W4302水产品中违禁抗菌药物的检测标准工作曲线的制备-4-微教材

1、农产品/食品质量安全检测技术课程-微教材微课编号W4302微课名称水产品中违禁抗菌药物的检测标准工作曲线的制备所属模块农产品/食品中农药残留检测子模块M4-3水产品中违禁抗菌药物的检测海虾中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定关键词标准工作曲线；标准物质；是否通用通用 农产品 食品是否重点建设是 否微课类型实验实训型微课形式混合拍摄式微课类型实验实训型教学目标掌握标准工作液的配制方法和标准曲线绘制方法。教学内容知识点技能点1、以固体标准物配制标准储备液、混合标准中间液、混合标准工作液操作2、标准曲线的绘制边学边练一、任务：水产品中违禁抗菌药物的检测标准工作曲线的制备标准曲线是标准物质的物理/化学属性跟

2、仪器响应之间的函数关系。建立标准曲线的目的是推导待测物质的理化属性。在分析化学实验中，常用标准曲线法进行定量分析，通常情况下的标准工作曲线是一条直线。与校正曲线不同，它是以标准溶液及介质组成的标准系列，标绘出来的曲线。校正曲线的标准系列的伴生组分必须与试样相匹配，以便测量结果的准确。只有标准曲线与校正曲线相重合的条件下，才可以用标准曲线来代替校正曲线。标准物质：孔雀石绿（MG）和结晶紫（GV）参考标准：国家标准GB/T 20361-2006 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定 高效液相色谱荧光检测法二、操作技术要点： 前面我们已经分别介绍了孔雀石绿和结晶紫的性质及检测方法，下面我们来具体讲解

3、标准工作曲线的制备。1、储备液配制。准确称取适量的孔雀石绿、结晶紫标准品，用乙腈分別配制成100g/ml的标准贮备液，配置完后放入冰箱。2、混合标准中间液配制。用1.00 mL的移液管移取孔雀石绿100 g/ml的标准储备液1 mL入100 mL容量瓶中，移液前，先对移液管用少量标准溶液进行润洗，一般润洗2-3次。再用另一支1.00 mL的移液管移取结晶紫100 g/ml的标准储备液1mL入同一100 mL容量瓶中。用乙腈稀释至刻度，配制成1g/mL的混合标准中间溶液，可采用移液器加入适量乙腈到容量瓶中，然后用滴管定容至刻度。最后将配制好的混合违禁药标准中间液放到-18冰箱中避光保存。3、混合

4、标准工作液配制。在检测前，用乙腈将混合标准液稀释成所需质量浓度的标准工作液。一般来说，按照GB 20361-2006标准，孔雀石绿和结晶紫混合标准溶液的线性范围为0.1 ng/mL600 ng/mL。标准曲线一般要涵盖第一个数量级，其余标准溶液的浓度一般为最低点的2、5、10、20倍。本次实验根据标准将工作曲线浓度配制为：1、2、5、10、20 ng/mL。即分别吸取1g/mL混合标准溶液10、20、50、100、200 L于10 mL容量瓶中。 移液枪在使用前先通过旋转调整到所需容积，再装上枪头，对枪头要先进行润洗。再加入硼氢化钾溶液0.03 mol/L2mL进行还原，硼氢化钾溶液呈泡腾状，用移液管吸取时要小心操作。再用乙腈准确稀释至10.00 mL，配制适当浓度的混合标准工作液。4、检测条件高效液相色谱仪（岛津LC-20AT），可进行梯度淋洗，配有荧光检测器(FLD)。色谱柱：ODS-C18柱，250 mm×4.6mm(内径），粒度5m。采集时间15min；泵模式为低压梯度；流速：1.3 mL/min。流动相：乙腈+乙酸铵缓冲溶液，pH4.5)=80+20。最大压力：20Mpa；激发波长：265nm；发射波长：360 nm；进样量：20L；柱温：35。5、检测按照检测条件准确操作仪器设备对混合标准工作液进行检测。6、标