HPLC梯度洗脱测定黄柏中盐酸小檗碱与盐酸黄柏碱的含量

1、23文章编号:1001-6910(2011)04-0023-03药学研究HPLC梯度洗脱测定黄柏中盐酸小檗碱与盐酸黄柏碱的含量陈天朝,翟来超2(1.河南中医学院第一附属医院药学部,河南郑州450000;2.河南中医学院药学院2008级硕士研究生,河南郑州450008)摘要 目的:研究黄柏药材中盐酸小檗碱与盐酸黄柏碱的含量测定方法,为其质量评价提供依据。方法:采用高效液相色谱(HPLC)梯度洗脱法,在同一色谱条件下测定含量。色谱条件:AgilentTC C18色谱柱(4.6mm 150mm,5 m),流动相流速1mL/min,柱温25 ,检测波长284nm(盐酸黄柏碱)。结果:两种成分均能达到基

2、线分离,线性良好。结论:经过系统的方法学考察,该方法操作简便、结果准确、重现性好,适用于黄柏药材2010版中国药典规定的这两种主要生物碱类成分的含量测定。关键词:黄柏 盐酸黄柏碱 盐酸小檗碱 梯度洗脱 含量测定中图分类号:R284.1 文献标志码:BM10AVP二极管阵列检测器、CTO 10ASVP柱温箱,ShimadzuCLASS VP色谱工作站)。SartoriusCP225D分析天平,德国Sartorius公司产品。2 方法与结果2.1 色谱条件及系统适应性试验AgilentTC C18色谱柱(4.6mm 150mm,5 m),流速1mL/min,流动相乙腈-0.6%磷酸二氢钾溶液(调p

3、H到4.0),梯度洗脱程序为021.00min(10.5%乙腈),21.0143.00min(27%乙腈),柱温25 ,检测波长284nm。理论塔板数按盐酸黄柏碱峰计算应不低于7000,按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000。2.2 试液的制备取黄柏粉末约1g,精密称定;加甲醇50mL,称重,水浴回流提取45min;冷却后称重,补足差重;滤过,精密量取续滤液10mL,水浴蒸干;残渣用流动相(乙腈25%)溶液并定容至10mL容量瓶,即得。2.3 系统适应性试验床常用中药材之一,具有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮之功效1。黄柏主要含小檗碱、巴马汀、药根碱、木兰花碱、黄柏碱等季铵型生物碱。2010版 中国

4、药典 把盐酸小檗碱和盐酸黄柏碱作为含量检测项目,增加了专属性。笔者查阅了多篇文献2-5,不乏梯度洗脱同时测定的,但本方法从色谱条件入手,对分析方法进行了改进,并进行了方法学考察,为黄柏药材的评价提供新的参考依据。1 试药与仪器1.1 药 品黄柏取自河南中医学院第一附属医院药房,产地为广西,经鉴别为芸香科植物黄皮树(Phelloden dronchinenseSchneid)的干燥树皮。盐酸小檗碱由中国药品生物制品检定所提供,批号110713-200208。盐酸黄柏碱购于四川维克奇生物科技公司,批号20100410,纯度大于98%。1.2 试 剂乙腈色谱纯购于北京迪马科技有限公司,批号93731

5、;甲醇色谱纯购于天津市四友精细化学品有限公司,批号100526;磷酸二氢钾分析纯购于天津市永大化学试剂开发中心,批号20090225;自制纯化水。1.3 仪 器-2466Y=5 10X-35 10, =0.9998,线性范围5.17339.4060 g。小檗碱含量表2 小檗碱加样回收率结果加入量/ g检测量/ g99.61.1平均回收率/%RSD/%2.9 样品测定取3批黄柏药材,每批粉碎后去粉末约1g,精A.混合对照品溶液 B.黄柏供试品溶液图1 混合对照品和黄柏供试品溶液的HPLC色谱图下色谱条件测定,计算含量,重复测定3次。见表3。表3 黄柏药材含量测定结果编号123药材取样量12.5

6、稳定性试验取供试品溶液,分别在0,1,2,4,8,12,24h进行测定。结果盐酸黄柏碱峰面积积分值RSD=1.48%、盐酸小檗碱峰面积积分值RSD=2.29%,表明供试品溶液在室温条件下放置24h稳定性良好。2.6 重现性试验取同一供试品溶液,重复进样6次,其中盐酸黄柏碱峰面积积分值RSD=1.29%,盐酸小檗碱峰面积积分值RSD=0.51%,说明有良好的精密度。2.8 加样回收试验取6份黄柏药材粉末,药材中盐酸黄柏碱含量以3.88mg/g计、盐酸小檗碱含量以31.77mg/g计,每份约0.1g,精密称量,分别精密加入5.0mL混合对照品(盐酸黄柏碱浓度为46.6mg/L、盐酸小檗碱浓度为47

7、0.3mg/L),按上述供试品制备方法处理,进样,测定峰面积,计算含量。结果见表1、表2。表1 黄柏碱加样回收率结果样品含量加入量/ g233233233233233233100.90.91平均回收率/%RSD/%小檗碱含量/mg g-13 讨 论3.1 测定波长的选择黄柏碱与小檗碱作为黄柏的含量测定指标,检视波长分别为265nm与284nm,在265nm波长下,黄柏碱几乎没有吸收,在284nm处有最大吸收,而小檗碱在两个波长下几乎没有影响,所以选择284nm作为检测波长。3.2 流动相的选择考察了乙腈-水、乙睛-0.1%磷酸水溶液和乙腈-50mmol/L磷酸二氢钾溶液3种流动相体系,结果发现

8、,乙腈-水流动相体系洗脱能力不够,分离度不如乙腈-0.1%磷酸水溶液好;乙腈-0.1%磷酸水溶液体系洗脱力强,其中十二烷基磺酸钠的加入可以有效的防止拖尾等不足,但十二烷基磺酸钠黏性较大,泡沫性强,噪音大;而乙腈-磷酸缓冲盐体系、峰形及分离效果都较好,可以有效的防止拖尾,因此选用乙腈-磷酸缓冲盐体系作为流动相。参考文献:1中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典:一部M.北京:中国医药科技出版社,2010:286.2祝晨隙,林朝展,莫建霞,等.HPLC法测定黄柏药材中小檗碱与黄柏碱的含量J.中药新药与临床药理,2004,15(4):262-264.3夏苓,李灿明.HPLC测定黄柏生品与

9、不同炮制品中3种生物碱的含量J.中成药,2008,30(7):10.,25碱、黄柏碱的含量J.华西药学杂志,2006,21(4):377-379.5范积平,张贞良,廖晓玲.不同产地黄柏药材中4种主要生物碱类成分的含量测定J.广东药学院学报,2010,26(1):69-70.收稿日期:2010-09-09;修回日期:2011-03-09(编辑 侯勇谋)文章编号:1001-6910(2011)04-0025-02药学研究气相色谱法测定枇杷止咳口服液中薄荷脑的含量娄玉霞(河南中医学院药学院,河南郑州450008)摘要 目的:建立枇杷止咳口服液中薄荷脑含量的气相色谱测定法。方法:采用气相色谱内标法,萘

10、为内标物,PEG-20M固定相,不锈钢填充柱,氮气为载气,FID检测器。结果:在该色谱条件下样品中薄荷脑及内标物萘都能得到很好的分离,薄荷脑的加样回收率为96.36%,RSD=1.49%(n=5)。结论:本法灵敏、准确、重现性好,可作为该制剂的质量控制指标之一。关键词:薄荷脑 气相色谱法 枇芭止咳口服液 含量测定中图分类号:R284.1 文献标志码:B2 方法与结果2.1 色谱条件及系统适用性试验载气为氮气,流速65mL/min;FID检测器,氢气。枇杷止咳口服液是中药复方制剂,由枇杷叶、川贝母、薄荷脑等加工制成。薄荷脑是其中的主要挥发性成分,相对含量较高。为了更好地控制本品内在质量,对其质量

11、标准进行研究,建立枇杷止咳口服液中薄荷脑含量的气相色谱测定法。有关薄荷脑气相色谱测定方法的报道较多,有报道采用蒸馏法制备供试品溶液5-71-4,还有报道采用直接稀释样品后进样测定,另有人采用萃取8法制备供试品溶液。笔者参照文献报道方法,用挥发油测定器提取制备薄荷脑含量测定供试液,以萘为内标物质,10%PEG-20M为固定相,测定本品中的薄荷脑的含量。在该色谱条件下,样品中薄荷脑及内标物萘能得到很好的分离。本法灵敏、准确、重现性好,可作为该制剂的质量控制指标之一。1 仪器及试药GC-9A气相色谱仪,FID检测器,C-R7A数据处理机(日本岛津),不锈钢柱(3mm 2mm),固定相为10%聚乙二醇(PEG)-20M(日本岛津),SPH-300A氢气发生器(北京中惠普分析技术研究所);薄荷脑对照品(批号110728-200506,供含量测定用,中国药品生物制品检定所);萘(分析纯);其他所用试剂均为分析纯;枇杷止咳口服液