肝癌的微血管密度与血管内皮生长因子表达

1、肝癌的微血管密度与血管内皮生长因子表达【摘要】目的研究肝癌组织连续切片中微血管密度(MVD)及血管内皮生长因子(VEGF)两者之间的关系。方法肝癌组织标本50例，采用抗人因子相关抗原、抗人VEGF进行免疫组织化学染色显示组织中微血管及VEGF阳性表达细胞。结果50例肝癌组织中，VEGF表达阳性者28例，阳性率为56%。肝癌及癌旁正常肝组织MVD测定结果显示，VEGF阳性表达组明显高于阴性表达组，其差异有显著性(P0.05)。结论肝癌组织中MVD明显高于癌旁正常组织，并与VEGF表达呈明显正相关。【关键词】癌，肝细胞；微血管密度；血管内皮生长因子；免疫组织化学 Microvessel densi

2、ty and vascular endothelial growth factor expression in liver cancerZHANG Qin*, SHEN Hongwei, WU Yulian, et al.*Department of Surgery, The First Peoples Hospital of Yuhang, Yuhang 311100, China【Abstract】 Objective To study the relationship between the microvessel density MVD and VEGF expression in t

3、he serial sections of liver cancer. Methods Microvessels and positive cells of VEGF expression were assessed by immunohistochemical staining with monoclonal antibodies against F-VIII Rag and against human VEGF. Results Positive VEGF expression was found in 56 %(28/50) of the patients with liver canc

4、er. MVD in the liver cancer and the normal tissue arround liver cancer was significantly higher in positive VEGF expression tumor than in negative VEGF expression (P0.05). Conclusions MVD in the liver cancer was significantly higher than in the normal liver tissue, and positively correlated with the

5、 VEGF expression.【Key words】 Carcinoma, hepatocellalar; Microvessel density; Vascular endothelial growth factor; Immunohistochemistry 我们采用血管内皮生长因子(VEGF)和F-因子染色的免疫组织化学技术，观察肝癌组织连续切片中VEGF阳性表达和微血管密度(MVD)，探讨VEGF在微血管生成反应中的作用和价值。 材料与方法1.一般资料：取自1996年1月1998年12月肝癌手术切除标本50例；患者年龄2470岁(平均49.82岁)；其中男45例，女5例；肝细胞性肝

6、癌47例，其中12例伴门静脉癌栓，1例有膈肌浸润，胆管细胞癌2例，混合细胞癌1例；肿块直径5 cm 14例、510 cm 28例、10 cm 8例；单个病灶32例、多个病灶18例。肝癌组织标本以福马林固定，常规石蜡包埋，4 m厚连续切片。2.主要试剂：小鼠抗人第因子抗原、抗人血管内皮生长因子，卵白素-生物素(HIGH-SABC)-过氧化酶检测系统，3，3-二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒等，购自武汉博士德生物工程有限公司。3.实验方法：采用卵白素-生物素(SABC)-过氧化酶免疫组织化学染色法，步骤操作按药盒说明书。4.结果判定：微血管呈棕黄色，计数方法为每张切片选择5个血管最高的区域，在40

7、0倍下进行计数，求其平均数；微血管判定标准1：凡染成棕黄色的数个内皮细胞或内皮细胞簇均为1个血管计数，管腔大于8个红细胞大小，有较厚肌层的血管不计数。VEGF染色为细胞浆呈棕黄色。VEGF结果判定标准：每个高倍视野计数100个细胞，胞浆呈棕黄色的阳性细胞小于5%为阴性，大于5%为阳性。5.统计学处理：统计软件为SPSS/PC。计数资料采用2检验、计量资料采用样本均数t检验。结果50例肝癌组织中，VEGF表达阳性者28例，阳性率为56%(28/50)。肝癌及癌旁正常肝组织MVD测定结果见表1，显示VEGF阳性表达组明显高于阴性表达组，其差异均有显著性(P0.05)；MVD测定结果表明，肝癌组织明

8、显高于癌旁正常组织，其差异有极显著性(P0.001)。组别肝癌组织癌旁肝组织VEGF阳性组19.955.53*1.940.46VEGF阴性组9.613.741.620.38 注：与VEGF阴性组比较，*P0.01，P0.05 讨论恶性肿瘤的生长、侵袭及转移过程受到多种因素影响，其中肿瘤诱导的血管生成反应与其生物学行为关系密切。从血管生成的角度，可以将恶性肿瘤的发展分为血管生成前期和血管生成期两个阶段。实体肿瘤生长至1 mm3以上时即需要瘤内血管生成，否则肿瘤静止于休眠状态，不发生转移，而一旦进入血管生成期，其转移潜能能迅即出现2。实体肿瘤的生长具有明显的血管生成依赖性，肿瘤细胞增殖、浸润过程中

9、不断释放血管生成因子诱发血管生成，新生血管结构薄弱、形态变异，为恶性肿瘤的侵入提供了条件3。有关肝癌组织血管密度及其相关因素的研究国外已有报道4。较多的研究结果认为肝癌组织中的微血管密度与病人的预后有关，MVD低则预后较好，术后生存率高，反之则预后差、术后生存率低；此外，还有作者发现肝癌组织中的微血管密度与肿瘤的转移及复发相关。目前已发现了多种促血管生长因子，其中血管内皮生长因子对内皮细胞的生长促进作用效果最强、特异性最高。VEGF在缺氧或低血糖状况时表达升高，可特异地结合于酪氨酸激酶家族的KDR和Flt-1上，这两种受体在肿瘤内皮细胞均表达升高。利用抗血管内皮某些特异成分(细胞粘附分子CD3

10、1、CD34或因子相关抗原)的单克隆抗体进行免疫组织化学染色可显示组织中的血管成分。因子相关抗原由相关内皮、巨核细胞以及血小板生成。组织培养的内皮细胞也可分泌第因子前体。应用针对血管内皮细胞的抗因子相关抗原免疫法染色，可特异性地使微血管内皮染色。肿瘤内毛细血管尽管不存在肿瘤的去分化，但对抗因子相关抗原却呈强染色5。我们在本研究中用VEGF和F-因子染色的免疫组织化学技术，观察肝癌组织连续切片中VEGF阳性表达和MVD，以探讨VEGF在微血管生成中的作用，结果表明：VEGF表达阳性组其肝癌组织及癌旁正常肝组织的MVD均高于VEGF表达阴性组；肝癌组织内微血管明显高于周边正常肝组织，镜下观察发现癌

11、巢中微血管密度也不均衡，表现出明显的异质性，以癌巢的周边部位尤其是肿瘤向周围浸润的部位为最密集。许多肿瘤细胞可分泌VEGF，后者可诱导肿瘤血管形成，从而支持肿瘤生长。Kimitoshi等6应用免疫组织化学的方法，对75例食管癌进行了MVD和VEGF表达的研究，发现46.7%(35/75)的食管癌VEGF表达阳性，并与食管癌微血管密度呈高度正相关。我们对50例肝癌的MVD及VEGF表达的研究结果表明56%(28/50)的肝癌VEGF表达阳性，并与肝癌微血管密度呈高度正相关，提示VEGF能刺激肝癌微血管生长，从而促进肿瘤生长和转移，显示其预后不佳。目前认为，VEGF与肿瘤血管内皮细胞的相应受体结合

12、，刺激肿瘤血管内皮细胞的增生，增加肿瘤血管通透性，并为肿瘤的浸润和转移提供适合的基础。对肝癌两种组织化学染色切片的观察显示，肝癌组织其微血管密集区大多位于肿瘤周边及肿瘤向周围浸润的区域，这些部位也正是VEGF阳性表达细胞所密集的区域。基金项目：浙江省卫生厅科研基金资助项目(98019)作者单位：张庆（311100浙江省余杭市第一人民医院外科）沈宏伟（浙江大学医学院附属第二医院外科）吴育连（浙江大学医学院附属第二医院外科）彭承宏（浙江大学医学院附属第二医院外科）江献川（浙江大学医学院附属第二医院外科）彭淑牖（浙江大学医学院附属第二医院外科）参考文献1，Bosari S, Delellis RA,

13、 Healtey GJ. Microvessel quantitation and prognosis in invasive breast carcinoma. Hum Path, 1992,23:755-756.2，Folkman J. What is the evidence that tumors are angiogenesis-dependent J Natl Cancer Inst, 1991,82:4-5.3，Liotta L, Kleinerman J, Saidek GM. Quantitative relatiionships of intravascular tunor cells, tumor vessels, and pulmonary metastasis following tumor implantation. Cancer Res, 1974,34:997-998.4，Yamamoto A, Dhar DK, El-Assal ON, et al. Thymidine phosphorylase, microvessel density and clinical outcome in