输血后丙型肝炎病毒感染的血清病毒定量研究

1、    输血后丙型肝炎病毒感染的血清病毒定量研究         【摘要】目的研究血清丙型肝炎病毒(HCV)含量与HCV致病的关系及HCV含量与抗-HCV和丙氨酸转氨酶(ALT )的相关性。方法以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对HCV感染的受血及相关供血 系列血清进行HCV RNA定量分析，同时检测ALT与抗-HCV。结果致输血后HCV感染的供血中，HCV RNA平均含量为10 拷贝/ L；抗-HCV及ALT的异常检出率随HCV RNA滴度升高而增加。结论低含量HCV

2、供血即可导致输血后感染，病毒含量与抗-HCV(+)及ALT 水平有显著正相关，采用ALT加抗-HCV联合筛检供血可明显降低输血后HCV感染。【关键词】丙型肝炎病毒；供血者；丙型肝炎病毒定量；丙型肝炎病毒抗体Quantitative study of hepatitis C virus RNA in sera of patien ts with posttransfusion hepatitis C virus infection.WANG ZhimingTAN FumingCHEN Weihuaet al.（Department of Infectious Diseases, 260th Ho

3、spital of PLA, Hebei Shijiazhuang, 050041, China）【Abstract】ObjectiveTo study the relationship betw een the hepatitis C virus (HCV) RNA level the level of alanine aminotransferas e (ALT) as well as anti-HCV in the sera of HCV-infected blood recepients and t heir related blood donors. MethodsThe serum

4、 HCV RNA was detected by neverse transcripti on-polymetase chain reaction (RT-PCR) quantitatively and the levels of ALT and anti-HCV were simultaneously detected. ResultsIn the sera of donors which caused posttransfusion HCV in fection, the mean level of HCV RNA were 10 copies/L. The positive rate o

5、f anti-HCV in serum was increased in the patients with higher HCV RNA level. T here was a strong correlaton between the HCV RNA level and ALT value. ConclusionThe results suggested that posttransfusion HCV infection could be caused by transfusing blood with low HCV RNA level and exclusion of do nate

6、d blood for elevated ALT or positive anti-HCV could reduce the incidence o f posttransfusion hepatitis C infection.【Key words】Hepatitis C virus; Blood donor; Quantity of hepatitis C virus RNA; Antibody to hepatitis C virus丙型肝炎病毒(HCV)是输血后感染的主要病原。HCV在感染者血清中水平很低，尚无灵敏的HC V抗原检测法。随着HCV RNA定量检测的开展，为研究输血后HC

7、V感染的流行病学及临床特点 提 供了新途径。我们对输血后HCV感染者及相关供血员连续随访5年，将采集血清统一检测HCV RNA定量，并与其它指标对比，分析临床意义。材料与方法一、标本采集对1992年确诊的7例输血后HCV感染者及5例相关供血员随访采血5年，采集的41份标本于24 h 内测丙氨酸转氨酶(ALT)，剩余血清存于低温冰箱中，统一待检其它项目。二、检测方法(一) HCV RNA定性检测方法为逆转录-套式-聚合酶链反应(RT-nested-PCR)，试剂由 华美生物公程公司生产提供。(二) HCV RNA定量检测按照李伯安等2的方法进行，由美国AcuGen公司提供试 剂，解放军第302医

8、院实验室协助检测，提供结果。(三) 抗-HCV检测为酶联免疫法，试剂由上海实业科华生物技术有限公司生产提供。(四) ALT检测采用赖氏法检测。三、统计学处理方法2检验，相关系数，t检验。结果一、供血中HCV RNA含量与致病关系对引起输血后HCV感染的10份供血测定HCV RNA含量，结果为1010 拷 贝/L，平均10拷贝/L。二、定性与定量检测结果比较两种检测结果见表1。以定量实验结果为标准，定性实验的阳性漏检率为0，阴性漏检率为 22.2%，两者相对符合率为92.9%。表1HCV RNA定性与定量结果比较HCV RNA(拷贝/L)<107107108109合计RT-nested-P

9、CR定性(+)21416234Rt-nested-PCR定性(-)70007合计91416241     三、HCV RNA定量与抗-HCV结果比较检测结果见表2。表2HCV RNA含量与抗-HCV检出率的关系HCV RNA(拷贝/L)标本数抗-HCV(+)检出数阳性率(%)<107921071491081816合计4127     注：107组与<107组比较P<0.05，108组与<107组比较P<0.01 四、HCV RNA含量与ALT异常的关系表3显示，随着血清HCV RNA滴

10、度的增高，ALT的异常率及平均值也随之增加。表3HCV RNA定量变化与ALT异常的关系HCV(拷贝/L)标本数ALT异常例数%平均值(U/L)<107931071471081813     各组间比较无明显统计学差异 五、血清HCV RNA含量变化与ALT水平的相关性对12例供血及受血者的36份随访血清检测表明，HCV RNA含量变化与ALT水平高低比较呈正相 关(r=0,52,t=3.79,P<0.001)，相关有非常显著性，见表4。表4随访血清HCV RNA含量与ALT值的比较编号第1年第2年第3年HAHAHA供血1<104<

11、;10101060210621088101793107103510194101102010265<1071012<10206<1010<10471059受血7<10241057102028102861039239101103610179101018010120101211108<1013101212107310841026     注：H代表HCV RNA(拷贝/L)，A代表ALT(U/L)，表中10的表达形式是根据对数公式N=10lgN计算出来的。例如检查结果为4.79×10lgN形式，则4.79=10，查

12、对数表lg4.790.68，所以 原结果可写为10×10=10 讨论据史宣玲等1报道，HCV的感染水平很低，感染人群血循环中HCV RNA含量波动在10拷贝/L10拷贝/L，本文研究结果提示，HCV感染的献血及受血 者，病毒量在1010拷贝/L间，与文献报道大致相同。我们对10例输血后HCV感染的相关供血进行HCV RNA定量分析，发现其滴度在101 0拷贝/L间，平均值为10拷贝/L，提示低含量的HCV RNA即能引起输血后 HCV感染。由于定量检测操作条件要求高，不加注意可使结果出现偏差。为慎重起见，我们对大部分标 本进行了2次定量分析，加以认定，并与定性检测结果相比较，两者的相

13、对符合率为92.9%， 与李伯安的结果类似2。说明检测结果有相对可信性。机体感染HCV后其血清一般在115个月内产生抗-HCV。抗-HCV的产生是否与HCV RNA含量 有关 ，本组标本检测结果显示，随着病毒含量的增加，抗-HCV的阳性率也相应提高。可以推断 两者呈正相关。国内外均有报告3，急性丙肝抗-HCV阳性率较低，滴度也较低， 易转阴。而慢性丙型肝炎抗-HCV阳性率高，且呈持续高滴度。对本组9例抗-HCV阳性(+)者 随访5年，结果无1例阴转，说明他们处于持续感染状态。经检测其抗-HCV滴度均高于阴性 对照值上限3倍以上，与HCV RNA高含量正好相对应。HCV RNA含量与ALT水平是

14、否正相关，文献中报道是不一致的。本文41例检测表明，病毒含量 增加后，ALT的异常率及平均异常值均升高。经相关系数显著性处理后显示，两者间相关有 非常显著性。由于ALT升高还可受合并HBV感染，饮酒，药物等因素影响，故在今后的研究中 应尽量排除这些因素干扰，使结论更加客观。目前血液HCV的筛检指标主要是抗-HCV，定性或定量PCR法检测HCV RNA虽较可靠，但操作复 杂，价格昂贵而不能作为普查手段。本研究印证了血清ALT水平与HCV RNA含量的正相关性， 为HCV感染的供血筛检提供了参考。本组41例标本若以定量结果为标准，则有32例为HCV感染 ，其中抗-HCV的阳性检出率为78.0%(25/32)，ALT异常的检出率为62.6%(20/32)，两者联合 的检出率为87.5%(28/32)。因此把ALT(>正常值)作为指标与抗-HCV联合筛检可提高供血HCV 感染的检出率，进而有效地减少输血后HCV感染。本课题受全军95医药攻关课题基金资助(96L049)作者单位：王志明（050041河北省石家庄，解放军第260医院传染科）谭复明（050041河北省石家庄，解放军第260医院传染科）陈伟华（050041河北省石家庄，解放军第260医院传染科）李明山（050041河北省石家庄，解放军第26