反相高效液相色谱法测定人参健脾片中橙皮苷的含量(1)

1、反相高效液相色谱法测定人参健脾片中橙皮苷的含量(1)        【摘要】 目的采用反相高效液相色谱（RP?HPLC）法测定人参健脾片中橙皮苷的含量。方法采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 m)，以甲醇?冰醋酸?水（31465）为流动相，流速1.0 ml·min-1，柱温35，检测波长283 nm。结果在0.2282.592 g之间，峰面积与进样量的线性关系为Y=1.0×106X3.72×103，（r=0.999 6，n=6），平均回收率为9

2、8.53 %, RSD=0.87%（n6）。测得3批样品中橙皮苷的含量分别为1.38，1.36，1.35 mg/片。结论 所建方法简便、准确、重复性好，可用于人参健脾片的质量控制。 【关键词】 人参健脾片； 橙皮苷；反相高效液相色谱法Determination of Hesperidi in Renshenjianpi Tablet by RP?HPLCSHANG Yuan hong， LIU Yuan ，TIAN Jin feng1.Ethnic Pharmaceutical Institute of Southwest University for Nationalities, Cheng

3、du 610041,China;2. Southwest University, Chongqing 400715, ChinaAbstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of hesperidi from Renshenjianpi Tablet. MethodsThe column was kromasil C18 (200 mm×4.6 mm,5 m).The mobile phase consisted of methanol?acetic acid?water (31：4：65 ) with

4、 the flow rate of 1.0 ml·min-1 and the UV detector at 283 nm. ResultsThe method showed a good relationship in the ranges of 0.2282.592 g (r=0.999 6) for hesperidi, the average recovery was 98.53%（RSD=0.87%）.The hesperidi contents of three batch samples were 1.38 mg ,1.36 mg ,1.35 mg respectivel

5、y. ConclusionThis method is simple, reproducible and suitable for the determination of the contents of hesperidi in Renshen Jianpi Tablet .Key words：Renshenjianpi Tablet;    Hesperidi;    RP?HPLC    人参健脾片由人参、陈皮、青皮、甘草、当归、枳壳等17味中药组成。具有补气健脾，开胃

6、消食之功效。用于脾虚湿困所致的食少便溏，或吐或泻，脘腹肚满，四肢乏力，面色萎黄等症。本品处方中陈皮、青皮、枳壳均含有橙皮苷成分，其橙皮苷的含量测定方法较多1,2，但笔者到目前未见对该制剂中这3味药材的橙皮苷含量控制的文献报道。所以本文拟建立高效液相色谱法测定制剂中的橙皮苷含量方法，为控制其制剂质量提供了一定的科学依据。1 仪器与试药    美国SSI液相色谱仪（浙江大学N2000色谱工作站）；德国赛多利斯BP211D电子天平；上海波龙电子仪器有限公司USC?502超声波清洗器。    橙皮苷对照品由中国药品生物制品

7、检定所提供（供含量测定用，批号721?200211）；甲醇为色谱纯；水为重蒸水，其余试剂为分析纯。人参健脾片（批号20040907，20040908，20040909）。2 方法与结果2.1 色谱条件和系统适用性实验Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 m)，流动相为甲醇?冰醋酸?水（31465）；流速为1 ml·min-1，柱温35 ，检测波长为283 nm，进样量10 l。橙皮苷峰与其他峰达到基线分离，峰形对称，橙皮苷峰与相邻峰分离度大于1.5，按橙皮苷峰计，色谱柱理论塔板数不低于3×103，色谱图见图1。按上述色谱条件，进对照品溶液

8、、供试品溶液、三阴性对照溶液各10 l，绘制色谱图。结果见图1。2.2 对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品1.44 mg，置10 ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得0.144 ml·min-1的对照品溶液。2.3 样品溶液的制备取本品5片，除去包衣，研细，精密称定1.0 g，置平底烧瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，称定重量，加热回流30 min，取出放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置取上清液微孔滤膜（0.45 m）滤过，取续滤液作供试品溶液。2.4 缺陈皮、青皮、枳壳三阴性对照溶液精密称取缺陈皮、青皮、枳壳三阴性样品1.0 g，按供试品溶液的制备方法制得缺

9、陈皮、青皮、枳壳三阴性对照溶液。2.5 方法学考察2.5.1 线性关系的考察精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成不同浓度的对照品溶液，摇匀，作为对照品溶液，分别再按“2. 1”项色谱条件精密进样0.228，0.864，1.440 ，2.016，2.592 g，测定峰面积。以峰面积（A）为纵坐标，进样量（C）为横坐标，进行线性回归，得回归方程：Y=1.0×106X3.72×103，（r=0.999 6，n=6），橙皮苷对照品进样量在0.2282.592 g范围内与峰面积的线性关系良好。2.5.2 精密度实验精密吸取同一对照品溶液，在上述同一色谱条件下，连续进样5次，每次10

10、l，测定RSD0.42%（n5），表明精密度良好。2.5.3 稳定性实验精密吸取供试品溶液在0，4，8，12，16 h分别进样，进行测定，结果其RSD0.36%，表明供试品溶液中橙皮苷在16 h内含量稳定。2.5.4 重复性实验分别精密称取同一批号样品5份，按供试品溶液制备方法制备，依法进样测定，结果RSD0.29%（n5），表明本方法重复性良好。2.5.5 回收率实验精密称取已知含量的样品0.5 g，6份，定量加入一定量的橙皮苷对照品，按供试品溶液制备方法制备，进样，测定，计算回收率。结果见表1。2.5.6 样品测定结果分别称取不同批号的样品，再分别按“2.3”项下操作，采用“2.1”项下方法进行测定，3批样品中橙皮苷含量分别为1.38，1.36和1.35 mg/片。3 讨论3.1 人参健脾片方中药味较多，成分复杂，可供选择的指标成分较多，但成分互相分离较困难，考虑到陈皮、青皮、枳壳为浸膏入药，且含有相同成分橙皮苷，因此确定测定橙皮苷含量作为控制该药品质量的指标。表1 加样回收率实验结果（略）3.2 对制剂陈皮、青皮、枳壳三阴性含量控制的文献报道较少，在工艺研究中应考察各药材相应所测成分的转移率高低，从而为制剂提供较好的科学依据。3.3 在流动相的选择中，曾考察了甲醇?冰醋酸