清热化湿3方对大鼠免疫性肝损伤治疗作用的对比观察

1、    清热化湿3方对大鼠免疫性肝损伤 治疗作用的对比观察        摘要：用BSA(小牛血清白蛋白)复制大鼠免疫性肝损伤模型，应用清热化湿3方进行治疗，观察形态学与肝功能生化学、肝纤维化指标。结果表明：(1)3方均可降低谷丙转氨酶(ALT)及透明质酸(HA)；(2)甘露消毒丹对血清前胶原肽(PC)、甘胆酸(CG)均有效；茵陈蒿汤降CG效果较好，而茵陈四苓散降PC作用较佳；(3)光镜、电镜结果显示：甘露消毒丹能较好治疗肝纤维化；茵陈四苓散次之；茵陈蒿汤对肝纤维化

2、治疗作用较差。关键词：甘露消毒丹；茵陈蒿汤；茵陈四苓散；免疫性肝损伤；肝纤维化中分类号：文献标识码：B文章编号：1000-5633(2000)02-0018-04 甘露消毒丹(以下简称甘方)、茵陈蒿汤(以下简称茵方)、茵陈四苓散(以下简称茵四方)是治疗病毒性肝炎湿热证的常用方，笔者在临床上辨证使用3方均获得很好的疗效1。本实验从形态学、肝功能生化学及肝纤维化指标方面，观察清热化湿3方护肝、抗肝纤维化作用，从而为临床疗效提供实验依据。1材料与方法1.1实验动物Wistar大鼠100只，雌雄各半，体重(130±10) g，由湖南中医学院实验动物中心提供。1.2试剂及药物(1)不完全弗氏佐

3、剂：由无水羊毛脂(上海油脂三厂，批号801102)与液体石腊(南昌扬子洲制药厂，批号980226)按35比例配制，高压灭菌，4 保存备用。(2)牛血清白蛋白(BSA)：电泳纯，德国产品，上海市生物化学试剂公司分装，批号9801108。(3)甘露消毒丹、茵陈蒿汤、茵陈四苓散药材均购于湖南中医学院第一附属医院中药房。1.3造模方法随机选取16只大鼠作为正常对照组，剩余84只大鼠按照文献2的方法对其进行BSA造模。1.4分组及给药造模成功后，先将56只雌雄大鼠按体重分层，然后随机分为造模对照组、甘露消毒丹组(甘方组)、茵陈蒿汤组(茵方组)、茵陈四苓散方组(茵四方组)，每组14只大鼠。3方药量依方剂学

4、规划教材按动物体表面积与成人用量折合加大3倍配制。常规浸泡煎煮，浓缩成分别含甘露消毒丹0.9 g/ml、茵陈蒿汤0.24 g/ml、茵陈四苓散0.49 g/ml的药液。治疗组以1 ml/(100 g.d)灌胃，正常对照组、造模对照组以温开水1 ml/(100 g.d)灌胃，共2个月。疗程结束后，采用乙醚麻醉、颈动脉插管取血及取肝组织备检。1.5检测指标及方法肝功能以日立7170型全自动生化分析仪分别测定，由湖南中医学院第一附属医院生化室完成。血清HA、LN用RIA法，试剂盒由海军研究所提供；血清CG、PC用RIA法，试剂盒分别由北京原子能研究所和重庆肿瘤研究所提供。由附属第一医院放免中心完成。

5、肝组织光镜观察标本：取右叶，以10%甲醛固定。肝组织电镜观察标本：取右叶，用锋利刀片将边缘修齐，取5 mm×1 mm×1 mm的组织块以2.5%戊二醛固定。分别由湖南中医学院病理检验室及湖南医科大学电镜室完成。1.6统计学处理计量资料采用方差分析，两两比较用q检验。2结果2.1各组大鼠肝功能结果各治疗组大鼠肝功总蛋白(TPR)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)、谷氨酰转肽酶(r-GT)、总胆红素(TBIl)、直接胆红素(DBIl)、间接胆红素(IBIl)、总胆汁酸(TBA)与造模组比较差异无显著性(P0.05)。ALT、白蛋白(ALB)、AKP、r-GT结果见表1

6、。组别nALT(u/L)ALB(g/L)AKP(u/L)r-GT(u/L)对照组12模型组11甘方组8茵方组9茵四方组8F(方差齐性)3.6653.9972.7653.339P-Value0.0120.0080.0390.018F crit2.5892.5882.5882.589     注：与模型组比较P0.05，P0.01。2.2各组大鼠HA、PC、LN、CG的含量变化 各治疗组大鼠层粘连蛋白与造模组比较差异无显著性(P0.05)。HA、PC、LN、CG结果见表2。组别nHA(ng/ml)PC (g/L)LN(ng/ml)CG(g/L)对照组11模型

7、组9甘方组8茵方组9茵四方组8F(方差齐性)3.2993.9265.7332.872P-Value0.0200.0090.0010.036F crit2.6062.6062.6062.606     注：与模型组比较P0.05，P0.01；与正常组比较P0.05。 2.3各组大鼠光镜、电镜观察对照组光镜：肝组织内小叶无间隔，肝细胞索呈放射状排列，见1-1。电镜：肝细胞结构基本正常，胞质内线粒体、糖原及粗面内质网丰富，肝细胞内可见核染色质呈块状散在分布，见1-2。    1-1、1-2正常对照组，肝细胞结构基本正常，

8、肝组织内小叶无间隔，肝细胞呈放射状排列，胞质内线粒体、糖原及粗面内质网丰富。模型组光镜：汇管区有大量纤维组织增生，呈宽带状，有假小叶形成，见2-1。电镜：肝膜面增宽，肝细胞皱缩，胆小管结构不清晰，肝细胞内线粒体减少，胞质内可见成束的胶原纤维，肝窦旁及狄氏间隙内有大量胶原纤维和纤维母细胞，并有炎性细胞浸润，见2-2。    2-1、2-2造模对照组，大量纤维组织增生，呈宽带状，有假小叶形成。肝细胞皱缩，胞质内可见成束的胶原纤维。甘方组光镜下未见纤维增生，见3-1。电镜下肝膜面稍宽，胆小管扩张，管内微绒毛脱落，肝细胞内线粒体丰富，大多数线粒体嵴较明显，胶原纤

9、维很少，可见大小不等的脂滴，见3-2。    3-1、3-2甘露消毒丹组，光镜下未见纤维增生，电镜下肝细胞内线粒体丰富，胶原纤维很少，可见大小不等脂滴。茵方组光镜：有较多纤维增生，较造模组少，呈窄带状，形成不完全间隔，见4-1。电镜：肝细胞内线粒体较丰富，但结构模糊，粗面内质网较多，大小不等脂滴较多，肝窦扩张，窦旁可见成束的胶原纤维，狄氏间隙增宽，间隙内贮脂细胞、胶原纤维、纤维母细胞大量增生，胆小管结构不清晰，见4-2。    4-1、4-2茵陈蒿汤组，有较多纤维增生，呈窄带状，形成不完全间隔。肝细胞内线粒体较丰富

10、，但结构模糊，粗面内质网及脂滴较多。茵四方组光镜：少量胶原纤维增生，中央静脉和门静脉区有少量纤维索放散延伸，但无间隔形成，见5-1。电镜：肝细胞内线粒体较丰富，结构不清晰，部分线粒体空泡变，核膜完整，核仁明显，胆小管结构清晰，部分肝窦扩张，窦旁可见束状胶原纤维。肝纤维化程度介于茵方与甘方之间，见5-2。    5-1、5-2茵陈四苓散组，少量胶原纤维增生，无间隔形成，肝细胞内线粒体较丰富，结构不清晰，部分线粒体空泡变，核模完整，核仁明显3讨论3.13方对ALT、HA的相同作用清热化湿3方临床适用于有湿重、热重、湿热并重之别的病毒性肝炎，对肝功能指标的改善

11、也各有侧重1。本实验将3方作用于同一模型，对ALT、HA均有效，是否提示只要有护肝作用的方剂，就能降ALT，以往研究也证实，用不同疏肝方作用于同一动物模型，均有不同程度的降ALT的作用，而对AST等指标的作用则不尽相同3。郑若玄等分别用上述3方作用于不同动物模型，同样也有降ALT作用46，这就表明不论是不同的治肝病方作用于同一模型，还是相同的治肝病方作用于不同模型均能降ALT，提示ALT这一肝功指标可能不是中医辨证在动物模型中以方测证的特异性指标。至于该实验中3方还能降HA，可能因为HA水平与肝纤维化有密切的关系，且与血清ALT活性呈正相关7，故3方降低ALT的同时也降低HA。3.23方对CG

12、、PC的不同影响清热化湿3方中的甘露消毒丹临床用于湿热并重型肝病患者，茵陈蒿汤用于热重于湿，茵陈四苓散用于湿重于热者。本研究结果显示：甘露消毒丹对CG、PC均有效，而茵陈蒿汤对CG有作用，茵陈四苓散只对PC有效，这一结果提示CG、PC这2项指标对中医辨证湿与热分型有一定的参考意义。以方测指标，茵陈蒿汤对CG有作用，那么CG可能与“热”的病理有关，如果临床上以CG升高为主，用药则选苦寒清热为主；茵陈四苓散对PC有效，那么PC则可能与湿的病理相关，如果临床以PC升高为主，用药则多选利湿药，如果CG、PC均升高，治疗则清热化湿并重。既往研究亦发现茯苓有利水渗湿之功，不仅临床治疗肝硬变腹水取得良好疗效

13、，同时可促进实验性肝硬变动物肝脏胶原蛋白降解，使肝内纤维组织重吸收8。恰好茵陈四苓散中有茯苓、猪苓等利水渗湿之品，甘露消毒丹中虽无茯苓，但亦有滑石、木通等淡渗利水之品，故2方均能降低PC，而茵陈蒿汤中无上述淡渗之品，则对PC无效。3.33方对大鼠肝脏形态学影响本研究电镜、光镜结果显示：甘露消毒丹对肝纤维化有较好的治疗作用，茵陈四苓散次之，茵陈蒿汤则作用较差，这与上述3方对PC的不同作用有关。型胶原为肝组织中主要胶原之一，在肝纤维化时显著增多，PC反映型胶原合成水平和纤维增生程度加重，恰好甘露消毒丹、茵陈四苓散能有效降低PC，同时这两方又对肝纤维化模型治疗也确有作用，茵陈蒿汤因对PC作用不及甘露

14、消毒丹和茵陈四苓散，所以对肝纤维化的作用也不及上述3方。其次可能还与甘露消毒丹、茵陈四苓散能有效的清除循环免疫复合物(CIC)，同时抑制CIC激活补体作用有关。茵陈蒿汤则无抑制CIC、清除补体的作用。可能与免疫复合物可激活补体，损伤局部组织，加重炎症反应，加重肝纤维化有关。湖南省卫生厅中医管理局重点资助项目（编号 98002）赵国荣（1955-）女，山西襄垣人，湖南中医学院第一附属医院副教授、副主任医师，硕士研究生导师，主要从事中医温病及肝病的研究。赵国荣（湖南中医学院 第一附属医院，湖南 长沙410007）曹军连（湖南中医学院 第一附属医院，湖南 长沙410007）刘近明（湖南中医学院 第一附属医院，湖南 长沙410007）卢岳华（湖南医药专科学校，湖南 长沙410005）参考文献：1赵国荣，贺又舜，刘庆田，等.辨证治疗病毒性肝炎肝功能损害295例疗效分析J.湖南中医杂志.1998，14(1)：1112.2朱启贵，方步武，竺稽能，等.牛血清白蛋白免疫性肝纤维化动物模型的研究J.中华病理学杂志，1993，22(2)121.3赵国荣，刘近明，李承哲，等.四逆散、逍遥散及其配伍丹参或桃仁对大鼠免疫性肝损伤影响的对比研究J.湖南中医学院学报.1999，19(4)：911.4