组织细胞基因组DNA快速提取试剂盒

1、组织细胞基因组DNA快速提取试剂盒编号：N1141/N1142说明书下载组织细胞基因组DNA快速提取试剂盒 货号规格价格N114150次420N1142100次760 产品组分组分货号N1141N1142消化缓冲液DS15 ml30 ml裂解液MS20 ml40 ml蛋白酶K1 ml2 ml去蛋白液PS30 ml60 ml漂洗液PE15 ml30 ml纯化液TE5 ml10 mlDNA纯化柱 50个 100个说明书1份1份注： 裂解液MS有轻微腐蚀性,请不要直接接触。        &

2、#160; 漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。 保存条件蛋白酶K于-20保存。其余试剂置于室温（15-25）干燥条件下保存1年。消化缓冲液DS如有沉淀，在55加热溶解，待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA纯化效率。 产品说明    本产品用于多种动物组织（新鲜或冻存）与培养细胞等样本的基因组DNA的纯化。其纯化原理是利用细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA，由硅胶膜柱可逆吸附基因组DNA，经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质后，用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品可从不超过10 mg组织材

3、料或不超过1×106-107培养细胞中提取到3-35 g 超纯基因组DNA（OD260/OD280 = 1.7-1.9），此基因组DNA可直接用于PCR、酶切、文库构建等后续实验。 产品特点高效：一次可获得3-35 g基因组DNA。快速：30min内即可获得超纯的基因组DNA。通用：可从多种样本材料中获取基因组DNA。安全: 整个操作中不用酚/氯仿有机物。高纯度：无须再纯化即可直接用于下游实验。 产品用途常规限制性酶切PCR扩增文库构建Southern 杂交分子标记分析 质量控制纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷基因的PCR扩增鉴定。 

4、基因组DNA提取流程图图1  基因组DNA纯化流程图 操作方法1  材料处理动物组织    取少量样本材料，放入液氮预冷的研钵中。快速用力研磨的同时加入少量液氮，直至样本材料被研磨成粉末。将研磨好的样本转移至1.5 ml离心管中，每管组织材料含量应不超过10 mg。   注： 某些匀浆困难，或在匀浆过程中DNA容易降解的特殊组织应加液氮研磨。如DNA酶含量丰富的组织：肝脏、脾脏、胰腺、胸腺、淋巴等；胶原蛋白含量丰富的组织：皮肤、肌腱等；角质蛋白含量丰富或坚硬的组织：骨骼等。   

5、60;    如没有液氮。可用用剪刀剪成小块，放入研钵或匀浆器中，加入适量TE（pH 8.0），处理成细胞悬液。将不超过10 mg当量的细胞悬液转移至一个新的1.5 ml的离心管中，12000 rpm离心1min，弃上清，收集沉淀。    每支离心管中的样本当量不宜超过10 mg。每10 mg样本材料可获得10 g基因组DNA。样本量过大，将会影响细胞核裂解效率并可能堵塞纯化柱，进而降低基因组DNA的得率与纯度。细胞贴壁细胞：先用胰酶将贴壁细胞处理成细胞悬液，转移至1.5 ml离心管中12,000 rpm离心1min，弃上清。悬浮细胞

6、：直接取适量转移至1.5 ml离心管中12,000 rpm离心1min，弃上清。     注：每只离心管内的细胞量不应超过1×106-107。2  加入200 l消化缓冲液DS，漩涡振荡直至形成完全均一的悬浮液。    注：如需去除RNA，可加入4l RNase A（100 mg/ml），振荡混匀。室温放置5min。3  加入20 l蛋白酶K和220 l裂解液MS，漩涡振荡混匀。65温浴10min。溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。   注：加入裂解液MS时可能会产

7、生白色沉淀，一般65放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 不纯。             如果是比较致密难裂解的组织，可先加蛋白酶K混匀后，55温浴至完全溶解。再加MS混匀，65温浴10min。4   加入220 l无水乙醇，上下颠倒混匀。此时可能出现絮状沉淀，将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中。12,000rpm离心1min，弃滤液。   注：此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱

8、中的硅胶膜上。5   加入500 l去蛋白液PS。12,000 rpm离心1min，弃滤液。   注：此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质洗脱，以获得高质量基因组DNA。6   加入500 l漂洗液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。   注：漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。7   加入500 l漂洗液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。8     12,000 rpm离心3min，以彻底去除纯化柱中残

9、留的液体。   注：此步骤的作用是去除残留乙醇，避免影响后续的酶促反应（PCR或酶切）。同时利于基因组DNA充分溶解。9   将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处，悬空滴加30-100 l洗脱液TE。室温放置2min。12,000 rpm离心2min，管底即为高纯度基因组DNA。-20保存。   注：洗脱液TE可用去离子水代替，但其pH需为8.0-8.5。体积视质粒拷贝数多少、用户对质粒浓度要求而定。          对洗脱液TE 60预

10、热，会提高基因组DNA的产量。 图2  基因组DNA电泳图  注意事项1  应尽量使用新鲜的实验材料，确保提取的基因组DNA不被降解。不能立刻提取基因组DNA 的实验材料应尽快置于液氮或-70冰箱中保存并避免反复冻融。2  使用液氮研磨组织材料时，应随时加入液氮，确保提取的基因组DNA不被降解。3  基因组DNA需长期保存时，建议使用纯化液TE。分装后保存于-20或-80。 基因组DNA的浓度及纯度检测1  基因组DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。2