,本品在光照及高温条件下放置10 d,有关物质均增加,含量都有所降低,其他指标无明显变化。可见本品对光、热不稳定,易采用棕色瓶,25下密闭保存。2·6·2加速试验将模拟上市包装的3批样品(040101、040102、040103)置于(40±2)、相对湿度为(75±5)%条件下放置6个月,分别于第1、2、3、6个月时分别Table 2Results of illumination testt/d Characteristic Clarity

16、pHw(related substances)/%w(ADE)/%0 White massive Up to standard 6·89 0·87 99·975 White massive Up to standard 6·98 1·06 98·9410 White massive Up to standard 6·94 1·46 99·24Table 3Results of test at a temperature of 60t/d Characteristic Clarity pHw(related

17、 substances)/%w(ADE)/%0 White massive Up to standard 6·89 0·87 99·975 White massive Up to standard 6·84 1·14 98·8610 Off-white massive Up to standard 6·93 1·53 98·91取样测定,并与0个月时样品数据比较,结果见表4。从表4可以看出,本品3批样品在加速条件下放置6个月,各项指标无明显变化,表明在该条件下样品基本稳定。Table 4Results o

18、f the accelerated testBatcht/month Characteristic Clarity pHw(related substances)/%w(ADE)/%040101 0 White massive Up to standard 6·89 0·87 99·971 White massive Up to standard 6·91 0·89 100·622 White massive Up to standard 6·84 0·89 100·653 White massive U

19、p to standard 6·87 1·02 101·276 White massive Up to standard 6·92 1·05 101·36(to be continued)Continued table 4Batcht/month Characteristic Clarity pHw(related substances)/%w(ADE)/%040102 0 White massive Up to standard 6·99 0·85 100·451 White massive Up to

20、 standard 7·01 0·86 99·612 White massive Up to standard 6·98 0·99 99·333 White massive Up to standard 6·95 0·98 100·276 White massive Up to standard 7·02 1·07 100·58040103 0 White massive Up to standard 6·81 0·88 100·161 Whit

21、e massive Up to standard 6·85 1·00 100·822 White massive Up to standard 6·84 1·02 99·703 White massive Up to standard 6·77 0·98 100·916 White massive Up to standard 6·83 1·13 100·392·6·3室温留样考察将模拟上市包装的3批样品(040101、040102、040103),在室温

22、条件下放置3、6、9、12个月后定期取样测定,并与0个月时样品数据比较,结果见表5。Table 5Results of storage test under room temperatureBatcht/month Characteristic Clarity pHw(related substances)/%w(ADE)/%040101 0 White massive Up to standard 6·89 0·87 99·973 White massive Up to standard 6·92 1·01 99·506 White

23、 massive Up to standard 6·88 0·98 99·909 White massive Up to standard 6·79 1·03 99·3012 White massive Up to standard 6·83 1·01 99·94040102 0 White massive Up to standard 6·99 0·85 100·453 White massive Up to standard 6·96 1·04 99·286 White massive Up to standard 7·01 1·05 101·299 White massive Up to standard 6·92 1·00 99·8612 White massive Up t