RAW264.7小鼠巨噬细胞protocol

1、R AW 2 6 4、7细胞株得相关信息RAW 264.7:n 腎$431电话；I aid科;F時阳构r帝违来购丸I!#计划.归線据购更皿心登看讦住D35ignatio*i5：肋询264.7npesRors¥C asrrUfRB flcaWLavo :2ShippedfloaiMsdiium £StH Pruudgbtkjn3?rum：arthPTiFirwMp ertes: rrjprlVhT(LHl'.s Toi/ir-yJismflni3c/fc/nnQ( toed agoMiorotiolouiV：Tissue： dot,IrinCourt csirjii：

2、 &川JH 忙Lhce砂sc wtali;on rmjrine leukemia vinj¥-n：Jjc&c KncrCellTvpe: n柏 aeli网 Ab3l»on nuine Itukemiavhus tranafoririedulluia*PT)dLCl£：Irt rtri|i|nn in top hlTfl ft PMmn 训 3hnw», nthar TCC snrjrix r呵 iiiWarj/ panniiq m 出 hs iPquirwilTtuthP |即闻25P'ernri1a/ro"ms:thi

3、o ATM maw Ha I. Wine purchfljfig 町 CC iriotcrhl io iJliiriotilv icspofiDitlofcrohbihinc tbe pe-tri1a.Pl為 汨 tnick neru fur mrjrrrsHn i也iht speclflu requlwniMi体 f(i( sNMriEr'l【犯川 loi：机IM.Bic leg ie al nesporijsIrsnfecriori hoglcorTipl0riert(J3) 12U/Ap pl I rayons:Kscapto'fsiAnlio-nEfprestior-A

4、del-i 2cl4dul1I 卫 nrpr，fTialuConmerte:This lire was estabibhed from d lunwr induced tw Abel so n mjdne euemi3V<U5 The/訓 e neglwfor surface iftimuncQlcburin <slo>, l« (le-) ndThrt 2 8*1.2) This lire does rot scciete detectable virus pd'icles and Is negahrEin theXC plaque formation a

5、ssay The cells will oinocytoss neutral red afKiwill phaQocytosG late< bea旳 ardZvThxan They xe caoabte of antoodv dependent lysis of sheoo orvtr)r3(Me5afKiiumorceli:arocw. LPS wPPDtroaimonUor2d3y:就clo-rocyt03 bJtlottumor colliorsotc. Dtdconimunica:od inFdo, 2007 tv Dr Janet wirdicste (he )(伏 oesio

6、ti xinreaou Gcotropic MJLV cl09ei/rGld：dd, il notideriEcaitothe Moloney l/luU/hPiper vIhj$in thd original vlruirioculurrL The c& ls also express potyiropicPfoxcdton:MXV, uofiurprlfiingiv 皿$刚曲0 mou£0 p 自务 agQ hi 金 loryoYMPUnK <tic瞼Pi口Mad laiTTSCOj ATCC complete (pcwtliniecSiHii; The base

7、medium for this cell lineis ATCC*fo(n<jlalel Dulbecco Wodified Eagle s Medium. Cateloo 30-2002 Tomak the complete jroMdi medium, add the folloir-o components Io the base tnedkjtn:fetal bovine serum lo a final concenfralior of 10%.Sdbculturlng.P ro$5rvaticn:R9U：edPW4JCUAtmosphere: air, 95%： carbon

8、 dioxide (CO2), 5%Umpwjtivo; 3Z O'CPiotocot: subcultures ere psparoo ecrapin?Fora rsan Dutiumi curure rnedutn idiu er amount acccrcingi/nrorier culture ypzeK).Drlcdga cells ftom r p nask suDFfdte Mth a cell 9craper; dsph合帕 and add dpnropnsle aliquots ofthe cell suspension into cuHuw wsselsSbcu血i

9、on Ratio： A >ubcuthjaton f«to cfl 3to li$ recomrriercledMetliuin Renewat Replace or add medium eveiv 2te 3 days.Freeze medium: Corr plete qrowlh medium supcientented with 5% ；vW DM80Sloi ago Umpor Miro: IeoueO rnroflonvo po rphds«RdCcmrwhdM nnociurn(?/incut vo ddotonai Gup|Monnon$ or GQ

10、um ctGecrioGO undorAicc MGOiurn)Arcc 30-2002rdconirrndea semtnATCC 30-30201135 RelphP Ndkninzl Antbod)d0fi»»nd»nt killing ofrythiocyt? and tumor 怙旳祕、by EEraphgArQ"佃d rl lines erhancemenl PPD anti LPS J Immunol 119. 95095, I 97 PjbMd 894C3t1207:Raschke fC, etdl Functional matrooha

11、ge ce l linestBrstctrnsd byA&elscii leukerriavirus. Cell 15 26V267J976.PLJbMBG：2l219032443: DerlinjerLC. ot al. RequEdHonot induable nKiic oxide syntnaso e>pre$5*on bvrrracrophaoepunrwreceptors Gnd cdiciurn J Biol Chom 271: 337-342 J 906. PtbMod: 8560683324b43： Hsinbletori J, M dl Mtvdfion of

12、 t-jun M-wimindl ki8“ in bacterial lipopol/schdfioe-tniuutdc mdcmphcee Proc. Natl.Acad ScL USA 93,2rr4-277S. 1S96 PubUed 361OI163J553 Ta/tor GA, 01 划 ignuncaOon or »no«l fiTPa«.rip 汕血"助6(pmad (VTPdie, rial accumulator in response lo inlerleror omma J Biol Oem ?71 20399-30405.1996

13、 PutWed 8752770Dulbcccot Modified Eaplot Mod他m (DMEMXATCC® 30-2002上)For-Profit: $2念丁 MATCChiiiiiber: 30-2002Non-Profit: $2Quantity: 500 mLStorage; Store mMum 5?2"C to 8*C in th& dark when not in use.Qty:1I 栏 AikHoCartApp licatioiis:DufbeccQ'$Eagle's Medium QWEM) mocfiUecf to co

14、ntain 4 fM Lgkitamine,4500 如L gWog f ftWW sodium pymv廻 台nd ,500sodwm JbJcsrjbonate.Formulation: FonvugiionProduct Format: 500 mLComments:NOTE: This reduced f&v&i of sodium bicsrbon眾e fWWCOS, , 5 gfL) i& infemfed foi use in S% CO2 in e/'r Additfonai sod沁m bicarbonate may be requrred f

15、or use in iftcubaoFS contamjng higher p&rcenies of COZSubculturing ProcedureSubcultures are prepared by scraping. For a 75 err? flask, remove all but 10 ml culture medium (adjust amount accordingly for other culture vessels). Dislodge cells from the flask substrate with a ceill scraper; asp irat

16、e and addi appropriate aliquots of the cell suspension into new culture vesselsSubcultivation Ratio; 1: 3 to 1: 6Medium RenewalReplace or add medium every 2 to 3 days.Complete Growth MediumThe base medium for this cellll line is ATCC-formulatedl Dulbecco's Modified Eaglets Medium, Catalog No. 30

17、-2002. To make the complete groMh medium, add the following components to the base medium:* fetat bovine serum to a final concentration of 10% This medium is formulated for use with a 5% CO2 in air atmosphere. (Standard DM EM formulations contain 3.7 g/L sodium bicarbonate and a 10% CO2 in air atmos

18、phere is lhen recommended).ATCC tested fetal bovine seruiim is available as ATCC Catalog No. 30-2020 and ATCC Catalog No. 30-2021 (100ml>.Cryo protectant MediumComplete growth miedium described above supplemented with 5% (v/v) DMSO.ATCC 美国模式培养物集存库(A me rican t yp e c ul t ure c o ll e c t ion)得简写

19、收到冷冻管细胞得处理方式1、收到细胞株包裹时，请检查细胞株冷冻管就是否有解冻情形,若有请立即通知。细胞株请尽速开始培养,或立即冷冻保存（置于-70 C，隔夜后，移到液氮）。2、收到T25 flask 细胞得处理方式于寄送过程中，为避免起泡造成细胞脱落死亡，T2 5 f 1 ask均加满培养基。2、 1、检查fl a sk外观，并于显微镜下观察细胞生长状况与有无污染现象，若有任何问题，不要打开盖子，请立即通知细胞实验室。2、2、将原封之T 25 f 1 ask静置于3 7C , 5% CO2培养箱中,使细胞回温至3 7 C,并让运送过程中少数脱落得细胞可再附着生长2、3、隔天后，于无菌操作箱内取

20、出 flask内之培养基，（取出之培养基可以再使用）仅留约510ml培养基于flask内，依一般培养方式再将细胞置入培养箱中,或细胞已长满盘,则将细胞做传代培养。R AW2 6 4、7 细胞株得C el 1 Cu It ure、RAW 2 64、7细胞培养得特点1、RA W26 4、7细胞一般为圆形或椭圆形，功能活跃时，可呈多突形。细胞核为圆形或椭圆形,染色较深。贴壁特别牢固。L9 * i*" L誓2 * J »£叫"6®- r P宀 < ' *7 r.2.'-; 0 kJ f.0匚.世：FJ .匕. 4 fr T'

21、;fl 5 ' . i r.、V J a .一 -'*> - r I *-丄, -呼J厂* 0,< .-d沁疔宀打八迟皆八八 .'* i ；*-171' * =Th 川J上十* Z *r 口 X ' _ h 5扌-.»珀* J 4 八亠 、*5 44I拿九徒：* *I * r - F La丁 *.:吃屮.-松. J F I 一u第汇飞賓殊撷禺？打:I盯waC_7_" *! Mr Fm :_丨 啊二 : * 1 Tt 二't *_L写：心. ； Q_£宀*>V 2 乌*,进一步促进细胞i J2、RA

22、W264 7具有很强得吞噬能力,当吞噬抗原后,细胞会释放趋化因子伸出伪足，增强粘附攀爬能力。细胞吞噬抗原过多、培养环境恶劣都会促进该细胞呈现梭形、 长梭形，镜下会瞧到具有细长伪足得小细胞被类似上皮得梭形大细胞取代。3、每次传代都很难消化下来.用力过大则对细胞损伤较大，这种细胞传代时接种密度要大否则容易使巨噬细胞向终末细胞分化，细胞变成长形，并且不能回复，这就是培养这种细胞时 最需要注意得冋题。4、对于R AW264 7细胞她得声场时喜欢结伴。正常生长状态应该就是一小片一小片得生,并且会叠加成层。所以，要很好长,片片之间不连接，等到长到更多更密得时候会连成大片 地控制好细胞得生长速度，不要等到叠

23、加成层得时候再传代。5、RAW 2 6 4、7细胞传代后贴壁时间较短，半小时就能贴很多，刚贴壁就是细胞呈圆形,部分细胞会变折光度很好，镜下观察如小珍珠状一个个地散落于瓶底面。生长一段时间后成类似四角形，伸出伪足之类得.这个时候就就是提醒您注意传代了，这部分细胞如再不传代, 很容易就老化掉.二、R AW 26 4、7细胞传代以免影响1）将培养瓶内旧得培养液弃掉，然后用D Hank s液洗两次，（一定要洗干净,胰酶得消化作用）2）加入0、25%胰酶一EDTA消化,2 5cm培养瓶加0、4ml ,37度消化5mi n ,镜下瞧Hapilct' 含钙筷 含B红,e/LS钙i齐不含略Ig/LB-

24、 H-irJcs *不含乍丐谨含6®3D- HAiE不書钙镁 不含酚紅 乩DPBS不含钙篠 不含酚红 gAPBS不含乍孕类 不含瞬Ie/i-10*FSS不含钙s不含am,s/LMiUleee3eeoNaHTC.lHSOe. us0- ize0. i£e0. L26E日E.勺£9HaHSPOA - 2H2QGu00Q00KCX0.40. 40. 40.40 20.22KH2FO4e.060. 060. 06a. OBO.£0.242,4W1O40.0930.09600000CaJCl0.14n. 1400000m葡萄糖1111000酚红0.0100.01a

25、0000.350.350.550.35a00到细胞变圆,3）立即加含间隙增大.（值得注意得就是该细胞对机械损伤比较敏感 10 %FCS得培养液终止消化， 用细胞刮刀轻刮，注意，这时候用吸管吹不下来， 但就是刮刀却很容易刮下来，而且对细胞得损伤极小 4）离心,弃上清,加新得培养液（10 %F CS ）,小心吹匀,分装入新得培养瓶 三、R AW2 6 4、7细胞冻存及复苏去酋总浪彌底GKB虧ft蓟舫猱勰§岂阴芳稠師站哪矗lowra. «辭，臥辅能冗IimW）&（一）细胞冻存配制冻存培养液；（通用得为培养基：血清：DMS d 7: 2:1，但其中得血清可进行调整，如上面得

26、仁兄用得4 :5:1，比例过高 ）2、取对数生长期得细胞（冻存前一天换液），用胰蛋白酶把单层生长得细胞消化下来，悬浮生长得细胞则直接将细胞移至1 5 ml离心管中;3、离心 1 0 OOrpm, 5 mi n ;4、去除胰蛋白酶及旧得培养液，加入适量配制好得冻存培养液 ，用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数，调节冻存液中细胞得最终密度为5X 106/ml1 X 107/m 1;5、将细胞分装入冻存管中，每管11、5 m 1（不超过冻存管容量得 80% ）;6、在冻存管上标明细胞得名称，冻存时间及操作者;7、冻存:标准得冻存程序为降温速率一1-2 C/ mi n；当温度达-25 C以下时，可增至5 C

27、 10C / m in;到一1 0 0C时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞得冻存管放入-20 C冰箱2 h，然后放入-7 0C冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内.（具体操作为4°C 2 0 mi n , 20° C30mi n, -7 0C过夜，转入液氮中）（二）细胞复苏1、从液氮容器中取出冻存管，直接浸入3 7C温水中，并不时摇动令其尽快融化。（1min以内溶解完毕，不能将口进入水面下）2、从37C水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液， 加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀;3、离心， 1 0 0 0rpm,5 mi n;4、弃去上清液，加入含1 0%

28、小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶,37C培养箱静置培养;（复苏时细胞密度稍大，可提高复苏效率）5、次日更换一次培养液，继续培养.（可更换一半培养液，避免跨度太大，影响细胞状态）（三）接种总结下种孔板组屉接种量仅仇参考150cin2700ml40ml1.1X107细胞培养瓶（板）接种虽生长而枳容量细胞數（大约96jtte4-5X10435nun /养皿IXI0648扎板I3X 10560nim胡养皿16X10 624孔板2.5X105lOOmm Jf?养皿7X10612孔仮5X 10 5l50mni培养皿L8X1076孔衣12X 106细胞瓶而积容量T作体枳细胞数012.5

29、cm225ml2ml5X10525cin250inl5ml1X1063551275inl1011112X10 675 cm2250mI15ml4X 106补充：不同孔板所加焙养液的液而都K宜太深，一股在23inm范围，结合不同孔的底而积就可算di并培养几的适宜加液凰（参考下衷九若加液屋过多会彩书气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。具体所加细胞密度依实验的0的不同灵活掌握。传代细胞接种密度及接种*参考屮Siuiace5.01诃心必6CHIO2 CH円total VO 111 me of iiiecLjiiiii%- welk0.321600*isoo.24-velk2.00我1.0

30、0 X 丄 04申E20X丄0知0.5-1(0.7>IZAvelk4,012,00 XltA2.40X 104疳6-wellp扣4 SIXIO5,56X 叭2-3(2 JGOmivp - - - 2SJ7P1.41 XIO1-70X 幼»T2知25 OOP1,25X101.50X lOp4-5(?CT0T5.(X)P3.=5XE4.50X lOp 112-1515PT175v丄 75.0"S."5XiO535-40(40”培养器fflk底面积3异昇加培养滿量（nL） P可获细胞量初孔培养板护Q,眾+0* M"孔培养板4145X1OVL2孔培养板4”

31、訐22lg6孔培养板口9 6屮2后2 5Xlg4扎培养板P23P5*g7X103*币5堵养皿卫SQ:L W2 叹 10V65培养KIP225亠59cin 垢养 KUp3la OP12.2X1(rPlOcjuls 养皿10. 0*J137X1 吒25cm塑料培养爭25” W5X10VF弓C皿塑料培7品15"30P2X123 cm琐璃培养瓶41莎L W3K1咋1005披踽培养瓶门37.弘10. gfix 1此2505®璃培养瓶心7祁15. OA2X1OV2500cin能转培养瓶*70曲10025Op3.四、R A W 264、7细胞形态不好时得处理方法1、倒掉旧得培养基，加入3

32、ml新得培养基（有无血清得都可）洗涤一次，用滴管吸走，然后再加入3 ml得培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍 ，然后吸走。这时侯再开始正式得消化、吹打。2、把吹打下来得细胞悬液加入到新得培养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。10分钟观察一次，2 0分钟,30分钟观察一次.选择一个时间点，已经有部分细胞贴壁得情况下，重然后加入,结合细反之新置于洁净台,底面朝上迅速倒出其中得培养基 ，加入3ml新培养基再轻轻洗一次。完全培养基培养.后续观察细胞生长情况以及形态。我称之为“二传”。3、如果一次效果还不理想，可重复多次.直到找到细胞完美形态

33、。其中要注意 胞喜欢得生长情况。喜欢多一点数量长得好得细胞就等贴壁细胞比较多点得时候再传。亦然。不明之处：培养之前，一切与细胞接触得玻璃器皿与器具都要进行过去热源处理。(2 0 0-250 C 烘烤 46h)?R AW 2 64、7 细胞株 Cel 1 C ulture 得材料(-）仪器1、净化工作台2、离心机3、恒温水浴箱4、冰箱（4C、一 20 C、 70 C）5、倒置相差显微镜6、培养箱7、液氮冰箱（二）玻璃器皿1、吸管（弯头、直头）2、培养瓶3、玻璃瓶(2 5 0 ml、100ml )4、废液缸(三)塑料器皿1、吸头2、枪头3、胶塞4、移液管(10 m l)5、1 5ml离心管6、冻存

34、管（12ml）（四）其她物品1、微量加样枪2、红血球计数板3、记号笔4、医用橡皮膏5、移液枪（五）试剂D Hank s 液2、胎牛血清培养液4、5、双抗（青霉素、链霉素） 胰蛋白酶（0、2 5% ）6、7、4 %NaHCO37、D MSO（分析纯）或无色新鲜甘油胎牛血清品牌整理第一类,最高级别，就是专门用于干细胞得特级胎牛血清1、Hy clo ne得特级胎牛血清目前，性能最好得血清，还就是要说说H yc l on e得特级胎牛血清，货号就是SH30070、03,它就是H yc lon e得招牌菜”。?Hyclo ne特级胎牛血清（De fined FB S）,货号SH30 0 7 0 ,就是世

35、界上唯一经过40纳米过滤得顶级胎牛血清,极佳得促细胞生长作用及产品稳定性。内毒素含量< 10EL/m l，血红蛋白含量<1 0m g/dl。此血清可以广泛用于各种细胞培养，包含任何干细胞系得培养。2、Gibc o得特级胎牛血清？稍次一点得就是G1 b c o公司在美国原装生产得特级胎牛血清，这款血清，货号就是16000 04 4,就是1 0 0 n m过滤3次，内毒素与血红蛋白含量都可以与 Hycl o ne得S H 30070、03相媲美.也可以用于培养大部分得干细胞系。同样就是美国来源，所以渠道特殊。3、T CB 得特级胎牛血清?TC B (Tissue Culture Bi

36、o lo gica ls)公司作为一家生物行业类得著名供应商，成立于1978年，大部分血清得采集与加工都在加利福尼亚。每一批得原材料都经过严格筛选，所有得产品都在FDA认证得cGMP车间进行！ 4?、 B1 oi n d特优级胎牛血清？血源来自北美与澳大利亚 Bi oI nd公司得生产完全符合GM P得要求,并通过IS O 9 0 00 : 200 1与ISO13485: 2 003质量认证。以安全，稳定，高效为原则得Biol n d公司，所有得产品质量均完全符合国际标准。Biological Indu s tries主营细胞培养类产品，B1 o Ind工厂加工得胎牛血清均符合 USDA标准及

37、欧洲标准血清。根据美国农业部标准,原始血清均采自未发生疯牛病（BSE）与口蹄疫（F MD ）疫情得国家。B1 ological In d ustri e s三步滤菌处理法，最后得过滤步骤为连续通过三个100纳米得滤膜。血清生产得洁净级别为100级。所有分装工作台都通过高效微粒 空气过滤器过滤，并保持正压分装环境要对总微粒、 悬浮微粒数与压力进行监控。分装之后 ,终产品迅速 -20 度冻存，并隔离 ,直到所有得质量控制检测完成。第二类，优等胎牛血清1、H y clone得加拿大优等胎牛血清？性价比最高得就是Hyclone加拿大优等胎 牛血清（Char a cterizendFBS） S H30

38、3 96、0 3 血清采自加拿大，由 hycl one 公司总部得员工采集加工，采集方法 ,加工过程，检定标准与美国原产优等胎牛血清完全一致 ,市场价格低于美国原产得。经过 3 次 100nm 过滤，内毒素含量 25EU/ml，血红蛋白含量25m g/dl2、Hy c lo n e得南美优级胎牛血清？大体与加拿大得优等血清就是一样得，级别 也非常相似 ,货号就是 sv300 87、 02,该胎牛血清来源于南美洲 ,以封闭得心脏穿刺方式采集，产品经3次100nm 过滤，经严格检测确保无支原体，细菌病毒检测 依据美国药典（U SP）与美国联邦法规第九篇（9C FR ），内毒素含量 10 E U/m

39、l,血红蛋白含量2 0 m g/dl,完全符合美国 HyC 1 on e &r e g;优等胎牛血清 得检测标准.3?、G 1 b c o得澳大利亚胎牛血清？情况与Hyc 1 one得澳大利亚 胎牛血清差不多，市场价也就是3 200兀/5 0 0m 1左右。这一级别得血清 ,也能用于干细胞培养，可就是，不象特级胎牛血清那么优秀。因为，此胎牛血清属于澳大利亚生产得 ,不在疫区,可以正常报关进口 ,目前没有受 到任何影响，所以 ,就目前而言，算就是最好得胎牛血清了 ,有不少客户都此血清来培养干细胞 ,效果还就是比较不错。 4?、TCB 得优级胎牛血清 情况与Hyc 1 one得澳大利亚胎牛

40、血清差不多，市场价也就是2 300元/500ml左右。这一级别得血清 ,也能用于干细胞培养 ,可就是,不象特级胎牛血清那么优秀。第三类,一般级别得进口胎牛血清1?、Hy C lone得南美胎牛血清？目前，市场上用 得最多得Hyclone血清就是南美胎牛血清（FBS） S V 3 0 087，此血清采自南美, 在国内（兰州 ）过滤并测试检验，经三次 100 纳米过滤，根据中国商标法得规定 标贴中文标签，内毒素含量 10EU /m l,血红蛋白含量2 0m g /d。？此血清广泛用于各种肿瘤细胞得培养，还没有资料记载能够用于干细胞,也听说有少数人用于干细胞培养得，不过，因为本身血红素比较高，所以，

41、最好不要用于干细胞，？2、Gibco得南美胎牛血清？这款血清，就是G ibco针对Hy clo n e南美胎牛血清做得，价格比较贵，好像就是1780元/ 5 00m。3、Gc mini得胎牛血清 4、TCE得胎牛血清 5、P A A得胎牛血清6?、JR H澳洲胎牛血清第四类，国产得各种系列胎牛血清？国产得胎牛血清，国内没有严格意义得胎牛血 清,胎牛血清本身就是需要穿刺取血得，而国内都就是剖腹产出胎牛,8小时左右取 血，然后，进行过滤分装.所以，国产得胎牛血清不就是严格意义得胎牛血清。？价格便宜但就是遇到得问题非常多。H y C lone液体培养基普通液体培养基列表描述1货号包装储存温度BM E

42、培养基(Basal M e di urn Eagle)EBSS*，含L谷氨酰胺。 S H 3 0157、0 1500 ml2 -8 °OSH3 0 157、021 0 0 0 m l2-8°CD ME M 培养基(D ul becco ' s Mo di f ied Eag l e' s MecU m )高糖，含4、0 mM L 谷氨酰胺，不含丙酮酸钠。 SH300 2 2、01B5 0 0 ml2- 8 °C SH 30 0 22、FS6 x 5 00 ml2 8°CSH 3 0022、02B100 0 ml2 -8 °CSH

43、300 2 2、L S6 x 10 0 0 ml2 8°C高糖，不含L谷氨酰胺与丙酮酸钠。 SH3 0 0 8 1、01500 ml2 8°CSH30081、FS6 X 500 ml2-8°C SH 3 0081 >0 21 0 0 0 ml2 8°CSH 30 0 8 1、L S6x 10 00ml2 8°CO S H30081、 0320 L袋装2-8°CO SH 3 0081、0410 L袋装28°CSH 30 2 43、01B5 00 ml2 -8 °高糖，含4、0 m M L 谷氨酰胺、丙酮酸钠.S

44、 H3 0 243、FS6 x 50 0ml2 8°CS H3 0 2 43、021 0 00 m l6X100 0 m l2 8 °S H30 2 4 3、 IS2 8°C1OSH30 2 43、031 0 L袋装2 -8 °COSH 3 02 4 3、0 420 L袋装2-8 °高糖，含L谷氨酰胺、HE P ES,不含丙酮酸钠。SH30249、 01500 ml2 8°CS H30249、 02100 0 ml2 8°C高糖，不含钙、镁。SH30262、0 1500 m l2-8 °COSH30262、0210

45、0 0 ml2 8°C高糖，含L谷氨酰胺,不含酚红与丙酮酸钠。S H302 8 4、015 0 0 m l2 8°CSH 3 0 284、0 2100 0 ml2 8°C高糖，含丙酮酸钠，不含L-谷氨酰胺。S H 3 0285、0 1500 ml2 -8 °SH3 0 2 8 5、F S6 x 500 ml2-8 °CSH30 2 85、02100 0 m 12 8°CSH30285、 LS6 x 1000 ml2 8°COSH302 8 5、0320 L袋装2 - 8°COSH 3 0 285、0 41 0 L袋

46、装2 8 °高糖,改良型,不含酚红、丙酮酸钠、L -谷氨酰胺。OSH 3 05 85、0 1500 ml2-8 °CSH3 0 5 85、02100 0 ml2-8 °高糖,改良型,不含酚红、L 谷氨酰胺，含丙酮酸钠.SH3 0 604、0 1500 m l2 8°CSH30 6 0 4、0 21000 ml2 8 °C高糖，含丙酮酸钠，不含L-谷氨酰胺、甲硫氨酸、胱氨酸。OSH3 0 6 0 6、0150 0 ml2-8 °OSH 3 0 606、021 00 0 ml2 8°C高度改良，含丙酮酸钠、25 m M HEPE

47、S,不含L-谷氨酰胺。OSH30563、0 150 0 ml2-8°COS H3 0 5 6 3、021 0 00 ml2 8 °高糖，含丙酮酸钠，不含L 谷氨酰胺、磷酸盐.OSH306 0 7、015 0 0 ml2 8 °C低糖，含4、0 mM L 谷氨酰胺、1 1 0 mg丙酮酸钠。SH 30 0 21、0 1 B500 ml2 8°CSH 3 0 021、FS6 x 500 ml2 8°CSH3002 1、021000 ml2 8°C含 2、50 mM L-谷氨酰胺、1 5 mM H EPES。S H30023、 01 B50

48、0 ml2-8 °SH 3 0023、F S6 X 50 0m l2 -8 °CSH 3 00 2 3、021000 ml2-8 °C含H E PES不含L 谷氨酰胺。S H 3 012 6、0150 0 m l2 -8 CS H 3 0 12 6、F S6 x 5 0 0 ml2 8°COSH30126、 021 0 0 0 m 12 8°C含L-谷氨酰胺、H EPES、丙酮酸钠。S H30261、0 15 0 0 m l2 8°CSH 3 0 2 6 1、0 21000 m l2 8°C含L-谷氨酰胺，不含H EPE S

49、oSH3 0 2 7 1、0 1500 m l2 8°CSH3 0 2 7 1、F S6 x 5 0 0 ml2 8°CSH30 2 71、021000 ml2 -8 C含L 谷氨酰胺，不含HE PE S、酚红。SH302 7 2、 0 1500 ml2 8°CSH30272、0 21 0 0 0 ml2 8°CH a m"s 培养基(Ham s N utrient M i x t ure)F 10培养基，含L 谷氨酰胺。S H3 0 0 2 5、0150 0 m l2-8 °OSH30025、 02100 0 m 12 8°

50、;CSH300 2 6、01 B500 ml2 8°CF12培养基，含1、00 m M L 谷氨酰胺。,1XSH300 2 6、F S6 x 50 0m 128 °CS H3 0 0 26、021000 ml2- 8 °CF 12培养基，Ka i ghn"s改良型。SH3 0 526、0 150 0 ml2 8°COSH30 5 26、021 0 0 0 ml2-8 °昆虫培养基(1 n sect Me dl a)Grace ”无添加剂培养基OS H30 6 1 0、01500 ml2 8°COSH3061 0、021 0

51、0 0 ml2 8°CTNM FH培养基SH3 0 2 8 0、0 25 0 0 m l2 8°CSH3028 0、0 3100 0 m l2- 8 °CI MDM 培养基(Is c ove” sMo dified D u lb e cco"s M ed i u m )含L 谷氨酰胺、HEPES,不含a硫代甘油.SH 30228、0 1B50 0 m l2 -8 °SH 3 0 2 2 8、FS6 x 5 0 0 m12-8 °CSH302 2 8、021 0 00 ml2 8°C不含L 谷氨酰胺.SH 3 02 5 9、0

52、1500 m 12 8°CSH 3 02 5 9、02100 0 ml2 8°C_eibovitz 培养基(Le i b ovi tz M ed i u m)-15培养基，含2、0 5 mM L谷氨酰胺。SH30525、 0150 0 m 12 8°CSH30 5 25、0 21000 ml2 8°CM199 培养基 (Medi um 199)EBSS*，含 L -谷氨酰胺.SH 3 0 253、0 1 B5 00 ml2 8°COSH30253、F S6 x 50 0m l2-8 °CSH3025 3、021 0 00 ml2 -8

53、 °H BSS*，含L 谷氨酰胺.OS H30 2 33、01100 m l2 8°COSH 3 023 3、0 250 0 ml2 -8 °HBSS*，含L -谷氨酰胺、L 氨基酸。OSH3033 0、 0150 0 m l2 8°COSH30330、 02100 0 ml2 8°CMcCoy"s 5A 培养基(McC o y” s 5 A Med lum )含L-谷氨酰胺。SH 3 02 0 0、0 1500 ml2 8°CSH 3 0 2 00、FS6 x 5 00 ml2 8°CS H3020 0、0 21000 m l2 8°C含L-谷氨酰胺，不含酚红。SH30270、0 1500 ml2 8°COS H3 0 270、02100 0 ml2- 8 °C含L 谷氨酰胺、H EPES.OSH 30 6 0 2、0 15 0 0 ml2 8 °OSH 306 0 2、0 21 0 00 m l2- 8 °COSH30602、 03100 ml2 8°CMEM 培养基(M i nim u m E ss