免疫原和抗血清的制备

1、第三章 免疫原和抗血清的制备Preparation of immunogen and antiserum第四章 特异性抗体的制备技术Preparation of SpeCifiC Antibody第一部分 目的要求和教学内容 一、目的要求掌握：抗原和抗体的概念类型、杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理；熟悉：常用颗粒性和蛋白质抗原制备的方法、多克隆抗体制备的影响因素，常用佐剂种类；了解：抗血清的鉴定，基因工程抗体的类型。 二、教学内容1常见免疫原的种类和制备及佐剂。2免疫血清的制备，抗血清的鉴定与保存。3单克隆抗体制备技术。4基因工程抗体技术。第二部分 测试题(一)单项选择题(A型题)1 配制绵

2、羊红细胞免疫原一般细胞浓度为 A102ml B104m1 C 105ml D106ml E108ml2 细菌鞭毛免疫原常规的制备方法 A 05甲醛处理 B100加温2h处理 C1氯化钙处理 D 75乙醇处理 E2氯仿处理3 细菌的菌体免疫原常规的制备方法 A75乙醇处理 B100加温2h处理 C05甲醛处理 D1氯化钙处理 E2氯仿处理4 要从组织和细胞匀浆中粗提某种蛋白抗原，最常用又简便的分离方法 A盐析法 B 凝胶过滤法 C离子交换层析法 D免疫亲和层析法 E免疫电泳法5制备人工抗原时，最常用于偶联半抗原的载体A免疫球蛋白 B人甲状腺球蛋白 C人血清白蛋白D牛血清白蛋白 E葡萄球菌A蛋白6

3、蛋白质抗原首次免疫接种后，最好间隔多长时间再进行第二次免疫A710天 B10一20 天 C2030天D3060天 E3个月7鉴定抗体的效价，常用下列哪一种方法A间接凝集试验 B单向免疫扩散法 C双向免疫扩散法D免疫亲和层析法 E聚丙烯酰胺凝胶电泳法8纯化特异性抗体时，可采用下列哪种方法除去杂抗体A盐析法 B凝胶过滤法 C离子交换层析法D免疫亲和层析法 E免疫电泳法9根据抗原分子所带电荷不同进行分离纯化的方法称为A盐析法 B凝胶过滤法 C离子交换层析法D免疫亲和层析法 E免疫电泳法10单克隆抗体目前效果较好的纯化方法 A亲和层析法 B凝胶过滤法 C离子交换层析法 D超速离心法 E盐析法11完全佐

4、剂的组成 A液体石蜡+羊毛脂 B羊毛脂+氢氧化铝 C液体石蜡+卡介苗+氢氧化铝 D卡介苗+氢氧化铝+羊毛脂 E卡介苗+液体石蜡+羊毛脂12要使半抗原与载体结合具有免疫原性、半抗原分子的数目数至少要达到 A10个以上 B15个以上 C20个以上 D50个以上 E100个以上13颗粒性抗原免疫接种方法一般采用 A淋巴结注射 B静脉注射 C皮内注射 D皮下注射 E肌肉内注射14免疫小鼠采血通常采用 A心脏采血或断尾法 B颈动脉放血或断尾法C颈静脉或摘除眼球采血 D摘除眼球或断尾法 E耳静脉采血或摘除眼球15较长时间(45年)保存抗体，通常采用 A4保存 B一10保存 C一20保存 D一30保存 E真

5、空干燥保存16在HAT选择培养基中可长期存活者是 A细胞多聚体 B融合的脾细胞与瘤细胞 C融合的瘤细胞与瘤细胞 D未融合的瘤细胞 E未融合的脾细胞17属于颗粒性抗原的是A脂多糖 B球蛋白 C白蛋白DDNA E血小板18属于可溶性抗原的是A荚膜 B菌毛 C鞭毛DIgG ESRBC19最常用的半抗原载体为A牛血清白蛋白 B牛甲状腺球蛋白 C人血清白蛋白D人甲状腺球蛋白 E球蛋白20亲合层析支持物最常用的是Asepharose2B Bsepharose4B Csepharose6BD多孔玻璃球E琼脂粉21破碎组织细胞制备蛋白质抗原最常用的方法为A反复冻融法B超声破碎法C表面活性剂处理法D自溶法E酶处

6、理法22连接在载体上的半抗原数目应在多少以上,才能有效地产生抗体?A4 B8 C10D15 E2023制备抗重链血清时,用于裂解免疫球蛋白的酶最好选用A木瓜蛋白酶B胃蛋白酶C胰蛋白酶D限制性核酸内切酶E胰肽酶24某抗原需制备10ml抗血清,应选择何种动物A家兔B小白鼠C马D绵羊E猴25可有效激发机体抗肿瘤效应的佐剂为A福氏佐剂B胞壁肽C细胞因子D羊毛脂E多聚核苷酸26从免疫血清中粗提球蛋白最简便的方法为A亲合层析B离子交换层析C凝胶过滤D超速离心E硫酸铵盐析27具有免疫原性的佐剂为A脂多糖B氢氧化铝C石蜡油D羊毛脂E多聚核苷酸28免疫接种后易引起局部持久溃疡和形成肉芽肿的佐剂为A福氏完全佐剂B

7、福氏不完全佐剂C细胞因子佐剂D内毒素E多聚核苷酸29制备人血清蛋白与福氏完全佐剂的乳化抗原时,两者比例最好为A1:1 B2:1 C3:1D4:1 E05:130某免疫原有10g,制备抗血清应选择哪种途径免疫A淋巴结内注射B皮内注射C腹腔注射D肌肉注射E静脉注射31首次与第二次免疫接种的时间间隔最好为A1W 内 B710 天C1020 天D2030 天 E30 天以上32第二次免疫接种后,免疫接种的间隔时间最好为A1W 内 B710 天C1020 天D2030 天 E30 天以上33分离亚细胞成分或大分子蛋白质最常用的方法为A超速离心法B低速离心法C高速离心法D选择性沉淀法E凝胶过滤法34免疫小

8、鼠的采血方法常为A静脉采血法B心脏采血法C颈动脉放血法D断眼法或摘除眼球法E股动脉放血法35制备针对伤寒沙门菌H 抗原的抗血清常选用的接种途径为A静脉注射B淋巴结注射 C腹腔注射D皮内注射E肌肉注射36厂家生产的抗IgG制剂一般的保存方法为A液体4保存 B液体-20保存C真空干燥保存D25保存E加叠氮钠保存(二)多项选择题(x型题)1从组织细胞中提纯某可溶性抗原，一般需经过下列哪些步骤 A破碎细胞 B选择性沉淀 C亲和层析 D与载体偶联 E 纯度鉴定2可用于破碎组织细胞制备可溶性抗原的方法有 A超声破碎法 B冻融法 C超速离心法 D酶处理法 E表面活性剂处理法3提取蛋白质免疫原所用的沉淀法包括

9、 A盐析法 B高分子聚合物沉淀法 C有机溶剂沉淀法 D核酸沉淀法 E醋酸沉淀法4提取蛋白质免疫原的技术有 A选择性沉淀 B超速离心 C凝胶层析 D离子交换层析 E亲和层析5免疫血清制备的过程涉及 A选择免疫动物 B免疫方法 C动物采血 D 免疫血清的纯化 E抗血清的鉴定6单克隆抗体纯化的方法 A亲和层析法 B凝胶过滤法 C离子交换层析法 D超速离心法 E盐析法7单克隆抗体制备的流程 A 抗原的免疫和细胞融合 B抗体初筛与克隆化 C 杂交瘤细胞的冻存与复苏 D单克隆抗体的批量生产 E单克隆抗体的纯化与鉴定8用于抗血清的免疫球蛋白片段的主要制备方法 A分离非共价键法 B分离共价键法 C溴化氰裂解法

10、 D酶裂解法 E乙醇裂解法9目前认为佐剂增强免疫应答的机理 A增加抗原的表面积和改变抗原构型 B佐剂与抗原结合改变抗原的物理性状 C增强巨噬细胞的吞噬作用 D佐剂与抗原结合后直接激活NK细胞发挥效应 E直接激活B细胞产生抗体二、填空题1 根据抗体制备的技术方法不同进行区分，人工制备的抗体可分为( ), ( )和( )三大类型。2抗血清鉴定的主要内容包括( )、( )、( )、( )等四个方面。3制备特异性免疫血清时，常用( )和( )两种方法去除杂抗体。4HAT培养基中三种关键成分是( )、( )和( )。5单克隆抗体的批量生产方法主要有两种( )和( )。三、名词解释1单克隆抗体(monoC

11、lonal antibody，MCAb)2佐剂(adjuvant)3基因工程抗体(genetiC engineel。ing anlibody)4嵌合抗体(ChimeriC antibody)5改形抗体(reshaped antibody，RAb)6双特异性抗体(13ispeCifiC：antibody，BsAb)四、问答题1简述单克隆抗体制备技术的主要步骤。2试述免疫血清应如何进行纯化。3叙述杂交瘤技术的基本原理。 第三部分 参考答案与题解一、选择题 。(一)单项选择题(A型题)1D 2A 3B 4A 5D 6B 7C 8D 9C 10A11E 12C 13B 14D 15E 16B17.E

12、18.D 19.A 20.B 21.A 22.E 23A 24.A 25.C 26.E 27.A 28.A 29.A 30.A 31.C 32.B 33.A 34.D 35.A 36.C(二)多项选择题(X型题)1ABCE 2ABDE 3ABC) 4ABCDE 5ABCDE 6ABCE7ABCDE 8ABCD 9ABC二、填空题1多克隆抗体单克隆抗体基因工程抗体2抗体效价抗体特异性抗体纯度抗体亲和力3亲和层析法吸附法4次黄嘌呤氨基蝶呤胸腺嘧啶5小鼠体内诱生法体外增殖培养法三、名词解释1单克隆抗体：是指仅识别单一抗原表位的B细胞杂交瘤产生的同源抗体，具有特异性强、效价高、生物活性单一、理化性状高

13、度均一等特点。 2佐剂：是指先于抗原或与抗原一起注入机体，能够增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的物质。 3基因工程抗体：是指应用DNA重组及蛋白工程技术对编码抗体的基因按不同的需要进行改造和装配，经导人适当的受体细胞后重新表达的抗体，主要包括人源化抗体、小分子抗体、双价特异性抗体和抗体融合蛋白等类型。 4嵌合抗体：又称人一鼠嵌合抗体，是从杂交瘤细胞中分离出鼠源单抗功能性V区基因，经基因重组与人抗体C区基因连接成嵌合基因后，插入适当的表达载体中，再共同转染宿主细胞，表达人一鼠嵌合抗体分子。嵌合抗体保留了单抗对抗原的特异亲和性，又含有人抗体C区的成分及其功能。 5改形抗体：是应用基因工

14、程技术在嵌合抗体基础上用人抗体可变区的骨架区序列取代鼠源单抗CDR以外的骨架区序列，重新构成既有鼠源单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体，该抗体对人体几乎无免疫原性。 6双特异性抗体：又称双功能抗体，它不同于天然抗体，其两个抗原结合部位具有不同的特异性，可以同时与两种不同特异性的抗原发生结合。四、问答题 1单克隆抗体是应用B细胞杂交瘤技术进行制备的，其主要操作步骤包括抗原免疫、亲本细胞的选择和制备、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选和克隆化、杂交瘤细胞体内接种或体外增量培养、单克隆抗体的纯化与鉴定。 2免疫血清的纯化主要是指提纯免疫血清中的IgG并去除无关的杂抗体。提纯IgG类抗体的方法有：硫酸胺盐析法粗提、离子交换层析法和亲和层析法，采用亲和层析法提取IgG时，可使用纯化抗原或葡萄球菌蛋白A交联sephamse 4B制成层析柱。另外，还可通