环氧合酶-2和ki-67在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达

1、环氧合酶-2和ki-67在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达 11-01-10 13:29:00 作者：赵秀敏，吴静，马瑶编辑：studa20【摘要】 目的 研究环氧合酶-2(COX-2)和ki-67在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤样变(CIN)、宫颈鳞状细胞癌(SCC)中的表达及其相关性。方法 RT-PCR法检测COX-2 mRNA在正常、炎性、CIN组织和SCC组织中的表达；免疫组化法检测各组中COX-2和ki-67蛋白的表达。结果 COX-2 mRNA和蛋白在正常组无表达，在炎性、CIN和SCC组表达升高(P0.05)，COX-2蛋白的表达与肿瘤体积和浸润深度有关(P0.05)。ki-67在正常组中偶

2、有表达，在炎性组和CIN组表达增高，在SCC组显著增高(P0.01)。COX-2与ki-67蛋白的表达相关(r=0.675，P0.001)。结论 COX-2表达增高可能是宫颈癌发生发展的早期事件，与细胞异常增生有关。 【关键词】 环氧合酶-2；Ki-67；宫颈癌；细胞增殖ABSTRACT: Objective To study the expression of cyclooxygenase (COX-2) and ki-67 in chronic cervicitis, cervical intraepithelial neoplasia (CIN), squamous carcinoma

3、of the cervix(SCC)and their relationship. Methods Tissue samples were harvested respectively from normal, inflammational, CIN and 30 SCC tissues. The expression of COX-2 mRNA was detected by RT-PCR method. COX-2 and ki-67 proteins were detected by inmmunohistochemical method. Results The overall exp

4、ression of COX-2 mRNA and protein was higher in inflammation, CIN and SCC groups than that in normal cervix (P0.05). COX-2 protein expression was correlated with tumor size and invasion depth (P0.05). Ki-67 protein was higher in the other groups than that in normal cervix (P0.05). Ki-67 was expresse

5、d in SCC group at a high level, which significantly differed from the expression in inflammation group (P0.01). A significant correlation was found between COX-2 and ki-67 protein (r=0.675, P1.6)，计算出RNA浓度，取2 g进行RT-PCR。引物设置：COX-2(530 bp)上游引物：AAGCCTTCTCTAACCTCTCC；下游引物：TAAGCACATCGCATACTCTG；-Actin(303 b

6、p)上游引物：AGCGGGAAATTGTGCATG；下游引物：CAGGGTACCTGGTGGTGCC(由陕西理生医疗科技有限公司合成)。在同一反应体系，按照RT-PCR酶混合物试剂(陕西理生医疗科技有限公司)说明结合参考文献5提供的逆转录系统及参数进行RT-PCR：37 反应30 min，95 3 min灭活逆转录酶后95 变性30 s，57.4 退火30 s，72 延伸30 s，反应30个循环。取扩增产物进行0.5 mg/L琼脂糖电泳，溴化乙锭染色，紫外灯下观察结果。用凝胶成像系统进行半定量分析(美国Bio-Rad凝胶成像分析仪，型号：Gel Doc EQ)，取目的基因条带和-actin条带

7、强度的比值作为目的基因的相对值。1.3 免疫组化染色及结果判定常规切片(4 m)，脱蜡，柠檬酸沸水修复抗原，其余步骤按SP免疫试剂盒(北京中山试剂公司产品)说明操作。抗COX-2多克隆抗体、抗ki-67单克隆抗体购自北京中山试剂公司，工作浓度分别为11 200，1200。用已知膀胱癌阳性片作阳性对照，PBS液代替一抗作阴性对照。结果判断：COX-2阳性染色主要为胞质，少数为核膜着色。ki-67阳性染色主要为胞核和核膜着色。免疫组织化学标本经Image-proplus图像分析软件进行图像分析6，每个标本随机选取3个高倍视野，测定单位面积下平均灰度值，最后求每张切片的平均灰度值及标准差。本次测量灰

8、度值标准，极白为255，极黑为0，共256阶。故染色越浅，灰度值越大；染色越深，灰度值越小，考虑背景色的误差，将灰度值200者视为阴性。1.4 统计学处理所有数据用SPSS 11.5统计软件处理。多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)，两组间均数比较根据方差是否齐性采用t或t检验，等级资料采用Spearman相关系数分析，两组计量资料之间的关系采用Pearson相关系数分析，P0.05为有统计学意义。2 结 果2.1 COX-2 mRNA和蛋白的表达COX-2蛋白在正常组无表达，炎性、CIN组、SCC组表达依次升高，与正常组比较具有统计学差异(P0.05，表1)。宫颈病变各组COX-2蛋白表达阳性率增高。COX-2 mRNA在正常组不表达，宫颈病变各组表达升高(图1)，但与蛋白表达不完全一致(r=0.135，P=0.68)。表1 COX-2在不同的宫颈组织中的表达（略）2.2 ki-67蛋白在宫颈组织中的表达