高效液相色谱法测定胃炎消颗粒中人参皂苷Rg 1 的含量

1、高效液相色谱法测定胃炎消颗粒中人参皂苷Rg 1 的含量【关键词】 高效液相色谱法【摘要】 目的 建立胃炎消颗粒中人参皂苷Rg 1 的含量测定方法。 方法 采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，乙腈-0.05%磷酸溶液（20:80）为流动相，检测波长为203nm。 结果 人参皂苷Rg 1 对照品溶液的浓度在0.02240.1568mg/ml（r=0.99999）的范围内线性关系良好;平均回收率为95.5%（n=5），RSD值为3.6%。 结论 本方法稳定、重现性好，可作为建立测定复方中药制剂中人参皂苷Rg 1 的含量方法的参考。 【关键词】 胃炎消颗粒;人参皂苷Rg 1 ;高效液相

2、色谱法胃炎消颗粒由太子参、三七、石斛等十味中药组成，具有清热解毒、散结止痛之功效，临床用于治疗慢性萎缩性胃炎疗效显著。三七为其有效成分，而三七的主要活性成分为皂苷类成分，具有广泛的药理作用。三七常用于复方中，对三七皂苷成分分析成为了评价其药品质量的重要方法之一 1 。本文以人参皂苷Rg 1 为指标成分，研究建立了胃炎消颗粒的高效液相色谱定量分析方法，作为衡量和控制本品质量的指标之一。 1 仪器与试药 美国HP1100型高效液相色谱仪。Sep-pak C 18 微柱（美国）。乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。人参皂苷Rg 1 对照品（中国药品生物制品检定所，C703-200016，供含量测定用）

3、。胃炎颗粒10批（佛山德众药业股份有限公司）。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱:Lichrospher100RP-18e（5m）;流动相:乙脯-0.05%磷酸溶液（20:80）;流速:1ml/min;柱温:20;检测波长:203nm。理论板数以人参皂苷Rg 1 峰计算约为8000，色谱图见图13。图1 人参皂苷Rg 1 对照品HPLC图 图2 胃炎消颗粒HPLC图 图3 胃炎消颗粒三七阴性对照HPLC图 2.2 阴性样品测定 取缺三七的阴性对照样品约1g，精密称定，按供试液制备方法制得阴性对照液，依法测定。结果表明阴性样品对测定无干扰。 2.3 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg

4、 1 对照品10mg，置100ml量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 2.4 供试品溶液的制备 取胃炎消颗粒，研细，取1g，精密称定，加甲醇加热回流提取2次，每次50ml，30min，放冷，滤过，滤液及滤渣用少量甲醇洗涤，合并滤液，蒸干，残渣用水约5ml溶解，滤过，滤液加于已处理好的聚酰胺柱（湿法装柱，内径1cm，高25cm，粒度1430目）上，静置约20min，以水100ml洗脱，洗脱速度20滴/min，收集洗脱液，蒸干，残渣加水约5ml溶解，加于已处理好的Sep-pak C 18 微柱（先用甲醇10ml冲洗，再用水10ml冲洗）上，分别用水10ml、10%甲醇10ml、30%甲醇

5、10ml和70%甲醇20ml洗脱，分别收集10%甲醇和70%甲醇洗脱部分，70%甲醇洗脱液蒸至约2ml，转移至5ml量瓶中，用70%甲醇洗涤容器并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 2.5 线性关系考察 分别精密吸取人参皂苷Rg 1 对照品适量，用70%甲醇溶解配制成0.0896mg/ml的溶液，取此溶液5、10、15、20、25、30、35l，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品溶液浓度（mg/ml）为横座标，峰面积响应值为纵座标，得回归方程为:Y=7357.56218X-0.81771，r=0.99999。结果表明:当对照品溶液的浓度在0.02240.1568mg/ml的

6、范围内，呈良好的线性关系。见表1。略2.6 精密度试验 取样品（批号:030301）供试品溶液，重复进样6次，测得与人参皂苷Rg 1 色谱峰相应的色谱峰的峰面积响应值分别为:632.44、645.59、626.74、638.98、644.53、648.63，平均为639.48;RSD为1.3%。 2.7 稳定性试验 取样品（批号:030301）供试品溶液，在配制当天及第二天内不同的时间进样测定，测得与人参皂苷Rg 1 色谱峰相应的峰的峰面积响应值分别为:632.44、638.98、648.63、652.39、RSD为1.4%。 2.8 重复性试验 取样品（批号:030301）6份，每份约1.0

7、g，精密称定，依法制得供试品溶液，按拟定的方法试验，测定含量，平均含量为0.426mg/g，RSD=1.9%，结果见表2。 表2略 2.9 加样回收率试验 取已测定含量的样品（批号:030301）5份，每份约0.5g，精密称定，分别精密加入人参皂苷Rg 1 对照品溶液（0.0896mg/ml）3ml，照供试品溶液制备法，制得回收试验的供试液，进样测定，测得平均回收率=95.5%，RSD=3.6%（n=5），见表3。 2.10 样品测定 按供试液制备法制备以下10批样品的供试液，依法进样测定，计算人参皂苷Rg 1 含量，结果见表4。 3 讨论 3.1 目前有关文献报道测定人参单体皂苷的方法有薄层

8、扫描法 2 、高效液相色谱法 3 等。鉴于现行版中国药典中人参、西洋参等药材的含量测定项均采用高效液相色谱法 4 ;参考文献中，也较多的报道用高效液相色谱法测定三七药材中的人参皂苷成分，因此，本文采用了高效液相色谱法，测定胃炎消颗粒中三七的人参皂苷Rg 1 的含量。 表3略 表4略 3.2 本品是由太子参、三七、石斛等七叶中药组成的复方制剂，所含成分比较复杂，干扰成分较多，因此在使用HPLC法测定人参皂苷Rg 1 含量前需要进行样品预处理。本文曾考察用Sep-pak C 18 去除干扰的效果，结果表明只经Sep-pak C 18 微柱处理制成的供试液杂质峰仍较多，基线不平稳，未达到含量测定的要

9、求，因此，在使用Sep-pakC 18 微柱处理前需对供试液进行其它处理。本文曾比较聚酰胺柱和中性氧化铝柱的效果，结果表明经聚酰胺柱处理制成的供试液测得的HPLC图，杂质峰较少，基线较平稳，符合含量测 定的要求，所以选择了聚酰胺柱。 3.3 供试液加于Sep-pak C 18 微柱后，分别以水、10%甲醇、30%甲醇、70%甲醇和甲醇洗脱，结果水将大部分的糖、蛋白质、氨基酸等大极性成分洗出，10%甲醇和30%甲醇分别将不同极性的杂质大部分洗出，实验结果表明，上述洗脱液中均未检出人参皂苷Rg 1 ;用70%甲醇可将人参皂苷Rg 1 洗脱完全，甲醇洗脱液中未检出人参皂苷Rg 1 。 3.4 本文通

10、过对不同柱温、不同比例混合的乙腈-0.05%磷酸溶液作为流动相的比较，结果乙腈-0.05%磷酸（20:80）作为流动相，能避免其他成分对测定的干扰，使人参皂苷Rg 1 峰与相邻峰分离较好，基线平稳，理论板数以人参皂苷Rg 1 计，在8000以上。 3.5 用本文的含量测定方法，分别测定了不同批号的10批胃炎消颗粒样品，测定结果，人参皂苷Rg 1 的含量在0.450.84mg/g之间。 【参考文献】 1 黄永焯，王宁生.HPLC/ELSD法结合固相萃取测定三七中人参皂苷Rg1 、Rb1 和三七皂苷R1 的含量.中药新药与临床药理，2003，14（3）:180. 2 周志华，章观德，王菊芬.三七中皂苷成分分析的研究.药学学报，1981，16（7）:535-540. 3 于超，刁长发，夏文娟，等.反相