食品中合成着色剂的测定方法(共5页)

1、精选优质文档-倾情为你奉上食品中合成着色剂的测定方法    食品中合成着色剂主要是以人工方法进行化学合成的有机色素类，按其化学结构不同可分为偶氮类色素和非偶氮类色素，偶氮类色素按溶解性不同又可分为油溶性和水溶性两类。合成类色素中还包括色淀。    食品中合成着色剂的种类很多，国际上允许使用的有30余种，我国允许使用的主要有苋菜红、胭脂红、赤藓红、新红、玫瑰红、柠檬黄、日落黄、亮蓝、靛蓝、牢固绿等。6.1高效液相色谱法  1)原理    食品中的合成着色剂经

2、聚酰胺吸附法或液一液分配法提取后，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。    利用高效液相色谱法测定食品中合成着色剂的最小检出量为：新红5ng、柠檬黄4ng、苋菜红6ng、胭脂红8ng、日落黄7ng、赤藓红18ng、亮蓝26ng。当进样量为0.025g样品时，最低检出浓度分别为0.2、0.16、0.24、0.32、0.28、0.72、1.04mgkg。  2)仪器和试剂  (1)仪器  高效液相色谱仪，带紫外检测器。  (2

3、)试剂  正己烷。分析纯。  盐酸。分析纯。  乙酸。  甲醇：经滤膜(0.45m)过滤。  聚酰胺粉(尼龙6)：过200目筛。  乙酸铵溶液(0.02molL)：称取1.54g乙酸铵，加水至1 000mL，溶解，经滤膜(0.45m)过滤。  氨水：量取氨水2mL，加水至100mL，混匀。  甲醇一甲酸(6+4)溶液：量取甲醇60mL，甲酸40mL，混匀。  柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸(C6H8O7H2O

4、)，加水至100mL，溶解混匀。  无水乙醇一氨水一水(7+2+1)溶液：量取无水乙醇70mL、氨水20mL、水10mL，混匀。  三正辛胺正丁醇溶液(5)：量取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL，混匀。  饱和硫酸钠溶液。  pH6的水：水加柠檬酸溶液调pH到6。  合成着色剂标准溶液：准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝各0.1000g，置100mL容量瓶中，加pH6的水到刻度。此溶液含着色剂1.00mgmL。  

5、合成着色剂标准使用液：临用时合成着色剂标准溶液加水稀释20倍，经滤膜(0.45m)过滤。配成每毫升相当50.0g的合成着色剂。    3)操作步骤    (1)样品处理    橘子汁、果味水、果子露、汽水等：称取20.040.0g，放入100mL烧杯中。含二氧化碳样品需要加热以驱除二氧化碳。    配制酒类：称取20.040.0g，放l00mL烧杯中，加小碎瓷片数片，加热驱除乙醇。    硬糖、蜜

6、饯类、淀粉软糖等：称取5.0010.00粉碎样品，放人l00mL小烧杯中，加水30mL，温热溶解，若样品溶液pH较高，用柠檬酸溶液调pH到6左右。    巧克力豆及着色糖衣制品：称取5.0010.00g放入100mL小烧杯中，用水反复洗涤色素，到巧克力豆无色素为止，合并色素漂洗液为样品溶液。    (2)色素提取    聚酞胺吸附法：样品溶液加柠檬酸溶液调pH至6，加热至60，将1g聚酞胺粉加少许水调成粥状，倒入样品溶液中，搅拌片刻，以G3垂熔漏斗抽滤，用60pH4的水洗涤3

7、5次，然后用甲醇一甲酸混合溶液洗涤35次(含赤藓红的样品用液一液分配法处理)，再用水洗至中性，用乙醇一氨水一水混合溶液解吸35次，每次5mL，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL经滤膜(0.45m)过滤，取l0L。进行HPLC分析。 图86八种着色剂色谱分离图1.新红；2.柠檬黄；3.苋菜红；4.靛蓝；5.胭脂红；6.日落黄；     7.亮蓝；8.赤藓红    液一液分配法(适用于含赤藓红的样品)：将制备好的样品溶液放入分液漏斗中，加2mL盐酸、三正辛胺正丁醇溶液(5)1020mL

8、，充分振摇提取，静置分取有机相，重复提取23次，每次10mL，直至有机相无色，合并有机相，用饱和硫酸钠溶液洗2次，每次10mL，分取有机相，放于蒸发皿中，水浴加热浓缩至l0mL，转移至分液漏斗中，加60mL正己烷，混匀，加氨水提取23次，每次5mL，合并氨水溶液层(含水溶性酸性色素)，用正己烷洗23次，分取氨水层加乙酸调成中性，水浴加热蒸发至近干，加水定容至5mL。经滤膜(0.45m)过滤，取10L进高效液相色谱仪。如图86所示。    (3)高效液相色谱分析参考条件    色谱柱：YWG-Cl8，10m不锈钢柱，

9、4.6mm×250mm。    流动相：甲醇一乙酸铵溶液(0.02 molL)(pH4)。    梯度洗脱：用浓度为2035的甲醇洗脱5min；用浓度为3598的甲醇5min；用浓度为98的甲醇继续洗脱6min。    流速：1mLmin。    紫外检测器，波长254nm。    (4)测定  取相同体积样液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根

10、据保留时间定性，外标峰面积法定量。    4)结果计算     式中：X样品中着色剂的含量，mgg；    m1样液中着色剂的质量，g；    V2样品进样体积，mL；    V1样品稀释总体积，mL；    m2样品质量，g。    结果的表述：保留算术平均值的二位有效数，允许相对误差10。6.2薄层色谱法及纸色谱法

11、    1)原理    水溶性酸性合成着色剂在酸性条件下，被聚酰胺吸附后与食品中的其他成分分离，经过滤、洗涤及在碱性溶液(乙醇一氨)中解吸附，再经薄层色谱法或纸色谱法纯化、洗脱后，用分光光度法进行测定，可与标准比较定性、定量。  2)仪器和试剂  (1)仪器  可见分光光度计。  微量注射器或血色素吸管。  展开槽：25cm×6cm×4cm。  层析缸。  

12、滤纸：中速滤纸，纸色谱用。  玻砂漏斗G3(50mL)。  抽气装置。  恒温水箱。  薄层板：5cm×20cm。  电吹风机。  (2)试剂  石油醚：沸程6090。  甲醇。  聚酰胺粉(尼龙6)：200目，使用前于100洗化1h，放冷密封备用。  硅胶G。  硫酸(1+10)。  甲醇一甲酸溶液(6+4)。  氢氧化钠溶液

13、(50gL)。  盐酸(1+10)。  乙醇(50)。  乙醇一氨溶液：取1mL氨水，加乙醇(70%)至l00mL。  pH6的水：用柠檬酸溶液(200gL)调蒸馏水的pH至6。  海砂、碎瓷片：先用盐酸(1+10)煮沸15min，用水漂洗至中性，再用氢氧化钠溶液(50g/L)煮沸15min，用水漂洗至中性，再于105干燥，储于具玻璃塞的瓶中备用。  柠檬酸溶液(200gL)。  钨酸钠溶液(100gL)。  展开剂。 

14、60;a.正丁醇一无水乙醇一氨水(1%)(6+2+3)：供纸色谱用。  b.正丁醇一吡啶一氨水(1)(6+3+4)：供纸色谱用。  c.甲乙酮一丙酮一水(7+3+3)：供纸色谱用。  d.甲醇一乙二胺一氨水(10+3+2)：供薄层色谱用。  e.甲醇一氨水一乙醇(5+1+10)：供薄层色谱用。  f.柠檬酸钠溶液(25gL)一氨水一乙醇(8+1+2)：供薄层色谱用。  合成着色剂标准储备液：准确称取按其纯度折算为100质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、

15、靛蓝各0.100g，加少量pH为6的水溶解，再转移至100mL容量瓶中并定容至刻度。配制成的各着色剂标准储备液浓度为1.00mgmL。  合成着色剂标准使用液：临用时吸取合成着色剂标准溶液各5.0mL，分别置于50mL容量瓶中，加pH6的水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于0.10mg着色剂。    3)操作步骤    (1)样品的处理    果味水、果子露、汽水：称取50.0g样品于100mL烧杯中。汽水需加热驱除二氧化碳。   

16、; 配制酒：称取100.0g样品于100mL烧杯中，加碎瓷片数块，加热驱除乙醇。    硬糖、蜜饯类、淀粉软糖：称取5.00或10.0g粉碎的样品，加30mL水，温热溶解，若样液pH较高，用柠檬酸溶液调至pH4左右。    奶糖类：称取10.0g粉碎均匀的样品，加30mL乙醇一氨溶液溶解，置水浴上浓缩至约20mL，立即用硫酸溶液(1+10)调至微酸性，再多加1.0mL硫酸，然后加入1mL钨酸钠溶液，使蛋白质沉淀，过滤后，用少量水洗涤，收集滤液。再用柠檬酸调pH至4。   &#

17、160;蛋糕类：称取10.0g粉碎均匀的样品，加海砂少许，混匀，用热风吹干样品(用手摸已干燥即可)，加入30mL石油醚搅拌。放置片刻，倾出含脂肪的石油醚，如此重复处理三次，以除去脂肪。吹干后研细，全部倒人玻砂漏斗中，用乙醇_氨溶液提取色素，直至着色剂全部提完，以下按奶糖类自“置水浴上浓缩至约20mL”起依法操作。    (2)吸附分离  将处理后所得的溶液加热至70，用柠檬酸溶液(200gL)调pH至4，加入0.51.0g聚酰胺粉充分搅拌，使着色剂完全被吸附，如溶液还有颜色，可以再加一些聚酰胺粉。   &

18、#160;将吸附着色剂的聚酰胺全部转入玻砂漏斗中抽滤，用已被柠檬酸酸化至pH4的70热水反复洗涤，每次20mL，边洗边搅拌。若含有天然着色剂，再用甲醇一甲酸溶液洗涤13次，每次20mL，至洗液无色为止。再用70热水充分搅拌、洗涤沉淀，至洗液为中性。然后用乙醇一氨溶液分次解吸全部着色剂，收集全部解吸液，于水浴上驱氨。    如果为单色，则用水准确稀释至50mL，用分光光度法进行测定。如果为多种着色剂的混合液，则进行纸色谱或薄层色谱法分离后测定，即可将上述溶液置水浴上浓缩至2mL后移入5mL容量瓶中，用乙醇(50%)洗涤容器，洗液并人容量瓶中并稀释至刻度。&

19、#160;   (3)定性分析    纸色谱法：取层析滤纸，在距底边2cm处用铅笔划一条点样线，于点样线上间隔2cm标记刻度。在每个刻度处分别点310L样品纯化溶液和l2L着色剂标准溶液，各点直径不超过3mm，悬挂于分别盛有正丁醇一无水乙醇一氨水(1)(6+2+3)、正丁醇一吡啶一氨水(1)(6+3+4)的展开剂的层析缸中，用上行法展开，待溶剂前沿展至15cm处，将滤纸取出于空气中自然晾干，与标准色斑移动的距离(Rf值)进行比较定性。如Rf值相同即为同一色素。  也可取0.5mL样液，在起始线上从左到右点

20、成条状，纸的左边点着色剂标准溶液，依法展开，晾干后先定性后再供定量用。靛蓝在碱性条件下易褪色，可用甲乙酮一丙酮一水(7+3+3)展开剂。   薄层色谱法。  薄层板的制备：称取1.6g聚酰胺粉、0.4g可溶性淀粉及2g硅胶G，置于合适的研钵中，加15mL水研匀后，立即置涂布器中铺成厚度为0.3mm的板。在室温晾干后，于80干燥1h，置干燥器中备用。    点样：在距离板底边2cm处将0.5mL样液，从左到右点成与底边平行的条状，板的左边点2L色素标准溶液。    展开：苋菜红

21、与胭脂红用甲醇一乙二胺一氨水(10+3+2)展开剂，靛蓝与亮蓝用甲醇一氨水一乙醇(5+1+10)展开剂，柠檬黄与其他着色剂用柠檬酸钠溶液(25gL)一氨水一乙醇(8+1+2)展开剂。取适量展开剂倒人展开槽中，将薄层板放入展开，待着色剂明显分开后取出，晾干，与标准斑移动的距离(Rf值)进行比较定性。如Rf值相同即为同一色素。    (4)定量分析    标准曲线制备：分别吸取0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00mL胭脂红、苋菜红、柠檬黄、日落黄色素标准使用溶液，或0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL亮蓝或靛蓝色素标准使用溶液，分别置于10mL比色管中，各加