Twist蛋白、E-cadherin、VEGF在食管鳞状细胞癌中的表达

1、Twist蛋白、E-cadherin、VEGF在食管鳞状细胞癌中的表达         11-03-30 14:27:00     编辑：studa20                作者：赵杰,杨春雨，王丽华，孟海，李春宏，高志安【摘要】  目的 研究转录因子Twist蛋白在食管鳞状细胞癌（ESCC）中的表达及其通过

2、对上皮型钙黏附蛋白（E-cadherin）、血管内皮生长因子（VEGF）的作用在判断肿瘤的生物学行为方面的意义。方法 采用SP免疫组化方法检测了54 例ESCC组织（20 例癌旁组织作为对照）中Twist的表达。结果 Twist蛋白阳性表达率（70.1%）明显高于癌旁组织（15%），（P = 0.000）；Twist在有外膜浸润的病例中阳性表达率明显高于无外膜浸润的病例；在有淋巴结转移组中的阳性表达率明显高于无淋巴结转移组；在TNM分期期中的阳性表达率明显高于在期中的阳性表达率(P0.05）；Twist蛋白表达与ECadherin存在明显负相关（r=0.401, P =0.003）；与VEGF

3、存在明显正相关关系（r=0.526, P = 0.000）。结论 Twist蛋白在ESCC中过度表达，可能通过分别上调和下调VEGF、E-cadherin的表达，进而在ESCC的浸润、转移过程中发挥重要作用。 【关键词】  食管鳞状细胞癌; Twist；E-cadherin；VEGF；免疫组织化学Abstract：Objective  To investigate the expression of Twist protein in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) and the significance in deter

4、mining the biological behaviors of the tumor by its function on E-cadherin (E-cad) and vascular endothelial growth factor (VEGF). Methods  Twist，E-cad and VEGF proteins expression were detected by SP immunohistochemistry method in 54 cases of ESCC（controlled with 20 cases of paraneoplastic tiss

5、ue specimens）.Results  The positive rate of Twist protein was higher in ESCC (70.1) than that in paraneoplastic tissues (15%,P=0.000）.The expression of Twist protein in the groups of adventitia invasion，lymph node metastasis and stage were significantly higher than that in the groups of non-adv

6、entitia invasion, non-lymph node metastasis and stagerespectively (P0.05). Negative correlation was obtained between the expression of Twist and E-cad proteins (r=0.401, P=0.003), while positive correlation was gained between the expression of Twist and VEGF proteins (r=0.526, P=0.000）. Conclusions&

7、#160; The over-expression of Twist protein in ESCC might play an important role in the invasiveness and metastasis of the tumor by down-regulating the expression of E-cadherin and up-regulating the expression of VEGF.    Key words:esophageal squamous cell carcinoma; Twist; E-cadherin;

8、 VEGF; immunohistochemistry    Twist基因是存在于果蝇、鼠、人等生物体内的一种碱性螺旋环螺旋转录因子。人Twist基因位于7p21.2,含有2个外显子和一个内含子，编码由202个氨基酸组成的蛋白质，属于碱性螺旋环状结构家族中高度保守的转录因子之一；近期研究发现，Twist在抑制肿瘤凋亡,促进肿瘤细胞的转移进程中起重要作用1。本研究采用免疫组织化学SP法检测Twist蛋白在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织中的表达，并探讨Twist与上皮型钙粘蛋白（Ecadherin）及血管内皮生长因子（VEGF）在ESCC侵袭、转移等方面的作用。&#

9、160;   1  材料与方法    1.1  标本来源    54例食管鳞状细胞癌标本和20 例癌旁组织取自2004年1月至2007年1月辽宁医学院附属第一医院病理科存档蜡块。其中男性49 例，女性5 例，年龄3977 岁；高-中分化39 例，低分化15 例；有淋巴结转移36 例，无淋巴结转移18 例；临床病理分期采用国际抗癌联盟2002年TNM分期标准，期38 例，期16 例。标本均经10%甲醛固定，石蜡包埋，4微米厚连续切片。所有患者术前均未接受放、化疗及生物治疗。  

10、  1.2  试剂与方法    1.2.1  主要试剂  兔抗人Twist多克隆抗体为美国Santa Crus公司产品, 鼠抗人VEGF单克隆抗体、鼠抗人Ecadherin单克隆抗体及免疫组化试剂盒均购自福建迈新生物技术有限公司。    1.2.2  方法  采用免疫组化SP法，按照SP免疫组化试剂盒说明书所示步骤进行，切片经枸橼酸缓冲液（pH=6.0）高压热修复预处理。PBS代替一抗作为阴性对照，用已知阳性组织切片作为阳性对照。    1.2.

11、3  免疫组化结果评价标准  Twist、VEGF、Ecadherin蛋白阳性表达呈棕黄色颗粒。免疫组织化学结果采用半定量记分法判定,按阳性着色程度评分:0分为无着色；1分为浅黄色；2分为棕黄色；3分为棕褐色。再按阳性细胞所占比例评分:0分为阴性；1分为<10%；2分为11%50%；3分为51%75%；4分为>75%，以两者乘积判定结果: 412分定为阳性,4分以下定为阴性。    1.2.4  统计方法  采用SPSS13.0统计分析软件进行采用2检验，Spearman相关分析。  

12、0; 2  结    果    2.1  Twist蛋白在ESCC中的表达    Twist蛋白表达呈棕褐色，定位于细胞质、细胞核，以细胞质为主（见图1）。54 例癌组织中，阳性38 例，阳性率为70.1%；癌旁组织中Twist阳性3 例，阳性率为15% ，其差异有统计学意义(2=18.11， P=0.000)；在有外膜浸润的病例中阳性表达率明显高于无外膜浸润的病例（2=5.131, P =0.024）；在有淋巴结转移组中的阳性表达率明显高于无淋巴结转移组（2=17.763, P =0.000）；在TNM分期期中的阳性表达率明显高于在-期中的阳性表达率，（2=4.474, P =0.034）；而与患者性别、年龄、肿瘤大小及肿瘤分化等因素均未显示相关性(见表1)。 表1  Twist与ESCC临床病理特征的关系临床    2.2  Ecadherin 、VEGF 在 ESCC中的表达（见图2、3）。    Ecadherin阳性表达以胞膜着色为主, VEGF阳性表达以胞质着色为主,均呈现明显的棕黄色颗粒。54例ESCC中,