高效液相色谱法测定黄金咽喉片中甘草酸的含量(1)

1、高效液相色谱法测定黄金咽喉片中甘草酸的含量(1)                 作者：何兵，冯文宇，田吉，李春红，艾洪兵  【摘要】  目的建立黄金咽喉片中甘草酸的含量测定方法。 方法采用HPLC法测定甘草酸的含量。色谱柱为Dikma Kromasil C18柱（5m，250 mm×4.6 mm）；流动相甲醇0.2 mol/L醋酸铵-冰醋酸（66341）；流速0.8 ml·min-1；检测波长2

2、52 nm；柱温40；进样量10 l。结果甘草酸在0.44 g范围内具有良好的线性关系（r0.999 9），平均回收率为99.65，RSD为0.514（n6）。实验测得黄金咽喉片中甘草酸的含量为0.9781.086 mg/片。结论该方法简便、快速、有效、灵敏、准确、具有良好的重复性和回收率，可作为该制剂的定量分析方法。 【关键词】  高效液相色谱法；黄金咽喉片； 甘草酸Abstract：ObjectiveTo establish a method for the content determination of glycyrrhizic acid in Huangjing Yanho

3、u TabletMethodsThe content of glycyrrhizic acid was detected by HPLC. The separation was carried out on a Dikma Kromasil C18 column (5m，250 mm×4.6 mm) . The mobile phase was methanol-0.2mol/L ammonium acetate-glacialacetic acid（66341）. The flow rate was 0.8 ml·min-1. The dectetion waveleng

4、th was set at 252nm. The column temperature was 40 and  the sample was 10 lResultsThe calibration curve showed good linearity over the range of 0.44 g（r0.9999）. The average recovery was 99.65 with RSD 0.514（n6）. Each tablet contained Glycyrrhizic Acid 0.9781.086 mg.ConclusionThis method was sim

5、ple，rapid，efficient，sensitive，accurate and has good repeatability and recovery，it can be used as a quantitative analysis method for this preparationKey words：HPLC；  Huangjing Yanhou Tablet；  Glycyrrhizic acid    黄金咽喉片是由金银花、甘草等多味中药的有效部位组成的复方制剂，具有芳香透邪、清热解毒、生津润燥、利咽止痛等功效。主要用于治疗急

6、慢性咽炎、喉炎、扁桃体炎、口腔黏膜溃疡；亦可辅佐治疗细菌或病毒感染的其它呼吸道疾病。为完善制剂的质量标准，在对绿原酸含量采用HPLC测定的基础上，增加了采用HPLC测定方中的另一有效成分甘草酸的含量。1  仪器与试药1.1  仪器戴安高效液相色谱仪（P680A四元低压梯度泵，PDA-100二极管阵列检测器，TCC-100柱温箱，Chromeleon色谱工作站）；瑞士Precisa电子天平（XR 205SM-DR）；CQX25-06超声波清洗器（上海必能信超声有限公司，功率250W，频率25kHz）。1.2  对照品甘草酸铵（110731-200409），中国药品生

7、物制品检定所提供。在选定色谱条件分离后，未见其他杂质峰，含量以100 %计。1.3  试药甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯；水为重蒸馏水。1.4  样品黄金咽喉片及阴性对照样品（泸州医学院药学院药物研究所自制）。2  方法与结果2.1  提取条件的选择2.1.1  提取溶剂的选择取重量差异项下的本品20片，精密称定，研细，置称量瓶中备用，取约3.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，再分别精密加入甲醇、50甲醇、水及流动相50 ml，分别超声60 min，照中国药典甘草项下甘草酸含量测定方法1测定，测得甘草酸含量分别为：0.896，0.987，0.

8、735，1.086 mg/片。甲醇、50甲醇和水所提取样品其甘草酸含量均低于流动相所提取的样品，故采用流动相制备供试品溶液。2.1.2  溶剂体积的选择取本品细粉3.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，再分别精密加入流动相25，50，75，100 ml，分别超声60 min，照中国药典甘草项下甘草酸含量测定方法测定，测得甘草酸含量分别为：1.028，1.085，1.086，1.086  mg/片。根据测定结果，确定本法提取体积为50 ml。2.1.3  提取时间的选择取本品细粉0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，再分别精密加入流动相50 ml，分别超声提取15，3

9、0，45，60 min，照中国药典甘草项下甘草酸含量测定方法测定，测得甘草酸含量分别为：0.845，0.987，1.086，1.085 mg/片。可见本法超声45 min即可。2.2  色谱条件的选择2.2.1  检测波长的选择以甘草酸铵对照品、黄金咽喉片样品、阴性对照样品溶液进样，采用二极管阵列检测器在190380 nm范围内分别扫描其甘草酸的紫外吸收图谱，见图1。对照品和样品中的甘草酸最大吸收峰均在252 nm附近，在此波长下，阴性对照在甘草酸对应峰处无吸收，故检测波长选择252 nm。2.2.2  色谱柱的选择实验中考察了大连物理化学研究所 Lichroso

10、rb C18（10 m，200 mm×4.6 mm）、Dikma Kromasil C18 （5 m，250 mm×4.6 mm）、Dikma Kromasil C18 （5 m，150 mm×4.6 mm），以Dikma Kromasil C18 （5 m，250 mm×4.6 mm）色谱柱的分离效果最佳，故选择Dikma Kromasil C18（5 m，250 mm×4.6 mm）色谱柱。2.2.3  流动相的选择实验过程中首先考察了2005版中国药典部甘草项下测甘草酸含量的条件，即：甲醇0.2 mol/L醋酸铵溶液冰醋酸（67

11、331），但甘草酸峰后有一小峰紧随其后，为达到更好的分离效果，将甲醇比例约降低，改为66341，同时升高温度，将甘草酸峰保留时间稍提前，即：流动相为甲醇0.2 mol/L醋酸铵溶液冰醋酸（66341），柱温为40，流速为0.8 ml·min-1，在此条件下甘草酸峰与其后面的小峰分离度为4.06，分离效果提高。2.2.4  色谱条件色谱柱：Dikma Kromasil C18（5 m，250 mm×4.6 mm）；流动相：甲醇-0.2 mol/L醋酸铵-冰醋酸（66341）；检测波长252 nm；柱温40；流速0.8 ml·min-1；进样量10 l。2.3  试液的制备2.3.1  对照品溶液的制备  取经五氧化二磷减压干燥至恒重的甘草酸铵对照品适量，精密称定，加流动相制成每毫升含0.2 mg的溶液（折合为甘草酸每毫升含0.1959 mg）即得。2.3.2  供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品20片，精密称定，研细，置称量瓶中备用，取约3.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相50 ml，称定重量，超声处理（功率250W